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FERMENTACIN EN LOTE/TIPOS DE

CULTIVOS
HERNNDEZ GUILLERMO FTIMA
HERNNDEZ LUNA CRISTIAN ALEJANDRO
MUOZ LOPEZ YARENI
FERMENTACIN
TRANSFORMACIN DE SUSTANCIAS ORGNICAS, POR EFECTO DE
MICROORGANISMOS
FERMENTACIN EN LOTE

MICROORGANISMO DE INTERS INDUSTRIAL:

NO SER PATGENO

CRECER RPIDO EN MEDIOS DE CULTIVOS BARATOS

SINTETIZAR EL PRODUCTO DE INTERS CON ALTO RENDIMIENTO

SER SUSCEPTIBLE A LA MANIPULACIN GENTICA


METABOLITO PRIMARIO: SE FORMA DURANTE LA FASE DE CRECIMIENTO
EXPONENCIAL DEL ORGANISMO
MEABOLITO SECUNDARIO: SE FORMA CON FRECUENCIA CUANDO SE
AVECINA EL FINAL DE LA FASE EXPONENCIAL O DURANTE LA FASE
ESTACIONARIA
FERMENTADOR
EN LOS PROCESOS INDUSTRIALES, LAS FERMENTACIONES SE
LLEVAN A CABO EN UN REACTOR QUE SE CONOCE COMO
FERMENTADOR.
LOS FERMENTADORES A ESCALA INDUSTRIAL GENERALMENTE SE
FABRICAN DE ACERO INOXIDABLE.
5-10 L 500,000 L
LOS FERMENTADORES INDUSTRIALES SE PUEDEN DIVIDIR EN DOS TIPOS: LOS
QUE SE EMPLEAN EN PROCESOS ANAERBICOS Y LOS QUE SE UTILIZAN
EN PROCESOS AERBICOS.

LOS FERMENTADORES ANAERBICOS REQUIEREN POCO EQUIPAMIENTO


ESPECIAL, Y SLO PRECISAN DE UN MECANISMO QUE ELIMINE EL CALOR
GENERADO DURANTE LA FERMENTACIN.

LOS FERMENTADORES AERBICOS REQUIEREN UN EQUIPO MUCHO MS


COMPLEJO PARA GARANTIZAR EL MEZCLADO Y LA AIREACIN
ADECUADOS.
inoculo
CONTROL Y
SEGUIMIENTO
DE LA
FERMENTACIN
ESCALADO DE FERMENTACIONES
INDUSTRIALES
LA TRANSFERENCIA DE UN PROCESO DESDE LA PEQUEA ESCALA DEL
EQUIPO DE LABORATORIO HASTA UN EQUIPO COMERCIAL A GRAN
ESCALA.
EL PROCESO COMIENZA EN EL MATRAZ DE LABORATORIO CON UNA
OPERACIN A PEQUEA ESCALA QUE GENERALMENTE OFRECE
LOS PRIMEROS INDICIOS DE QUE UN PROCESO DE INTERS
INDUSTRIAL ES FACTIBLE.

EL PROCESO SE TRANSFIERE ENTONCES AL FERMENTADOR DE


LABORATORIO, UN RECIPIENTE A PEQUEA ESCALA,
GENERALMENTE DE VIDRIO Y CON UNA CAPACIDAD DE 1 A 10
LITROS.

LOS PRIMEROS ENSAYOS DE ESCALADO SE REALIZAN EN ESTE


FERMENTADOR DE LABORATORIO, DONDE TAMBIN ES POSIBLE
ENSAYAR VARIACIONES EN EL MEDIO, LA TEMPERATURA, EL PH,
ETCTERA, DE UNA MANERA RPIDA Y SIN GRANDES COSTES.
CUANDO LOS ENSAYOS EN EL FERMENTADOR DE LABORATORIO
TIENEN UN RESULTADO SATISFACTORIO, EL PROCESO PASA A LA
PLANTA PILOTO, DONDE SE REALIZA EN FERMENTADORES CON
CAPACIDADES DE 300 A 3.000 LITROS.
EN ESTE PUNTO, LAS CONDICIONES SE APROXIMAN MS A LAS
DEL FERMENTADOR COMERCIAL, AUNQUE EL COSTE
ECONMICO TODAVA NO ES UN FACTOR DETERMINANTE.

POR LTIMO, EL PROCESO PASA AL FERMENTADOR COMERCIAL,


QUE TIENE UNA CAPACIDAD DE 10.000 A 500.000 LITROS.
DURANTE TODAS LAS ETAPAS DEL ESCALADO, LA AIREACIN ES
UNA VARIABLE FUNDAMENTAL QUE EST SOMETIDA A UN
CONTROL ESTRICTO.
FERMENTACIN EN
LOTE

PROCESOS INDUSTRIALES DONDE ES


MICROORGANISMO ES LA PARTE ACTIVA DEL
PROCESO PRODUCTIVO
CONSIDERANDO LA CINTICA DE LA ENTRADA DE MEDIO
PODEMOS CLASIFICAR 3 TIPOS DE CULTIVO:

DISCONTINUO (O BATCH)
ALIMENTADO( O FED-BATCH)
CONTINUOS
CULTIVO DISCONTINUO O BATCH
TIPO DE FERMENTACIN MS HABITUAL.

