ENZIMAS

Enzimas Microbianas:
Herramientas para Procesos
Biotecnolgicos
Jose L. Adrio 1 and Arnold L. Demain 2,

1 Neol Biosolutions SA, BIC Granada, Granada 18016, Spain; E-Mail: jladrio@neolbio.com (J.L.A.)

2 Research Institute for Scientists Emeriti (R.I.S.E.), Drew University, Madison, NJ 07940, USA

* Author to whom correspondence should be addressed; E-Mail: ademain@drew.edu;

Tel.: +1-973-408-3937; Fax: +1-973-408-3504.

 Son de gran importancia
Bioprocesos industriales
Detergentes y textiles
Farmacuticas
Comida y bebidas
Biocombustibles
 Novozymes

DSM

DuPont
 Metagenmica

Una alternativa para poder elaborar una

biblioteca genmica a partir de ADN.
 Respiradores volcnicos

Tundra rtica

Rumen de la vaca
 Amidasa

Lipasa

Oxidorreductasa

Beta-glucosidasa
 Streptomyces lividans

Pseudomonas putida

Rhizobium leguminosarum
 Las actividades enzimticas
 Menos de dos semanas.

Solexa

SoLiD
 Extremfilas
Clostridium, Thermus, Thermotoga, y
Bacillus.
La Taq DNA polymerase, fue aislada de
Thermus aquaticus, y del 2009 a vendido
$500 millones de dolares.
 Enzimas Fras
Proteasas
Amilasas
Celulasas

Extraccin y clarificacin de jugo de

frutas
Bioremediacin
 E. Coli

S. cerevisiae
 $3.3 billiones en 2010
S. carlsbergensis 15 milliones de toneladas
por ao.

Atorvastatin droga para el colesterol- 12

billones en 2010
 Conclusiones
Los microorganismos proporcionan una cantidad
impresionante de catalizadores con una amplia
gama de aplicaciones a travs de varias
industrias tales como cuidado del hogar,
alimento, alimentacin animal, industrias
tcnicas, productos qumicos finos y
farmacuticos.
Biocatalisadores bacterianos
de clulas enteras por
visualizacin superficial de
enzimas:
Hacia aplicaciones industriales
 Historia
Los primeros informes sobre la presentacin bacteriana de
protenas recombinantes aparecieron a mediados de los
aos ochenta
las protenas recombinantes se insertaron en protenas de
membrana externa naturales de Escherichia coli con el
objetivo inicial de soportar los respectivos modelos de
topologa
pronto se anticip que esta estrategia puede ser explotada
para la visualizacin superficial de las enzimas
 La aplicacin de enzimas como
catalizadores
Las enzimas destacan por su notable
especificidad hacia su reaccin catalizada y sus
sustratos
las enzimas requieren slo condiciones suaves
con respecto al pH, temperatura y presin
las reacciones se catalizan en soluciones acuosas
sin necesidad de disolventes orgnicos
 Son una alternativa interesante para muchos
procesos qumicos convencionales

se utilizan preparaciones enzimticas

purificadas
 Desventajas
implicar un proceso de preparacin largo y
costoso.

La preparacin puede usarse slo una vez

para la reaccin requerida y posteriormente
se convierte en residuos
 Ventajas:
Ni el sustrato ni el producto de la reaccin enzimtica
necesitan cruzar una barrera de membrana.

La enzima que est unida a la clula puede separarse de

la mezcla de reaccin(simple centrifugacin)

La envoltura celular estabiliza la enzima y la hace menos

accesible a la degradacin proteoltica, dando como
resultado actividades continuamente superiores
 El uso de microorganismos como biocatalizadores de clulas
enteras evita etapas laboriosas de produccin y purificacin y
permite un uso repetido en reacciones secuenciales
la enzima acta en su entorno natural, lo que proporciona
condiciones ptimas y soportes con co-factores y circuitos de
regeneracin de factor redox
El entorno celular tambin protege las enzimas de efectos
desestabilizadores y degradantes que pueden ser problemticos en
caso de que se utilicen enzimas purificadas
 En contraste

Los biocatalizadores de clulas enteras con enzimas

intracelulares, sin embargo, requieren que el sustrato
y el producto sean capaces de pasar la envoltura
celular, en particular, la barrera de membrana.
la clula comprende una amplia variedad de otras
enzimas que podran interferir con la reaccin deseada
 Un biocatalizador con clulas de superficie
con enzimas mostradas en la superficie es
capaz de superar estas restricciones
visualizacin en superficie
Gram-negativas,

