HQ Pigmentos

Histoqumica de Pigmentos
T.M. ADOLFO ANTONIO ROS-ALCORTA

En este captulo veremos
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Tipos de Pigmento
Relevancia Clnica Tarea

Identificacin Tarea Tarea
Grupo
1
Tarea Tarea
Tarea
PIGMENTOS. DEFINICIN
Qu son los pigmentos?
Sustancias coloreadas de origen muy diverso
Suelen hallarse en clulas y tejidos
Estas sustancias pueden plantear interrogantes de relevancia diagnstica

Similitud de color ( pardo) que muchos de ellos comparten
Es frente a esta situacin donde cobra gran valor la diferenciacin Histoqumica.
CITOQUMICA
Estudio de la composicin qumica de las clulas

PIGMENTOS
CIENCIA DE LOS COLORANTES, PIGMENTO: SUSTANCIA BLANCA O COLOREADA INSOLUBLE
PUEDE SER SUSPENDIDA EN UN LQUIDO PARA SU APLICACIN A UNA SUPERFICIE (PIGMENTUM LATINO, PINTURA)
O INCORPORADA EN UN MATERIAL SLIDO TAL COMO PLSTICO, CAUCHO O CERA.
CARBN (TINTAS INDIAS E IMPRESORAS, Y CAUCHO9
DIXIDO DE TITANIO (PINTURA BLANCA)
EN BIOLOGA: INCLUYE MATERIALES INSOLUBLES COLOREADOS O VISIBLES EN VIRTUD DE SER REFRACTARIOS O BIRREFRINGENTES.
PIGMENTOS VEGETALES (APORTAN DIFERENTES TONALIDADES VERDOSAS)
CLOROFILA
ANTOCIANINAS
CAROTENOIDES
SOLUBLES EN ALCOHOL Y AGUA
NO SE VEN EN SECCIONES DE PARAFINA.

PIGMENTOS ANIMALES
HEMOGLOBINA
METALOPROTENA COLOREADA PORTADORA DE OXGENO DE LA SANGRE
INSOLUBILIZABLE MEDIANTE FIJACIN
PROTENA BSICA CON ALTA AFINIDAD TINTORIAL POR COLORANTES
ANINICOS COMO EOSINA.
EN LA PATOLOGA, SE ENCUENTRAN FRECUENTEMENTE DEPSITOS
INSOLUBLES ANORMALES, AMARILLOS, MARRONES O NEGROS SIN
MANCHAS, Y NO MANCHADOS DE FORMA DISTINTA CON H & E.
LOS PIGMENTOS DESEMPEAN UN PAPEL IMPORTANTE EN EL

DIAGNSTICO DE ENFERMEDADES Y AFECCIONES COMO GOTA, RIN Y
CLCULOS BILIARES, ICTERICIA, MELANOMAS, ALBINISMO, HEMORRAGIA Y
TUBERCULOSIS.
EN UNA SECCIN DE TEJIDO, EL TRMINO PIGMENTO SE REFIERE A UN

MATERIAL QUE TIENE COLOR Y SE PUEDE VER SIN TINCIN. PUEDE SER
NORMAL O PATOLGICO.
LOS PIGMENTOS SE IDENTIFICAN POR SU COLOR, TAMAO Y FORMA
O POR PRUEBAS QUMICAS.
POR EJEMPLO, SI UNA PRUEBA QUMICA QUE DA UN PRODUCTO AZUL

SE APLICA A UN PIGMENTO AMARILLO, EL RESULTADO PUEDE SER UN
COLOR VERDE.
LOS PIGMENTOS SE PUEDEN CLASIFICAR EN TRES CATEGORAS:

ARTEFACTOS DE FIJACIN, EXGENOS Y ENDGENOS (TABLA 1).
CLASIFICACIN DE PIGMENTOS
Segn su estructura molecular
I) Pigmentos derivados del metabolismos de la Tirosina y del Triptofano:MELANINA Y

CROMAFINES.
II) Pigmentos derivados del grupo pirrlico: PORFIRINAS; HEMOGLOBINA;HEMOSIDERINA;

BILIRRUBINA; HEMATOIDINA; PIGMENTO MALRICO;PIGMENTO FORMOLADO.
III) Pigmentos lipdicos: LIPOFUCSINA ; CEROIDE.
IV) Carotenoides
Diferenciacin segn Localizacin
Pigmentos intracelulares
Pigmentos extracelulares
NATURALEZA DE LOS PIGMENTOS
Segn su naturaleza pueden ser
Artefactos introducidos generalmente por la tcnica empleada (p.e., un fijador a base de mercurio producir un
precipitado pigmentado)
Asociados a efectos del fijador: Aunque este no deje precipitados puede alterar las sustancias internas (p.e.,
material sanguneo para producir pigmentos como el pigmento formolado)
Pigmentos endgenos: Forman parte de los procesos biolgicos o patolgicos; sern nuestro foco de
atencin
Pigmentos exgenos introducidos desde el exterior e incorporados al organismo, ejemplo de ello es la

antracosis (carbn acumulado en pulmones y ganglios) as como el pigmento de los tatuajes que queda
incorporado en los macrfagos de la piel.
PIGMENTOS PRODUCIDOS POR ARTEFACTOS
PIGMENTO FORMLICO O FORMOLADO
Pigmento fundamentalmente extracelular

