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Modelos de

crecimiento bacteriano
Edgar Andrade Lima
Aldo Alan Maldonado Vega
Yareni Muoz Lpez
Ilse Vazquez Garfias
Modelos matemticos
de crecimiento
bacteriano
Curva de crecimiento bacteriano
El aumento en el tamao y masa de las clulas se denomina Las bacterias son organismos
crecimiento. Es una caracterstica nica de todos los unicelulares cuando las bacterias
alcanzan cierto tamao se dividen por
microorganismos. Los organismos requieren de ciertos fisin binaria
parmetros bsicos para la generacin de la energa y
biosntesis celular.

Estos parmetros son:


Fsicos (pH, temperatura, presin osmtica, presin
hidrosttica, y la humedad contenida en el medio en
donde el microorganismo esta creciendo
Nutrimentales: la cantidad de carbono, sulfuros, fosfatos y
otros elementos esenciales en el crecimiento bacteriano.

http://vlab.amrita.edu/?sub=3&brch=73&sim=1105&cnt=1
Para estudiar la poblacin del crecimiento bacteriano, las clulas viables de las bacterias deben ser
inoculadas sobre el caldo estril e incubadas en condiciones optimas de crecimiento. La bacteria
comienza a utilizar los componentes de los medios y aumentar en su tamao y masa celular

La dinmica del crecimiento bacteriano se puede estudiar trazando el crecimiento celular (abs) frente al
tiempo de incubacin o registro del numero de clulas en funcin del tiempo

El aumento de la masa celular del organismo se mide utilizando un espectrofotmetro.

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Curva de crecimiento bacteriano
1. Fase de latencia o fase Lag

La fase de latencia representa un periodo de transicin para


los microorganismos cuando son transferidos a una nueva
condicin. En esta fase se reproducen las enzimas
necesarias para que ellas puedan crecer en un nuevo medio
ambiente. El periodo de latencia puede ser corto o largo
dependiendo de las condiciones.

o No hay incremento en el numero de las clulas.


o Aumento en el tamao individual de las clulas, en el
contenido proteico, ADN y peso seco de las clulas.
o Hay gran actividad metablica

o Se puede o no presentar fase Lag en algunos casos.

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2. Fase exponencial o fase log
Durante esta fase el microorganismo esta en una fase de
crecimiento rpido y divisin.

Su actividad metablica aumenta y el organismo comienza la


replicacin del ADN por fisin binaria a una velocidad constante.

El medio de crecimiento se explota a su capacidad mxima, el


cultivo alcanza la tasa mxima de crecimiento y el numero de
bacterias aumenta logartmicamente (exponencialmente) y
finalmente la clula se divide en dos, despus en cuatro y as
sucesivamente. Que es (20, 21, 22, 23,....2n) siendo n=numero de
generaciones.

Generalmente las clulas en crecimiento exponencial son a


menudo las ms indicadas para estudios enzimticos y
estructurales
El tiempo que toma la bacteria para duplicar su numero en un
periodo de tiempo especifico se conoce como el tiempo
tiempo de generacin. El tiempo de generacin varia de
acuerdo al microorganismo.
3. Fase estacionaria
A medida que la poblacin bacteriana continua
creciendo , todos los nutrientes en el medio de
crecimiento son utilizados por el microrganismo
para su rpida multiplicacin. Esto resulta en la
acumulacin de materiales de deshecho
(metabolitos txicos). Lo cual cambia las
condiciones del medio tales como el pH y la
temperatura creando as un entorno
desfavorable para el crecimiento bacteriano.

La velocidad de reproduccin se ralentiza , las


clulas sometidas a divisin es igual al numero
de muerte celular (crecimiento crptico) y
finalmente la bacteria detiene completamente su
divisin. El numero de clulas no se incrementa y,
por lo tanto la velocidad de crecimiento se
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4. Declinacin o fase de muerte

El agotamiento de los nutrientes y la consiguiente


acumulacin de producto de desecho metablico y
otros materiales txicos del medio facilitara al
microorganismo pasar a la fase de muerte.

Durante esta fase la bacteria pierde


completamente la capacidad de reproducirse. Las
bacterias comienzan a morir debido a las
condiciones desfavorables la muerte es rpida y
uniforme. El numero de clulas muertas excede el
el clulas vivas.

Algunos microrganismos que pueden resistir esta


condicin pueden sobrevivir en el medio
produciendo endosporas.
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Formulacin del crecimiento exponencial
El aumento que se produce en un cultivo bacteriano Donde
creciendo exponencialmente es una progresin geomtrica N: es el numero final de clulas
No: es el numero inicial de clulas
de base dos. n: es el numero de generaciones
que han ocurrido durante el
periodo de crecimiento
20, 21, 22, 23,....2n exponencial

El tiempo de generacin (g) de la


poblacin celular exponencial es
t/n, donde t indica los das, horas o
minutos de crecimiento
Existe una relacin directa entre el numero de clulas presentes inicialmente en un
cultivo y el numero presentes tras un periodo de crecimiento exponencial que exponencial
puede representarse matemticamente como

N=No 2n Por tanto sabiendo el numero inicial de clulas (No) y el


numero final de clulas de una poblacin que esta
creciendo exponencialmente es posible calcular n y
conociendo n y t calcular el tiempo de generacin g
N= 108
No= 5 X 10 7
t= 2

Con esta formula se pueden calcular los tiempos de generacin


en funcin de de trminos fcilmente medibles como N y No.

Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J.


En este ejemplo, el tiempo de generacin g, que definimos como t/n, ser g=t/n =2/1=2
Brock Biologa de los Microorganismos. 10 horas. Si el crecimiento exponencial continua durante otros dos horas, el numero de
edicin. Prentice-Hall. Madrid, 2003. clulas sera 2 x 108 . Dos horas mas tarde el numero de clulas seria de 4x10 8 y as
sucesivamente
Mtodos directos

Mtodos gravimtricos
Mtodos espectrofotomtricos
Mtodos microscpicos de recuento celular en cmaras
Microscopa de epifluorescencia
Mtodos de siembra
Mtodos gravimtricos
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse
en trminos de peso seco por unidad de volumen, ya sea como
slidos en suspensin totales (SST) o slidos en suspensin voltiles
(SSV). Las clulas se separan del lquido bien por centrifugacin o bien
por filtracin.

Desventajas
Su determinacin incluye no slo microorganismos activos sino
microorganismos muertos, material inerte y materia orgnica
adsorbida. Adems, no puede aplicarse cuando los sustratos a
degradar son insolubles.
Mtodos espectrofotomtricos
Se basan en la existencia de una relacin directa entre el nmero total
de microorganismos presentes en una muestra y su valor de turbidez.
Tras la determinacin de la turbidez de la suspensin celular mediante
espectrofotometra, el resultado se expresa en unidades de
absorbancia. Sin embargo, antes de utilizar la turbidez como mtodo
de recuento, hay que realizar una recta de calibrado que relacione
medidas directas con las indirectas de la turbidez.

Se trata de mtodos rpidos, pero de baja


sensibilidad y que presentan problemas de
calibracin y de interferencias con partculas
Mtodos microscpicos de
recuento celular en cmaras
Existen diversos tipos de cmaras para el recuento de microorganismos tales
como la cmara de Neubauer, Thoma, Brker, Ttirk, Malassez, etc. Consiste
en un portaobjetos especial con una graduacin en superficie y unas
medidas muy concretas: excavacin con 0.02 mm de profundidad; rea de 1
mm 2 dividida en un retculo de 25 cuadrados grandes; cada cuadrado
grande est subdividido a su vez en 4x4 = 16 cuadrados pequeos.
Mtodos microscpicos mediante
epifluorescencia

La epifluorescencia es debida a un agente fluorocromo, a la adicin de


algn anticuerpo marcado con fluorescencia (inmunofluorescencia) o a
una autofluorescencia natural debida a la existencia de algn
componente celular autofluorescente.
Cuando la epifluorescencia se debe a un agente fluorocromo, el
procedimiento consiste en la tincin de las bacterias con dicho
agente y posterior recuento mediante microscopa ptica con
iluminacin de epifluorescencia.

En el primero de ellos quedaran El segundo incluira a todos


englobados aquellos fluorocromos aquellos que tras ser sustratos
que tras ser adsorbidos actan de una determinada actividad
especficamente sobre cidos metablica, son convertidos en
nucleicos u otros componentes molculas fluorescentes.
celulares.
Mtodos de siembra
El mtodo habitual de lograr esto es sembrar pequeas alcuotas de diluciones
adecuadas de un cultivo original sobre placas de Petri con medio slido. Cada
clula viable dar origen a una colonia visible despus del tiempo adecuado de
incubacin. Contando las colonias visibles, teniendo en cuenta la dilucin de la
que proceden y el volumen de alcuota utilizado, es fcil deducir el nmero de
clulas viables en la suspensin original. Como no podemos garantizar que
cada colonia no proceda de ms de un individuo el recuento se refiere no a
clulas viables reales sino a unidades formadoras de colonia (UFC).

Se recomienda sembrar 5 placas de cada


Dilucin, usar pipetas nuevas en cada
dilucin, contar las placas donde existan
entre 50 y 300 colonias.
Mtodos
indirectos
Estos mtodos se basan fundamentalmente en la determinacin de:
componente celular especifico

cuantificacin de alguna actividad enzimtica

la medida de consumo de sustrato

formacin de un producto

nos permite deducir informacin sobre la evolucin del nmero de microorganismos.