Los autotransportadores

Protena de nucleacin de hielo

 Los autotransportadores pertenecen a los sistemas de secrecin
tipo V ,que emplean estos sistemas para dirigir las protenas a la
superficie celular y al espacio extracelular. Los sistemas de
secrecin de tipo V son esenciales para la patognesis bacteriana
Mas comunes:
Adhesina involucrada en la adherencia difusa (AIDA-I) de E. coli
enteropatognica
La esterasa EstA de Pseudomonas aeruginosa
 La protena de nucleacin de hielo (INP) es una
protena de membrana externa llamada as por
su capacidad para promover la formacin de
cristales de hielo en agua superenfriada
Las variantes de INP de diferentes especies de
Pseudomonas y Xanthomonas campestris se han
usado con xito como un sistema de
Otras protenas

la visualizacin de la
superficie que emplea otras
protenas de la membrana
 Otras protenas
se aplicaron OprF y OmpW truncadas
OprF es una protena de membrana externa principal de P. aeruginosa que forma
una estructura de beta - barril con eptopos de superficie conservados . Estos
eptopes expuestos son sitios de fusin de enzimas primarias para la exposicin
superficial
OmpW es una pequea protena de membrana externa de E. coli y forma una
estructura de -barril que permite la visualizacin de la superficie de las enzimas
por varios truncamientos C-terminales fusionados a la protena heterloga
uso de lipocalinas bacterianas (BLC) como motivos de anclaje.
Los BLC son protenas de la membrana externa orientadas hacia el espacio
periplsmico y estn unidas a la membrana por medio de un lpido de anclaje
 Gram-positivas
PgsA. se deriva del complejo PgsBCA de poli--
glutamato sintetasa asociado a la membrana de
Bacillus subtilis

Cgl1221.se origina de Corynebacterium glutamicum,

una protena de canal(secrecin de Lglutamato )
 Endospora. Las endosporas se
forman dentro de la clula madre
que se lisan al final del proceso de
esporulacin
 se han aplicado varios mecanismos de anclaje en bacterias Gram-
negativas y Gram-positivas, as como en endosporas para mostrar
enzimas y por lo tanto obtener esferas vivas para ser aplicadas en
procesos de conversin. Sin embargo, sus caractersticas
particulares en detalle pueden ser diferentes. Esto se relaciona con
la tolerancia para las enzimas con grupos protsicos inorgnicos, el
potencial para mostrar las enzimas multimricas, su gama de
huspedes y, finalmente, el nmero de molculas de enzimas con
las que una sola clula puede ser decorada.
 Biocatalizadores de clulas
enteras mediante la visualizacin
superficial de enzimas en
bacterias Gram-negativas
 Sntesis de esteroides
muestran las enzimas del citocromo P450 y sus
sistemas de lanzadera de electrones

La baja actividad, los problemas de estabilidad y, a

menudo, la asociacin obligatoria de la membrana
hacen que las enzimas P450 sean extremadamente
desafiantes para la expresin heterloga en el citosol
 visualizacin de la superficie de
adrenodoxina bovina

Biocatalizador activo de clulas

Las clulas se utilizaron posteriormente para

la produccin de pregnenolona a partir de
colesterol
 La lipasa de Pseudomonas

fluorescens
se expuso en la superficie celular bacteriana por fusin al motivo de
anclaje OprF
se us para la resolucin enantioselectiva de 1- feniletanol racmico

conversin del 25% despus de 36 h con un exceso

enantiomrico superior al 96%.
 En particular, el biocatalizador de clulas enteras era estable frente
a disolventes orgnicos durante al menos 1 semana
La misma lipasa tambin se llev a la superficie usando la protena
de membrana externa pequea OmpW
Los tiempos de reaccin prolongados a temperaturas elevadas son
factibles, debido a que las enzimas mostradas en la superficie
celular se vuelven ms estables hacia el estrs trmico y los
disolventes orgnicos
 rendimientos
Sin embargo, los rendimientos de conversin son
todava demasiado bajos para consideracin
industrial.
Para la comparacin, las lipasas purificadas
tpicamente alcanzan hasta un 50% de
conversin en reacciones comparables con 1-
feniletanoles dentro de 2 das
 La visualizacin en superficie de
las enzimas lipo y sacarolticas