Producido por interaccin principalmente de la formalina cida (habitualmente a pH 3.0-4.0) en tejidos hemorrgicos o muy congestivos
Estara relacionado con las hematenas (es de origen hemtico)

Se desconoce su estructura
No tiene fierro, por lo que no sera equivalente a la hemosiderina que s tiene fierro, aunque es derivado de la interaccin con los GR
IMPORTANCIA: Debe ser reconocido para no confundirlo con otros pigmentos y extraerlo si es necesario
IDENTIFICACIN
nica forma de identificarlo:

No se tie con otros mtodos (no da otras reacciones)
Es birrefringente con luz polarizada
Extraccin: Alcohol-cido pcrico o Bouin por algunos minutos

Desaparece
Prevencin: Utilizar formalina neutra o tamponada

Microfotografas de
pigmento formolado
rea hemorrgica:
Campo Claro: Zonas ms oscuras
de color caf a negro
Luz polarizada: Birrefringente
PIGMENTO MALRICO
Pigmento intracelular de importancia clnica

Malaria: Enfermedad infecto-contagiosa de gran predominio mundial.
En Chile no hay focos locales pero se han reportado casos de pacientes que migran desde territorio malrico
Mueren millones de personas al ao.
Pigmento especial muy particular parecido al pigmento formolado, aunque menos soluble.
Hemazona, que se forma en el interior de glbulos rojos que contienen el Plasmodium falcparum u otros plasmodium
por interaccin de stos con la Hb
Plasmodium al parasitar los glbulos rojos detoxifica las molculas heme que contienen hierro formando un compuesto
polimerizado.
IDENTIFICACIN
Se ha observado tambin en fagocitos que han incorporado glbulos rojos infectados.
Remocin: Tratamiento con Alcohol-cido pcrico, ms prolongado que para pigmento formolado.
Microfotografa de
pigmento malrico
Eritrocitos nucleados de ave, y

macrfagos
Pigmento de color pardo oscuro
(indicado con flechas).
Relevancia diagnstica: Si se le
encuentra en un frotis sanguneo debe
sospecharse inmediatamente
Siempre est presente, aun cuando no
se observe el parsito.
PIGMENTOS ENDGENOS
HEMATINA
Producto de la autlisis de los hemates
Se forma y acumula en rganos congestionados y que es captada por las clulas del S.R.E.
IMPORTANCIA CLNICA
Esto sucede con el pigmento paldico que aparece en el paludismo o malaria.
Al parecer, el Plasmodium destruye los hemates y la degradacin de la hemoglobina no libera

hierro, sino que produce un pigmento negro sucio (similar al pigmento formlico) que se fija en
las clulas de Kupffer.
PIGMENTO POR DEPSITO DE MERCURIO
Fijadores a base de cloruro de mercurio producen depsito de precipitado

granulado pardo oscuro o grisceo o grumos sobre el tejido
IMPORTANCIA: Se asocia a la precipitacin de mercurio de fijadores como

Zenker o Helly, sobre los tejidos
EXTRACCIN
Extraccin: Oxidacin con yodo

Forma yoduro de mercurio
ste se remueve luego mediante el uso de tiosulfato de sodio
Microfotografa de
pigmento por uso de
fijador a base de
mercurio
PIGMENTO POR DEPSITO DE DICROMATO
Pigmento formado por depsitos de dicromato de potasio durante la fijacin
Se forma cuando los tejidos no son lavados adecuadamente despus del uso de este
tipo de fijadores
Las sales de cromo que reaccionan con alcohol forman precipitado de tonalidad
amarillo parduzca en los tejidos
Extraccin: Tratamiento con HCl 1% en alcohol 70% por 30 minutos

PIGMENTOS ENDGENOS
ORIGEN
Hemtico
Cadena respiratoria: Fundamentalmente relacionados con la hemoglobina.
CLASIFICACIN
Tipo porfirinas
Porfirinas
Hemoglobinas: No existen mtodos especficos histoqumicos de deteccin de stas porque
los reactivos disponibles destruyen los tejidos, slo se detecta por su coloracin tpica.
Citocromos
Mioglobina
PIGMENTOS ENDGENOS
CLASIFICACIN
Metaloprotenas no porfirinas
Con hierro: Hemosiderina.
Con cobre: Ceruloplasmina (circulante); acumulacin de cobre.
Pigmentos biliares: Importantes por su presencia en patologas
Bilirrubina
Biliverdina
Urobilina
Estercobilina
CLASIFICACIN
Melaninas: (Melaninas cutneas, Neuromelanina, Melanina retinal)

Pigmentos importantes para nuestra adaptacin al ambiente, pues ha facilitado nuestra
supervivencia a las radiaciones, especialmente a las UV.
PIGMENTOS ENDGENOS
CLASIFICACIN
Lipopigmentos: Pigmentos producidos por desgaste