Componente celular especfico
Estar presente nicamente en clulas vivas.
Ser rpidamente degradado cuando las clulas mueran.
Ser relativamente constante em concentracin respecto a cambios en el estado fisiolgico celular y entre
distintas especies.

cidos nucleicos, protenas, polisacridos, lpidos y ATP.

cidos nucleicos

La sntesis es proporcional a Ia tasa de crecimiento

RNA vara considerablemente con el estado fisiolgico celular, la cantidad de DNA es


relativamente ms constante.
La cantidad de DNA se determina mediante espectrofotometra, tras su extraccin y purificacin.

En trminos generales, las clulas son quebrantadas y homogenizadas con enzimas y


detergentes. El ADN puede entonces ser precipitado y separado del debris celular. Finalmente, el
ADN es cuantificado por espectrofotometra.

realizar una curva estndar para relacionar los valores de A con la masa bacteriana en una
muestra problema.

mg/ml de ADN = (Abs260 X Factor Dilucin X 50 mg ADN/ml)


50 mg ADN/ml es un factor de conversin
Desventajas.
presentan la desventaja de que los procedimientos de purificacin son complejos, con diversas
interferencias y bastante costosos.
Protenas
La cuantificacin de protenas se ha usado como medida de crecimiento
bacteriano durante fermentaciones.
Se caracterizan por su sensibilidad, rapidez y simplicidad.
las tcnicas de Lowry y Bradford.

Lowry
Este proceso se basa en la reaccin de las protenas con el reactivo FOLIN
phenol posterior a un tratamiento alcalino de cobre. La intensidad azul
que se desarrolla es proporcional a la concentracin de protenas en la
muestra.
1. Lisis celular
2. Aadir el reactivo con cobre
3. Se aade 0.5 ml de las solucin diluida de FOLIN, se mezcla e incuba a temperatura
ambiente por 30 minutos.
4. Luego de incubar, medir la densidad ptica a 500 nm con el espectrofotmetro. Usar el
estndar (ovoalbmina)

un incremento en la cantidad de protena en el paquete celular indica que hay mayor


concentracin de clulas
Lpidos
Su determinacin para la estimacin de la biomasa de una poblacin
bacteriana ofrece muchas ventajas sobre otros mtodos.

La principal ventaja es su alto contenido especfico y que se encuentran en


cantidades relativamente constantes.

Las tcnicas de anlisis se basan fundamentalmente, en la extraccin


celular de los fosfolpidos con un disolvente orgnico, su posterior
hidrlisis cida para liberar el fosfato y por ltimo, la determinacin
colorimtrica de ste
Trifosfato de adenosina o ATP
La cantidad de ATP proporciona una estimacin del numero de bacterias
presentes en la muestra.

Se usa un reactivo estndar analtico para realizar la calibracin


correspondiente al equipo (luminmetro) que se utilizara.
Una de las tcnicas ms utilizadas para medir ATP se basa en la
reaccin luciferina-luciferasa, proceso responsable de la luz emitida por
las lucirnagas y que ha sido ampliamente estudiado.

luminiscencia se sabe que intervienen luciferina (fenol heterocclico,


LH2), luciferasa (enzima, E), ATP, cationes de n-magnesio y oxigeno.

la determinacin del ATP en una muestra biolgica puede hacerse


mediante extraccin por ebullicin en tampn Tris (hipocloruro de
tris-hidroximetil-aminoetano) del ATP.
incubacin con luciferina-luciferasa
medida de la luz producida en un fotmetro o luminometro con
registro.
La relacin entre el ATP, el ADP Y el AMP y el contenido total de
desoxiribonucletidos refleja la carga energtica de las clulas

(ATP + 0,5 ADP)/(AMP + ADP + ATP)

la carga energtica es un valor mucho ms preciso que el contenido


absoluto de ATP.
Tasa de crecimiento bacteriano

El incremento del nmero de clulas es proporcional al nmero de clulas presentes


en el cultivo, por unidad de tiempo . A la constante de proporcionalidad () se le
denomina tasa de crecimiento y puede considerarse como la probabilidad de que
una clula se divida en un tiempo determinado.

=
Ejemplo:
Calcular la tasa de crecimiento de las bacterias de un cultivo que pasa
de tener 0.1 a 0.78 en 120 min.

= =1.026 h-1
Tiempo de generacin /duplicacin

Tiempo de generacin (g) es el tiempo requerido para que una


clula se divida o una poblacin se duplique.

Si partimos de una clula al cabo de una generacin habr


duplicado su nmero y as sucesivamente en cada generacin.
1 generacin -------------> 2 clulas
2 generaciones -------------> 4 clulas g=
3 generaciones -------------> 8 clulas
4 generaciones -------------> 16 clulas
5 generaciones -------------> 32 clulas
Ejemplo:
Cual es el tiempo de generacin de una poblacin bacteriana que
incremento de 10.000 a 10.000.000 clulas en 4 horas?

g=
g=
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Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock Biologa de los
Microorganismos. 10 edicin. Prentice-Hall. Madrid, 2003.