AL INICIO DEL CULTIVO, EL MEDIO ESTRIL SE INOCULA CON UN


NMERO ADECUADO DE MICROORGANISMOS Y SE PERMITE QUE SE
LLEVE A CABO LA FERMENTACIN EN CONDICIONES PTIMAS.
SE INTERRUMPE EL PROCESO Y SE RECUPERA EL
PRODUCTO (ANTES DE LA FASE DE MUERTE), SE VACA EL
REACTOR, SE LIMPIA Y SE COMIENZA DE NUEVO
CONCENTRACIN DE BIOMASA POR UNIDAD
DE TIEMPO
X XR = S (SR S)
X = CONCENTRACIN CELULAR EN UN TIEMPO T
XR = INCULO O CONCENTRACIN CELULAR INICIAL
= RENDIMIENTO PARA EL SUBSTRATO LIMITANTE (G DE
BIOMASA POR G DE SUBSTRATO CONSUMIDO)
S = CONCENTRACIN DE SUBSTRATO EN EL TIEMPO T
SR = CONCENTRACIN INICIAL DE MEDIO
CULTIVO CONTINUO
D= FACTOR DE DILUCIN
F= VELOCIDAD DE INGRESO DEL
MEDIO FRESCO
V= VOLUMEN DE OPERACIN DEL
REACTOR
TURBIDOSTATO
SISTEMA DE FLUJO DE TAPN
LOTE ALIMENTADO
CULTIVOS ANAEROBIOS
MEDIOS DE CULTIVO PARA BACTERIAS
ANAEROBIAS

EL METABOLISMO ANAERBICO ES MENOS EFICIENTE QUE EL AERBICO


PARA LA OBTENCIN DE ENERGA

MEDIOS DE CULTIVO MS RICOS QUE LOS DE USO COMN PARA AEROBIOS O


ANAEROBIOS FACULTATIVOS

REQUIEREN UNA INCUBACIN MS PROLONGADA.

LOS MEDIOS EMPLEADOS PARA LA RECUPERACIN DE ANAEROBIOS DEBEN


INCLUIR TIPOS NO SELECTIVOS Y ENRIQUECIDOS.
MEDIOS DE CULTIVO NO
SELECTIVOS

SE EMPLEAN MEDIOS COMPLEJOS QUE LLEVAN:


HIDROLIZADOS DE CARNE, PEPTONAS, EXTRACTO DE
LEVADURA, HEMINA, VITAMINAS, ETC.

EL MEDIO REQUIERE SUSTANCIAS REDUCTORAS COMO


TIOGLICOLATO, GLUCOSA, CIDO ASCRBICO, CISTENA,
HIERRO, ETC.
EJ.
Medio Tioglicolato enriquecido (MTE)

Triptona 17 gr

Peptona de soja 3 gr

Dextrosa 6 gr

ClNa 0.5 gr

Tioglicolato de Na 0.5 gr

Agar 0.7 gr

L-cistena 0.25 gr

Sulfito de Na 0,1 gr

Hemina 5 gr

Solucin de resarzurina (0.01%) 4 ml

Agua c.s.p 1000ml

PH 7.0
MEDIOS DE CULTIVO SELECTIVOS

POR LO GENERAL LAS MUESTRAS A PROCESAR PARA EL AISLAMIENTO


DE MICROORGANISMOS ANAEROBIOS CONTIENEN MEZCLAS DE
ANAEROBIOS OBLIGADOS, FACULTATIVOS Y/O AEROBIOS.

LAS ESPECIES PRESENTES EN PEQUEAS CANTIDADES PUEDEN PASAR


INADVERTIDAS SI SE USAN MEDIOS NO SELECTIVOS.
VIOLETA DE GENCIANA: ELIMINA BACILOS ESPORULADOS AERBICOS.

AZIDA SDICA: INHIBE EL CRECIMIENTO DE BACILOS GRAM POSITIVOS


ESPORULADOS AERBICOS.

FENIL ETIL ALCOHOL: INHIBE BACILOS GRAM NEGATIVOS AEROBIOS Y ANAEROBIOS


FACULTATIVOS.

NEOMICINA: INHIBE GRAM NEGATIVAS FACULTATIVAS.

VANCOMICINA+KANAMICINA: SELECCIONA BACILOS GRAM NEGATIVOS ANAEROBIOS.


CULTIVOS AEROBIOS
SE DENOMINA MEDIO DE CULTIVO A CUALQUIER MATERIAL PARA
PERMITIR EL CRECIMIENTO DE UNA POBLACIN MICROBIANA.