Con hierro
Sin hierro
Lipofuscinas
Ceroides
intracelulares, de color pardo-amarillento en granitos de tamao variable (pequeos) que seran el resultado
de la oxidacin de lpidos y lipoprotenas.
Tambin se les llama pigmento de desgaste producindose a todas las edades acumulndose en el tiempo
Se observan en: hepatocitos, miocardio, neuronas, corteza suprarrenal (zona reticulada), clulas
intersticiales del testculo (testculo tiene parnquima de color pardo).
CLASIFICACIN

Pigmentos importantes para nuestra adaptacin al ambiente, pues ha facilitado nuestra supervivencia a las
radiaciones, especialmente a las UV.
PIGMENTOS ENDGENOS
PIGMENTOS BILIARES
Sustancias pigmentadas derivadas de la destruccin de glbulos rojos y el catabolismo de la

hemoglobina (normal o patolgico como en las prpuras (sndromes hemorragparo mltiple) o
en cuadros de rechazo).
Entre estos se incluyen: bilirrubina (conjugada con glucuronato y no conjugada), biliverdina y
hematoidina.
Se observa normalmente en la bilis y en procesos patolgicos que afectan la excrecin normal
de estos compuestos por el sistema biliar por hemlisis o por obstruccin de las vas biliares
Normalmente la bilirrubina acta como coadyuvante de la digestin o como parte de los
pigmentos de las heces.
CLASIFICACIN

Pigmentos importantes para nuestra adaptacin al ambiente, pues ha facilitado nuestra
supervivencia a las radiaciones, especialmente a las UV.
PIGMENTOS ENDGENOS
METABOLISMO DE LA HEMOGLOBINA
Sntesis de hemoglobina a partir de precursores que parten desde porfobilingeno hasta el grupo hem y la
hemoglobina.
A partir de hemoglobina, y por un proceso catablico, se libera el hierro que es recuperado para ser empleado
nuevamente en la sntesis de eritrocitos
Queda libre el grupo hem, que se puede abrir, como veremos a continuacin, transformndose en biliverdina y
por reduccin de ste en bilirrubina, que puede ser transportada en sangre por albmina hasta el hgado donde
es capturada y conjugada, hacindose ms hidrosoluble y luego eliminada por las vas biliares como bilis.
En las vas biliares puede estar como bilirrubina o biliverdina si est oxidada, o bien transformarse en
urobilingeno y ser reutilizado por dilisis o pasar a uro o estercobilina para ser excretado por intestino (estos
pigmentos biliares transformados son los que dan el caracterstico color pardo a las heces).
CLASIFICACIN
a
Hemoglobina (Hb):
Esquema general
Grupo Hem:
Un grupo terapirrlico (es decir, formado
por 4 grupos pirroles)
Un ncleo central de hierro (grupo Hem)
Grupo Hem est unido a la protena

globina que est unida en el sentido
planar de la molcula de Hem.
Cuando se genera bilirrubina se retira el
hierro, se separa la globina y el anillo
tetrapirrlico se puede abrir quedando
una molcula lineal (biliverdina)
Biliverdina se diferencia de la bilirrubina
por la presencia de un par de hidrgenos
Mientras la biliverdina est oxidada, la
bilirrubina est reducida.
Esto es importante porque una forma de
identificarlo es mediante esta reaccin.
UTILIDAD CLNICA
Diagnstico de procesos patolgicos:

Cirrosis biliar: grandes acmulos de pigmento biliar
Dao en el parnquima heptico con acumulacin de pigmentos en grandes cantidades por una
obstruccin del sistema biliar; puede haber tenido una obstruccin crnica de cualquier
segmento del sistema biliar desde el coldoco hasta la ampolla de Vater en duodeno, siendo un
proceso crnico que lleva a la acumulacin retrgrada de pigmento, aumento de la presin en
los vasos y conductos biliares, con el consecuente dao al parnquima heptico que puede
llegar a una cirrosis o un estado reparativo nodular distinto a la cirrosis comn, con
micromdulos pero con gran acumulacin de pigmentos (de hecho el hgado en la foto se ve
verde oscuro).
Cirrosis biliar
PIGMENTOS PRODUC IDOS POR ARTEFACTOS
Pigmento formlico




Desaparece
Prevencin: Utilizar formalina neutra o tamponada.
Pigmento formlico




Desaparece
Resumen de la reactividad de los
pigmentos biliares con diferentes
mtodos histoqumicos (el color que
dan).
La reaccin de Raia es equivalente
a la de van der Berg.
Adems, se muestra una tabla de
comparacin entre los distintos
mtodos y pigmentos que
estudiamos, que se tom de Zugibe.
Cabe recordar que los grnulos
cromafines, no corresponden a
pigmentos, sino a componentes del
sistema APUD (enteroneuroendocrinos),
que son ms bien detectados por IHQ,
que no se ven con tinciones corrientes,
dada su naturaleza hormonal.
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmentos
Endgenos
OTROS PIGMENTOS ENDGENOS
LIPOPIGMENTOS
LIPOFUSCINA
CEROIDES
CARACTERSTICAS
Intracelulares, de color pardo-amarillento en granitos de tamao variable (pequeos)
Resultado de la oxidacin de lpidos y lipoprotenas.
Tambin llamados pigmentos de desgaste
Se producen a todas las edades, acumulndose en el tiempo