. Uno de los ltimos pasos en la

sacarificacin de la biomasa
expandeeslas
lignocelulsica fuentes de carbono disponibles
la degradacin
de la celobiosa
para los procesos de fermentacin
 mostraron la -glucosidasa de
Thermobifida fusca
produjo un biocatalizador de clulas enteras
degradante de celobiosa.
E. coli MS04 fue elegido para la visualizacin de
la superficie, una cepa para producir
exclusivamente etanol con ttulos altos
las clulas eran estables en presencia de hasta
120 g/l de etanol
 Producieron 1517 g L1 etanol a partir de 40 g L1 de
fuente de carbono
que representaba ms del 80% del rendimiento
tericamente posible de etanol

Esta estrategia ganar atencin industrial una vez que la

degradacin completa de la biomasa celulsica sea factible
 aplicacin industrial de lipasas
incluyen propsitos de limpieza
coexpresin de Burkholderia cepacia lipasa
asociada a la superficie junto con su chapern
individual
as bacterias resultantes mostraron 2,73 mU mL-1
de actividad de la lipasa y, por tanto,
demostraron la co-presentacin de dos enzimas
activas diferentes en la superficie celular
 prueba de lavado estndar y proporcion eficiencias de limpieza
similares para las grasas alimenticias, la grasa de la piel o el aceite
de motor como preparaciones de lipasa comerciales ya utilizadas
en el lavado de polvos.
Las estimaciones sobre el aumento de la produccin en un proceso
de fermentacin de 30 qm para las cantidades industriales
requeridas supusieron que el biocatalizador de lipasa / foldase de
clulas totales reducira los costos en un 65% en comparacin con
la produccin de la enzima purificada
 En este punto, la cortina no debe ser dibujada
sobre el hecho de que el uso de clulas enteras
de E. coli para lavar la ropa no parece ser muy
atractivo. Adems del riesgo de producir ropa
con el olor tpico pero desagradable de E. coli,
tambin implica la liberacin incontrolada de
bacterias modificadas genticamente.
 degradacin de plaguicidas con
hidrolasa organofosforada (OHP)
Se utilizo la protena de nucleacin de hielo
(INP) como motivo de anclaje
con el objetivo de superar las limitaciones tpicas
de difusin de membrana
La aplicacin de OHP ha sido ampliamente
estudiada variando algo el ancla de INP, la
eleccin de plaguicidas, o el organismo husped
 Muy buena estabiliadad
Las clulas que presentaban el OHP en E. coli se
combinaron con un dominio de unin a la
celulosa exhibido en la superficie Lpp-OmpA
el biocatalizador de clulas enteras conserv la
actividad durante 45 das y la actividad
enzimtica alcanz 0,65 mM de peso seco de
clulas min-1 g-1.
 Estos ejemplos demuestran que la visualizacin
de la superficie no slo puede ser una
herramienta valiosa para superar las limitaciones
de transferencia de masa de la membrana, sino
que tambin permite la reutilizacin de los
biocatalizadores de clulas enteras
 Biocatalizadores de clulas
enteras mediante la visualizacin
de la superficie en bacterias
Gram-positivas
 polihidroxibutirato

El biopolmero termoplstico PHB es una alternativa

biodegradable y no txica a los plsticos utilizados actualment
A partir de almidn con C. glutamicum mostrando la -amilasa
mediante la coexpresin intracelular acompaada de las enzimas
de biosntesis de PHB
El almidn de fermentacin produjo 0,4 g de L-1 PHB, que es del
orden de magnitud observado para los procesos discontinuos
tpicos basados en C. glutamicum con materiales de alimentacin
permeables a la membrana as de biosntesis de PHB
 producir cido lctico