CONSTITUYENTES BSICOS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

1. FUENTES DE ENERGA
2. COMPONENTES ESTRUCTURALES CELULARES
3. AGUA
Lactococcus lactis IBUN 34.1

Componentes Concentracion (g/L)


Sacarosa b 60
Extracto de Levadura b 10
CaCl2 . 2H2O a 0,14
MgSO4 . 7H2O a 0,04
FeSO4 . 7H2O a 0,04
MnSO4 . H2O a 0,02
Acido Fosforico H3PO4. c 13,8 mL/L d
KOH c 20
Agua Destilada c.s.p 1 Litro
CONDICIONES AMBIENTALES QUE AFECTAN EL
CRECIMIENTO DE LOS MICROORGANISMOS

1. TEMPERATURA
2. ACTIVIDAD DEL AGUA
3. PH
4. OXGENO
SEGN SUS REQUERIMIENTOS DE OXGENO
LOS MICROORGANISMOS PUEDEN SER:
PARA CULTIVO DE MICROORGANISMOS AERBIOS O ANAEROBIOS
FACULTATIVOS, SE INCUBA EL MEDIO EN CONDICIONES ATMOSFRICAS
NORMALES. CUANDO SE REQUIEREN BACTERIAS AEROBIAS EN
GRANDES CANTIDADES, ES PREFERIBLE AUMENTAR LA AIREACIN DEL
CULTIVO POR AGITACIN.
AL INICIO DE LA OPERACIN SE AADE EL MEDIO DE CULTIVO Y SE
INOCULA, INCUBANDO BAJO LAS PTIMAS CONDICIONES.

A LO LARGO DE TODA LA FERMENTACIN SE AADE:


OXGENO (EN FORMA DE AIRE)
UN AGENTE ANTIESPUMANTE Y
ACIDOS O BASES PARA CONTROLAR EL PH.
LOS FERMENTADORES A GRAN ESCALA SON CASI SIEMPRE DE ACERO
INOXIDABLE.

ES UN CILINDRO GRANDE CERRADO POR ARRIBA Y POR ABAJO,


DENTRO DEL CUAL SE HAN AJUSTADO VARIOS TUBOS Y VLVULAS.

TIENE UNA CUBIERTA EXTERNA DE ENFRIAMIENTO, A TRAVS DE LA


CUAL SE HACE PASAR VAPOR O AGUA DE ENFRIAMIENTO.
CULTIVOS LQUIDOS EN LOTE
FERMENTACIN LIQUIDA O SUMERGIDA

COMO UN CULTIVO DE CLULAS MICROBIANAS DISPERSAS EN


FORMA HOMOGNEA EN UN RECIPIENTE AGITADO QUE PUEDE O NO
SER AIREADO POR MEDIOS MECNICOS

IMPORTANTE PORQUE HA PERMITIDO EL CULTIVO DE ORGANISMOS


AEROBICOS EN CONDICIONES HOMOGNEAS CON UNA DENSIDAD
MODERADA DE BIOMASA
AGITACIN

MEZCLAR EL CALDO DE FERMENTACIN,


PARA OBTENER UNA SUSPENSIN UNIFORME

ACELERAR LAS VELOCIDADES DE


TRANSFERENCIA DE MASA (NUTRIENTES)
Y CALOR.
LOS AGITADORES CUENTAN GENERALMENTE CON 2 O 3 ROTORES EN
UN MISMO EJE.

PARA OBTENER UN ALTO GRADO DE MEZCLADO SE UTILIZAN PLACAS


DEFLECTORAS PARA ROMPER LAS LNEAS DE FLUJO.
AIREACIN

PROPORCIONAR A LOS MICROORGANISMOS EL OXGENO


NECESARIO PARA LLEVAR A CABO SU PROCESO RESPIRATORIO.

LA SOLUBILIDAD DEL O2 ES BAJA

SE NECESITA ALIMENTAR EN FORMA CONTINUA ESTE NUTRIENTE,


DADO QUE SU DEMANDA ES APROXIMADAMENTE DE 1G/L.
DEMANDA DE OXGENO DE UN
CULTIVO

UN CULTIVO AERBICO DE CLULAS REQUIERE DEL SUMINISTRO DE


OXGENO A UNA DETERMINADA VELOCIDAD PARA ASEGURAR LA PLENA
SATISFACCIN DE SUS REQUERIMIENTOS METABLICOS.

LA DEMANDA DE OXGENO, SE DEFINE COMO: LA CANTIDAD DE


OXGENO REQUERIDA POR UNIDAD DE TIEMPO Y POR UNIDAD DE
VOLUMEN DE CULTIVO
TRANSFERENCIA DE MASA

ES LA TENDENCIA DE UNO O MS COMPONENTES DE UNA MEZCLA A


TRANSPORTARSE DESDE UNA ZONA DE ALTA CONCENTRACIN DEL O
DE LOS COMPONENTES A OTRA ZONA DONDE LA CONCENTRACIN
ES MENOR.