Se localizan en: hepatocitos, miocardio, neuronas, corteza suprarrenal (zona reticulada), clulas intersticiales
del testculo (testculo tiene parnquima de color pardo).
Pigmentos heterogneos (en cantidad y composicin), al parecer dependiendo del grado de oxidacin (mayor
antigedad) que posean sus componentes.
Lipofucsina (lipocromo,pigmento de usar o tirar, o
pigmento de envejecimiento, pigmento de desgaste)
Insoluble, compuesta de: Deriva de la peroxidacin

polmeros de lpidos y lpidicas de los lpidos No es lesiva para las clulas y
fosfolpidos, unidos en poliinsaturados de las sus funciones
complejos con protenas. membranas subcelulares
LIPOFUSCINA
Pigmento de desgaste, de color pardo-amarillento con fluorescencia propia
Compuesto por polmero de lpidos y fosfolpidos, derivados de la peroxidacin de los lpidos

poliinsaturados de las membranas subcelulares.
IMPORTANCIA CLNICA
Es un signo de vejez celular originado por la accin de los radicales libres.
Es normal y no patolgico observarla en preparaciones histolgicas de tejido cardaco (en el cono

sarcoplsmico de la fibra muscular), hgado y tejido neuronal (en el soma de las neuronas)
Clulas sin capacidad de regenerarse debido a su alto grado de especializacin.
Pacientes de edad avanzada: Torna las vsceras de color pardo y disminuye su volumen (atrofia parda).
Lipofucsina
Signo delator de lesin por radicales libres y peroxidacin lipdica
Corte histolgico: pigmento finamente granular amarillo-marrn,

intracitoplasmtico, a menudo perinuclear.
Observado en : clulas sometidas a cambios regresivos lentos (hgado y corazn)

Lipofucsina, Hgado
Corte histolgico de hgado, con

granulaciones variables, desde
puntos pequeos a grandes
La vscera tiene su volumen

reducido, consistencia firme y
coloracin parda oscura.
Microscpicamente presenta
grnulos de ese color en el
citoplasma de los hepatocitos.
Lipofucsina, corazn
Corte histolgico de corazn teido

con H-E en que se ve el pigmento
tambin, con rea de infarto, fibras
normales y lipofuscina
El pigmento se deposita a nivel

perinuclear en los miocardiocitos, as
como en sus discos intercalares. Al
microscopio electrnico se observan
grnulos agrupados en rosetas y
rodeados de una membrana simple,
con enzimas en su interior.
Lipofuscina, corazn
Preparacin con H-E con

disposicin polar de los grnulos de
lipofuscina
En ancianos el corazn se ve pardo,

flccido
El trmino lipofuscina proviene de la
atrofia fusca (caf)
Lipofuscina
Depsito en epitelios: A nivel de las
clulas de los tbulos contorneados
del rin, glndulas salivales,
conductos del epiddimo y
testiculares...
PIGMENTOS ENDGENOS
CEROIDE
Fue considerado separadamente (Lillie et al. 1941 y 1942) porque no

da la reaccin de Schmorl con ferricianuro frrico (menos oxidado)
Actualmente se piensa que los ceroides son lipofuscinas menos

oxidadas (Pearse, 1960).
PIGMENTOS ENDGENOS
REACCIONES HISTOQUMICAS TILES
Sudan black B post inclusin en parafina (por ello se llaman lipopigmentos, dan reacciones
para lpidos)
Schmorl (variable)
PAS (variable)
Ziehl-Neelsen (tambin tpicas; es alcohol-cido resistente, captura al colorante y resiste el

tto. con alcohol- cido.
Microfotografa de
Hgado afectado por
aflatoxina
Pigmento ceroide (flechas) dentro

de macrfagos
Melanina
Tirosinasa cataliza la
oxidacin: tirosina a Es el nico pigmento
No derivado de la Hb, marrn-negro.
dihidroxifenilalanina en los endgeno marrn-negro
melanocitos
PIGMENTOS ENDGENOS
MELANINA
Pigmentos importantes para nuestra adaptacin al ambiente, pues ha facilitado nuestra supervivencia a las radiaciones,
especialmente a las UV.
Pigmentos especiales que capturan y absorben prcticamente todo el espectro de luz visible y por ende, al estar localizado
en piel nos protege de las radiaciones solares.
Las personas que carecen de estos pigmentos como los albinos, son muy susceptibles a desarrollar cnceres de piel.
Localizacin
Melaninas cutneas,
Unin Dermo/Epidrmica
Folculos pilosos
Neuromelanina
Melanina ocular
Melanina retinal
Melanina iridal
PIGMENTOS ENDGENOS
FUNCIONES DE LA MELANINA
Proteccin ante radiacin UV