La presentacin de -amilasa con el motivo de anclaje PgsA

tambin se ha empleado en Lactobacillus casei
Se demostr que las clulas eran reutilizables ya que retenan
actividad durante 72 h en cinco lotes repetidos con un rendimiento
total de 0,81 g de acido lctico por gramo de azcar consumido
El rendimiento es similar al obtenido con las pocas especies de
Lactobacillus amiloltico natural que producen amilasa extracelular
 La tcnica de visualizacin de superficies ha sido
probada con xito para adaptar las cepas de
produccin Grampositive a nuevas materias
primas para procesos ms rentables. Sin
embargo, dicha extensin del espectro de
materia prima tambin puede conseguirse por
secrecin enzimtica
 Conclusin
posible solucin a problemas biotecnolgicos especficos
no existe ningn proceso a escala industrial que aplique la
visualizacin superficial hasta ahora
Las clulas enteras ofrecen la ventaja de una produccin y
recuperacin fciles
Posible alternativa viable cuando: Mala permeablilidad del
sustrato o producto, problemas de expresin intracelular o
reacciones cruzadas que impiden la produccin
New Tools for Exploring Old
FriendsMicrobial Lipases
Las lipasas son triacilglicerol hidrolasas (E.C.3.1.1.3) que
catalizan la hidrlisis y la sntesis

De acil-glicerol de cadena larga con trioleil-glicerol como

sustrato estndar.
Las lipasas son nicas debido a su naturaleza interfacial
Las lipasas pertenecen a la superfamilia estructural de / hidrolasas

Gly-X-Ser-X-Gly en
el centro de una hoja beta
 LIPABASE (http://www.lipabasepfba-tun.org)

Lipase Engineering Database (LED)

(http://www.led.uni-stuttgart.de)
 (Ser-His-Asp)

(Nucleofilico-Acid-His)
Bacillus subtilis Lip A es considerara Como la enzima hidrolasa
con menor contenido de / ya que contiene slo seis
Hebras de hoja paralela flanqueada por cinco hlices alfa. El
centro cataltico de la lipasa es Compuesto de aminocidos
tradas(His257, Asp203, and Ser144)
 Lipasas animales y vegetales

Lipasa digestiva de caracol

Lipasa alcalina de escorpion
Lipasa digestiva de cangrejo
Lipasa de pescado
Lipasa de Carica Papaya
Lipasa pancretica
Lipasa hepatica
 Microorganismos comunes

Candida rugosa lipasa

Gibberella zeae

Pseudomonas lipasa

Bacillus subtilis Lipasa

Malassezia globosa
 Lipasas de Hongo

Dentro de los generos ucor, Rhizopus, Aspergillus, Penicillium, Geotrichum,

Humicola, Ashbya, Fusarium, Rhizomucor, Acremonium, Alternaria, Beauveria,
Metarhizium, Eurotrium, Ophiostoma, etc.

R. miehei, Rhizopus niveus, Geotrichum candidum, Penicillium expansum,

Humicola lanuginosa
 860 especies distintas de hongos filamentosos se han explotado
actualmente con el fin de producir enzimas a nivel comercial

R. miehei, H. lanuginosa, Mucor pusillis, Aspergillus terreus, and Rhizopus

homothallicus.

Antrodia cinnamomea Penicillium simplicissimum

 Fuentes de Carbono usadas

Bagazo de caa

Melaza

Salvado de Trigo

Cascarilla de arroz

Paja
 En levaduras

Candida, Rhodotorula, Yarrowia, Geotrichum, and Trichosporon. C.

rugosa lipase

5-7 isoenzimas en el extracto crudo d

Los genes de las lipasa se nombran como Lip1-
lip5 normalmente
Lip2 y Lip3 son enzimas constitutivas donde lip 1 aparece en n-
dodecanol en un cultivo en lote y en presencia en lote
alimentado de acido oleico.

La isoenzima Lip1 prefiere medios de cultivo con cadenas de

triglicridos cortas

Mientras que lip 2 y lip 3 prefieren cadenas largas de

triglicridos
Asi como C. rugosa, otras levaduras presentan lipasas como
Candida albicans, C. antarctica, Geotrichum asteroids, G. candidum, Trichosporon
fermentans,Saccharomycopsis lipolytica, y Yarrowia lipolytica tambin estn
reportadas para producir isoenzimas utilizadas en biotransformaciones

CALB por ejemplo a sido inmovilizada y empleada en la apertura del anillo de la

sntesis de polister
CALA por otro lado tiene mayor estabilidad ante cambios de ph y temperatura
aceptando una gran cantidad de poli alcoholes y mostrando selectividad hacia
ciertos grupos de aminoacidos
 G. candidum, muestra una preferencia por
uniones de acidos grasos de tipo cis
insaturados