Personas morenas son menos susceptibles a cncer de la piel
IMPORTANCIA CLNICA
Cncer de piel (Carcinoma basocelular, Carcinoma espinocelular, Melanoma)
Por efectos del sol se da en zonas ms expuestas: cara, manos, mamas, mejillas
Afortunadamente benignos en su mayor parte (carcinoma basocelular, espinocelular)

Consecuencia directa de la radiacin solar.
PIGMENTOS ENDGENOS
ALCANCES CLNICOS
Piel de la cara: degeneracin basoflica del tejido conjuntivo en la dermis

Tejido conjuntivo pierde su estructura y se transforma en una masa parecida a amiloide, cambio producido por
efecto del sol (elastosis solar)
Mayores de 30 aos: Observar la diferencia con la piel de otras zonas

Cara tiene dermis muy afectada, ms evidente esto en personas de tez blanca que en morenos (tienen una
evolucin mejor respecto a la exposicin a radiacin solar)
FACTOR TNICO
Razas blancas se desarrollaron aparentemente en reas menos expuestas al sol (Europa, Norte de Europa,
zonas ms fras)
Razas de color lo hicieron en zonas ms clidas, expuestas al sol (frica)*
Actualmente hay una gran mezcla racial por la globalizacin

Existe diversidad de individuos en todas partes, lo que nos expone ms a desarrollar tumores; las melaninas,
es el factor natural de proteccin solar.
CELULAS EPIDERMICAS.
2.- MELANOCITOS.
Alrededor del 8% de las clulas epidrmicas son MELANOCITOS, un aspecto a resaltar es que
producen el PIGMENTO MELANINA. Sus largas y delgadas proyecciones se extienden entre los
QUERATINOCITOS y les transfieren grnulos de MELANINA.
Gracias a la MELANINA que es un pigmento de color AMARILLO-ROJIZO o PARDO-

NEGRUZCO que le otorga color a la piel y absorbe los RAYOS ULTRAVIOLETAS (UV)
nocivos.
GRANULO DE MELANINA
MELANOCIT
O
PIGMENTOS ENDGENOS
MELANINA
Existen varios tipos de melanina, por su ubicacin, reactividad y otras

caractersticas.
VARIANTES DE MELANINA
Adems de las melaninas cutneas, existen neuromelanina, que confiere un

color al cuerpo oscuro en el cerebro, tambin presente en coroides; tambin hay
melaninas retinales e iridales (responsables estas ltimas del color de la pupila
ocular).
Pese a no tenerse claridad respecto de la composicin de la melanina, s se sabe

cul es el proceso de la melanognesis.
PIGMENTOS ENDGENOS
MELANOGNESIS
En trminos generales se sintetiza a partir de tirosina por accin de la dihidroxifenilalanina oxidasa (DOPA oxidasa)
Se forma fenilalanina a partir de tirosina por accin de DOPA oxidasa.
Esta misma enzima acta sobre fenilalanina formando un pigmento intermedio
A continuacin este pigmento intermedio es transformado en melanina, cuya estructura es caracterstica
Los grnulos de melanina que permanecen en citoplasma y que estn rodeados, habitualmente, por membranas.
VARIANTES DE MELANINA
Adems de las melaninas cutneas, existen neuromelanina, que confiere un color al cuerpo oscuro en el cerebro,
tambin presente en coroides; tambin hay melaninas retinales e iridales (responsables estas ltimas del color de la
pupila ocular).
Pese a no tenerse claridad respecto de la composicin de la melanina, s se sabe cul es el proceso de la

melanognesis.
PIGMENTOS ENDGENOS
MELANOGNESIS
A partir del RE se forman las membranas que

van a rodear finalmente los grnulos de
melanina
stos dan inicialmente origen a vesculas que

luego quedan llenas de pigmento, que a M.E. se
ve como sigue:
PIGMENTOS ENDGENOS
MELANOGNESIS
Dentro de este grnulo se encuentra polimerizado (en alguna forma) este pigmento de color caf que es la
melanina.
Estos grnulos pueden ser traspasados de una clula a otra, lo que ocurre en melanocitos (clulas de la piel
que tienen la DOPA oxidasa y por ende son capaces de producir la melanognesis)
Los melanocitos pueden traspasar estos grnulos de pigmento a otras clulas vecinas (epiteliales de la
epidermis, algunas de ellas, especialmente en las capas basales, estn llenas de melanina)
Tambin pueden traspasarlas a clulas con caractersticas fagocticas, los melanfagos o melanforos (del Gr.
Phoros: portador de), que no generan melanina.
ORIGEN EMBRIOLGICO DE LOS MELANOCITOS
Los melanocitos son de origen embriolgico neuroectodrmico, lo que se sabe por su inmunofenotipo.
Comparten la reaccin de S-100 (marcador tpico de tejido neuroectodrmico)
PIGMENTOS ENDGENOS
IMPORTANCIA CLNICA
Relevancia patolgica:
Albinismo: Condicin congnita en que hay ausencia de pigmentacin generalizada, en piel, en folculos pilosos, y con nula o
escasa pigmentacin iridal y retiniana
Bitiligo: Ausencia de melanina en reas focales, zonas blancas de piel desprovistas de melanina en un individuo de coloracin
normal
Diverso origen: psicosomtico, en individuos con ciertas caractersticas de personalidad, en quienes la aparicin de bitligo crea
un crculo vicioso (se siente socialmente inhibida por sus manchas y ms aparecen); secundarios a inflamaciones locales u
otras lesiones.
En biopsias puede ser necesario evaluar la presencia de melanina y de melanocitos.
LESIONES TUMORALES
Melanoma: Tumor maligno relacionado con la exposicin al sol

Simula otros tumores
Da metstasis difciles de diagnosticar
En su sitio primario de origen no es difcil de identificar morfolgicamente, pero en metstasis es muy difcil.
PIGMENTOS ENDGENOS
MTODOS DE IDENTIFICACIN Y ESTUDIO
Melaninas parecen estar firmemente unidas a protenas

Son muy difciles de extraer (se ve fcilmente en cortes pasados por xilol, alcoholes, fijadores), a
menos que se utilicen agentes cidos que destruyen los tejidos.
Se pueden decolorar con agentes oxidantes : H2O2, KMnO4, HCl, FeCl3, cido ascrbico y clorato de
potasio
Son insolubles en solventes orgnicos, mientras que tienen buena solubilidad en NaOH 1N.
MELANOMAS
Tambin es necesario investigar el pigmento en lesiones tumorales, como por ejemplo el melanoma
(tumor maligno relacionado con la exposicin al sol), que simula otros tumores, y da metstasis difciles
de diagnosticar; en su sitio primario de origen no es difcil de identificar morfolgicamente, pero en
metstasis es muy difcil.
PIGMENTOS ENDGENOS
EJEMPLOS DE LESIONES PIGMENTARIAS DE PIEL
Las melaninas parecen estar firmemente unidos a protenas, por lo que son muy difciles de extraer (se
ve fcilmente en cortes pasados por xilol, alcoholes, fijadores) a menos que se utilicen agentes cidos
que destruyen los tejidos. S se pueden decolorar con agentes oxidantes como: H2O2, KMnO4, HCl,
FeCl3, cido ascrbico y clorato de potasio, son insolubles en solventes orgnicos, mientras que tienen
buena solubilidad en NaOH 1N.
INMUNOHISTOQUMICA
INMUNOFLUORESCENCIA
MELAN-A
HMB-45
Toda observacin de ncleos de melanocitos y estudio inmunohistoqumico en piel requiere utilizar

alguno de los mtodos de decoloracin arriba sealados.
Nevo azul
Lesin benigna (encapsulada)
Tiene su componente celular bastante dispersa

dentro del rea de encapsulamiento (lo que
podra conducir a pensar que es maligna)
No presenta clulas nvicas, sino una

acumulacin de melanocitos generalmente
fusiformes mezclados con melanfagos
(diferencia con nevo celular)*
Siempre se sita en profundidad en la dermis,

y forma un ndulo bilobular con clulas muy
alargadas, que casi siempre tienden a
disponerse en paralelo a la epidermis,
En clnica se ve como una mancha azul.

Melanoma
Melanoma Primario (si se manifiesta en

el lugar en que se sita)
Melanoma metasttico cuando aparece
en territorios diferentes o alejados
Evidentemente lleno de melanina

Diagnstico diferencial entre melanina o
hemosiderina, o melanfagos cargados
de melanina)
Debe tipificarse la clula y el pigmento.

Melanoma
amelantico
Melanoma amelantico
Diagnstico diferencial dificultoso, puede

confundirse con otras patologas
Metstasis de un tumor de clulas claras (ovrico,

renal, otro)
Generalmente los melanomas son amelanticos,

no producen melanina, por lo que representan un
serio problema pues se asemejan a los tumores
de clulas claras de ovario
No se podr demostrar la existencia de melanina

Debe tipificarse la clula para saber si se trata o
no de un melanocito.
PIGMENTOS ENDGENOS
MTODOS DE IDENTIFICACIN Y ESTUDIO
Existen 4 mtodos que se pueden emplear:
Mtodos de reduccin: Schmorl, Masson-Fontana. La melanina tiene capacidad reductora

por su estructura.
MASSON-FONTANA (Masson 1914; Fontana 1912):
El fundamento de esta tcnica es que la melanina es argentafin y como tal reduce

soluciones de plata amoniacal a plata metlica, sin necesidad de agentes externos. Los
cortes se incuban con solucin de plata amoniacal a t ambiente toda la noche en
oscuridad.
Posteriormente, se elimina la plata no reducida con tiosulfato.
Piel normal
Fontana-Masson
Micrografa de piel normal con reaccin