Kluyveromyces marxianus genera una lipasa

acida termotolerante
 Lipasas bacterianas
Las lipasas bacterianas por un lado
mayoritariamente son glicoprotenas,
Algunas pueden ser extracelulares en forma de
Lipoproteinas

Nitrogeno
Carbono
Sales Inorganicas
Lipidos
Temperatura
Y disponibilidad de oxigeno
 Achromobacter, Acinetobacter, Alcaligenes, Arthrobacter,
Bacillus, Burkholderia,Chromobacterium, Pseudomonas, and
Staphylococcus

No son especificas a algun sustrato, pocas son

termoestables y tienen motivos conservados
 familia I, lipasas Pseudomonas que pertenecen a la subfamilia I.1;
subfamilia I.2 incluye Burkholderia lipases. Bacillus y
Staphylococcus esta as u vez muestra un motivo Ala-X-Ser-X-Gly .
Pseudomonas fluorescens y Serratia marcescens belong
pertenecen a la subfamilia I.3, Que incluye gram negativa; Bacillus
pumilus y B. subtilis representan la subfamilia I.4;
Bacillus stearothermophilus, y Bacillus thermocatenulatus
pertenece ala subfamilia 1.5
 Bacillus lipases, B. subtilis carecen de puentes
disulfuro y compuerta
Staphylococcal les utilizado ampliamente en
sintesis de esters de antioxidantesy
production de biocombustibles y
biopolimeros
 Temperaturas
Acinetobacter sp enzimas fras

Bacillus 60

R. oryzae 75

Pyrococcus horikoshii 95
 CALB -MODIP DbD----CalB A162C-asparagine a
lysine ,cistenas resultan en mas puentes de
hidrogeno

Aumentar los aminocidos cargados y cerca del

grupo funcional de la serina y disminuyendo las
hojas beta
 Frias-1-5
Aeromonas, Pseudoalteromonas, Moraxella,
Acinetobacter, Staphylococcus, Serratia,
Psychrobacter, and Pseudomonas .
Incluyendo las fungicas, C. antarctica, Candida
lipolytica, G. candidum, Aspergillus nidulans,
Pichia lynferdii y Penicillium roqueforti
 Alcalinas 8-10
A. johnsonii,
thermophilic Bacillus sp. ,Alcaligenes sp, Burkholderia
multivorans ,Pseudomonas , incluso Corynebacterium ,S.
xylosus , y Streptomyces, Penicillium cyclopium , Fusarium
solani , y basidiomycete A. cinnamomea
Ralstonia sp. CS274 pH8.09.5 using 5 % metanol y 20 %
agua
5055 C
 Acidas 1.5-3

A. niger NCIM 1207

 Tolerante a solventes
P. aeruginosa, Pseudomonas sp., Bacillus
sphaericus, Bacillus megaterium, B.
thermoleovorans, Burkholderia cepacia,
Staphylococcus sp.
4-nitrophenoxy-1,3-butanediol con C8, C10, y
C12 acidos alifaticos
 INFORMACIN
ACTUALIZADA SOBRE
APLICACIONES DE
ENZIMAS INDUSTRIALES Y
MERCADO GLOBAL
Biotecnologa Blanca
Temperatura ambiente.
Condiciones acuosas .
Tecnologas sostenibles para la produccin de productos
qumicos.
Contextos agrobiolgicos
La mayora de las enzimas que se encuentran en el suelo y el
agua pueden mostrar la actividad deseada, pero generalmente
no son adecuadas para uso industrial.

Cmo pueden obtenerse?

Optimizando las condiciones del proceso
Mediante la ingeniera de protenas usando la evolucin
dirigida.
Evolucin dirigida
Describe toda la gama de tcnicas de biologa molecular que permiten
imitar en el laboratorio procesos evolutivos naturales.

Mutagnesis aleatoria de uno o ms genes iniciadores.

Seleccin para aislar o enriquecer las variantes enzimticas con
mejoras en una o ms propiedades deseables.

La biocatlisis industrial = "tercera ola" de la biotecnologa despus de

las ondas farmacuticas y agrcolas.
 Los catalizadores biolgicos
Altamente selectivos.
Eficientes en la bioconversin de sustrato a producto.
Tienden a catalizar la produccin de productos relativamente puros.
Minimizan la generacin de residuos.
Capaces de llevar a cabo reacciones regioespecficas,
quimioespecficas y estereoespecficas que son desafiantes para las
qumicas convencionales.