argentafin de melanina en la zona basal de
la epidermis hasta los estratos intermedios,
Bajo la epidermis se observa un grupo de
clulas nvicas muy teidas.
PIGMENTOS ENDGENOS
REACCIN DE SCHMORL
La melanina es capaz de reducir ferricianuro frrico a ferrocianuro frrico
Los cortes se incuban en una solucin que contiene cloruro frrico y ferricianuro de potasio y se forma un
precipitado de color azul semejante al azul de Prusia.
Otra caracterstica de la melanina es la capacidad de formar quelato con iones ferroso si stos le son
proporcionados, como ocurre en la reaccin de captura del ion ferroso de Lillie, que veremos a continuacin.
REACCIN DE CAPTURA DE ION FERROSO (Lillie, 1957)
Es uno de los mtodos ms sensibles para melanina
Se basa en la capacidad de las melaninas para formar quelatos con el hierro ferroso (sulfato ferroso) que
quedan capturados dentro del pigmento y se forma una melanina ferrosa
Posteriormente se incuban los cortes con ferricianuro de potasio formndose ferricianuro ferroso semejante a
azul de Turnbull.
Piel normal
Schmorl
a
Piel normal
Lillie
Micrografa de un nevo ctico o celular,

diferente al nevo azul; se ve la epidermis
normal con su melanina y un grupo de
clulas nvicas drmicas
PIGMENTOS ENDGENOS
REACCIN DOPA
Slo se menciona por razones histricas,
Demuestra la actividad de la enzima DOPA oxidasa, requiere el uso de una mezcla incubadora que contiene
D.L.3:4 dihidroxifenilalanina (DOPA) en buffer fosfato a pH 7.4
Se incuban cortes por congelacin sin fijar a 37C por 45 min a 2 horas, y las reas de actividad enzimtica se
observan de color pardo oscuro; se pueden hacer cortes por congelacin.
Otros mtodo usados como elementos diagnsticos tambin son aquellos que implican la decoloracin de la
melanina.
DECOLORACIN DE MELANINAS
Las melaninas se decoloran con agentes oxidantes, al parecer por ruptura de su anillo fenlico que tendra
dobles enlaces que le dan la caracterstica de color caf, que al hacer la oxidacin se perdera el cromforo de
la melanina; se pueden emplear:
PIGMENTOS ENDGENOS
DECOLORACIN CON PERXIDO DE HIDRGENO
Mtodo clsicamente utilizado: Tratando los cortes por varias horas se decoloran. Es de utilidad diagnstica para
identificar melanina, al igual que el cido ascrbico pues son especficos.
DECOLORACIN CON PERMANGANATO DE POTASIO
Permanganato de potasio: Puede aplicarse a 60 en estufa o en microondas; como inconveniente, decolora otros
pigmentos, por lo que no sirve para hacer diagnstico de melanina.
Sin embargo, la decoloracin que ocasiona puede ser til cuando se requiere ver todo lo que oculta la melanina o el
enmasacaramiento de cromgenos como DAB (de color similar a melanina) usados en IHQ, en que por ejemplo en el
caso de melanoma se requiere saber donde est la reaccin en clulas pigmentadas
Siempre hay que hacer la decoloracin antes de hacer la IHQ facilitndose la interpretacin de resultados
La decoloracin en perxido de hidrgeno puede tomar hasta 48 horas lo que vara para las diferentes melaninas; se
puede controlar la decoloracin.
No es necesario esperar que se decolore para hacer el diagnstico. Para caracterizar melanina se pone una lmina en
perxido y se hacen otras tcnicas.
Melanoma Primario
Melanoma amelantico
PIGMENTOS ENDGENOS
MTODOS NZIMTICOS
DOPA oxidasa (obsoleto)
IHQ: S-100, vimentina o antgenos especficos como el Melan-A que identifica melanomas y el HMB-45,
que tambin identifica melanoma y reemplazan a la DOPA.
Enzimohistoqumica para DOPA oxidasa: En el tumor de la imagen anterior, esta tcnica hubiera
permitido demostrar si era melanoma o no, pues si daba DOPA (+) significaba que estas clulas eran
melanognicas, es decir, tenan la maquinaria enzimtica necesaria para producir melanina aunque no
la estuviesen produciendo.
MELANOMAS
Tambin es necesario investigar el pigmento en lesiones tumorales, como por ejemplo el melanoma
(tumor maligno relacionado con la exposicin al sol), que simula otros tumores, y da metstasis difciles
de diagnosticar; en su sitio primario de origen no es difcil de identificar morfolgicamente, pero en
metstasis es muy difcil.
cido homogentsico
Pigmento negro que ocurre en pacientes con alcaptonuria

Se deposita en la piel, tejido conectivo y cartlago
La pigmentacin se llama: Ocronosis
Hemosiderina
Derivado de la Hb
Color amarillo dorado a marrn, granular o cristalino, en cuya forma el hierro

se almacena en las clulas
En las clulas se almacena asociado a una protena, la apoferritina, para

formar micelas de ferritina.
Cuando hay un exceso local o sistmico de hierro,la ferritina
forma granulos de hemosiderina
El pigmento hemosidernico representa agregados de micelas de
ferritina.
Hemosiderina
Pequeas cantidades: en los fagocitos mononucleares de la
mdula sea, bazo e hgado, todos ellos
comprometidos activamente en la degradacin de los hemates.
Bilirrubina
La bilirrubina es el pigmento normal ms importante que se encuentra en la
bilis.
Deriva de la hemoglobina pero no contiene hierro.
Su formacin normal y excrecin son vitales para la salud
La ictericia es un trastorno clnico frecuente producido por el exceso de este

pigmento en clulas y tejidos
Pigmentos Endgenos
CAROTENOIDES Y CLOROFILA
LIPOSOLUBLES
NO OBSERVABLES EN CORTE HISTOLGICOS
PIGMENTOS PROPIOS DE VEGETALES
SLO DE INTERS EN INVESTIGACIN DE BIOLOGA

CELULAR, BOTNICA Y CIENCIAS AGROPECUARIAS
OTROS ACMULOS
MINERALES
DEPSITOS DE CALCIO
Pigmento formlico




Desaparece
DEPSITOS DE COBRE
Pigmento formlico




Desaparece
Enfermedad de
Wilson
Pigmento formlico




Desaparece
Pigmento formlico




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Histoqumica de Pigmentos

T.M. ADOLFO ANTONIO ROS-ALCORTA

Agregue aqu la primera vieta

Agregue aqu la segunda vieta

Agregue aqu la tercera vieta

Relevancia Clnica Tarea

Qu son los pigmentos?

Sustancias coloreadas de origen muy diverso

Suelen hallarse en clulas y tejidos

Estas sustancias pueden plantear interrogantes de relevancia diagnstica

Es frente a esta situacin donde cobra gran valor la diferenciacin Histoqumica.

Estudio de la composicin qumica de las clulas

O INCORPORADA EN UN MATERIAL SLIDO TAL COMO PLSTICO, CAUCHO O CERA.

CARBN (TINTAS INDIAS E IMPRESORAS, Y CAUCHO9

DIXIDO DE TITANIO (PINTURA BLANCA)

PIGMENTOS VEGETALES (APORTAN DIFERENTES TONALIDADES VERDOSAS)

SOLUBLES EN ALCOHOL Y AGUA

NO SE VEN EN SECCIONES DE PARAFINA.

LOS PIGMENTOS DESEMPEAN UN PAPEL IMPORTANTE EN EL

EN UNA SECCIN DE TEJIDO, EL TRMINO PIGMENTO SE REFIERE A UN

POR EJEMPLO, SI UNA PRUEBA QUMICA QUE DA UN PRODUCTO AZUL

LOS PIGMENTOS SE PUEDEN CLASIFICAR EN TRES CATEGORAS:

Segn su estructura molecular

I) Pigmentos derivados del metabolismos de la Tirosina y del Triptofano:MELANINA Y

II) Pigmentos derivados del grupo pirrlico: PORFIRINAS; HEMOGLOBINA;HEMOSIDERINA;

III) Pigmentos lipdicos: LIPOFUCSINA ; CEROIDE.

Diferenciacin segn Localizacin

Segn su naturaleza pueden ser

Pigmentos exgenos introducidos desde el exterior e incorporados al organismo, ejemplo de ello es la

Diferenciacin segn Localizacin

PIGMENTO FORMLICO O FORMOLADO

Pigmento fundamentalmente extracelular

Estara relacionado con las hematenas (es de origen hemtico)

nica forma de identificarlo:

Extraccin: Alcohol-cido pcrico o Bouin por algunos minutos

Prevencin: Utilizar formalina neutra o tamponada

Pigmento intracelular de importancia clnica

Se ha observado tambin en fagocitos que han incorporado glbulos rojos infectados.

Eritrocitos nucleados de ave, y

Producto de la autlisis de los hemates

Esto sucede con el pigmento paldico que aparece en el paludismo o malaria.

Al parecer, el Plasmodium destruye los hemates y la degradacin de la hemoglobina no libera

PIGMENTO POR DEPSITO DE MERCURIO

Fijadores a base de cloruro de mercurio producen depsito de precipitado

IMPORTANCIA: Se asocia a la precipitacin de mercurio de fijadores como

Extraccin: Oxidacin con yodo

PIGMENTO POR DEPSITO DE DICROMATO

Pigmento formado por depsitos de dicromato de potasio durante la fijacin

Diferenciacin segn Localizacin

Extraccin: Tratamiento con HCl 1% en alcohol 70% por 30 minutos

Cadena respiratoria: Fundamentalmente relacionados con la hemoglobina.

Melaninas: (Melaninas cutneas, Neuromelanina, Melanina retinal)

Lipopigmentos: Pigmentos producidos por desgaste

Melaninas: (Melaninas cutneas, Neuromelanina, Melanina retinal)

Sustancias pigmentadas derivadas de la destruccin de glbulos rojos y el catabolismo de la

Melaninas: (Melaninas cutneas, Neuromelanina, Melanina retinal)

Grupo Hem est unido a la protena

Diagnstico de procesos patolgicos:

Diferenciacin segn Localizacin

Pigmento fundamentalmente extracelular

Estara relacionado con las hematenas (es de origen hemtico)

nica forma de identificarlo:

Extraccin: Alcohol-cido pcrico o Bouin por algunos minutos