La productividad volumtrica, estabilidad y disponibilidad, son los

obstculos que deben superarse antes de que un catalizador biolgico
pueda considerarse una enzima industrial.
 ENZIMAS INDUSTRIALES:
CLASIFICACIN Y CRITERIOS
DE SELECCIN
Figura 2: Construccin de una matriz de decisin multiparamtrica para una seleccin
enzimtica candidata eficiente. Tasa de reaccin cataltica (kcat), constante cataltica
(Km), constante de Michaelis (U).
ENZIMAS GENTICAMENTE
MODIFICADAS
La ingeniera gentica abre nuevas vas a las enzimas con:
Mayor estabilidad.
Actividad o especificidad.
Productividad.
 ENZIMAS INDUSTRIALES:
PRODUCCIN Y APLICACIN
La gran mayora de las enzimas microbianas provienen de un nmero
muy limitado de gneros:
Aspergillus
Trichoderma
Bacillus
Kluyveromyces
En la eleccin de la deformacin de produccin hay que
considerar varios aspectos:

La enzima se secreta de la clula.

El anfitrin de la produccin debe tener un estado de GRAS
(generalmente considerado como seguro).
El organismo debe ser capaz de producir una cantidad elevada de la
enzima deseada en un marco de tiempo razonable.
Divisin de el proceso de produccin de la enzima:

1. Seleccin de una enzima.

2. Seleccin de una cepa de produccin.
3. Construccin de una cepa sobre-producente por ingeniera
gentica.
4. Optimizacin del medio de cultivo y condiciones de
produccin.
5. Optimizacin del proceso de recuperacin.
6. Formulacin de un producto enzimtico estable.
Criterios utilizados en la seleccin de una
enzima industrial:
Especificidad.
Velocidad de reaccin.
pH .
Temperatura.
Estabilidad.
Efecto de inhibidores.
Afinidad a sustratos.
 Divisin de las enzimas industriales
segn su aplicacin:

Enzimas Enzimas Enzimas

Enzimas tcnicas.
detergentes. alimentarias . alimentarias.

Enzimas Enzimas Enzimas de

Enzimas Enzimas
de pulpa y qumicas etanol para
textiles de cuero combustible
papel finas
Las enzimas pueden
Reemplazar las
piedras pmez
para los
pantalones
"lavados con
piedra.

Reemplazar los cidos en la

industria de procesamiento
Permitir una digestin ms completa del almidn y los lcalis o
agentes oxidantes en el
de los alimentos para animales, lo
desecado de la tela.
que conduce a menos residuos de los
Reducir el uso de
sulfuro en las
mismos.
curtiduras.

Retire las manchas

de los tejidos. La ropa se puede
lavar a temperaturas
ms bajas,
ahorrando as
energa
Las principales enzimas utilizadas en el mercado
de enzimas industriales son:
Amilasa
Lipasa
Proteasa
Ligasa
Fitasa
Celulasa
Xilanasa
INMOVILIZACIN
ENZIMTICA
La inmovilizacin ayuda en el desarrollo de
procesos continuos que:
Mayor
organizacin
econmica de las
operaciones.

Disponibilidad del
producto con Automatizacin
mayor pureza.

La relacin
Disminucin de la
inversin /
mano de obra.
capacidad.
Tcnicas de inmovilizacin

Atrapamiento

Combinacin de
una o ms de estas
tcnicas fsicas
junto con tcnicas
de conjugacin
qumica

Reticulacin Unin
y adsorcin covalente

La actividad y la estabilidad operativa de los biocatalizadores son importantes ya que ellos determinan su
productividad, que es la actividad integrada durante el tiempo de operacin.
ENZIMAS PARA BIOETANOL DE
SEGUNDA GENERACIN
Utilizacin de materiales lignocelulsicos
residuales para reducir los costos de produccin
La produccin de etanol a partir de azcares o almidn afecta
negativamente a la economa del proceso, por lo que el etanol es ms
caro en comparacin con los combustibles fsiles.

La conversin enzimtica de polisacridos estructurales en la biomasa

vegetal es un tema clave en el desarrollo de bioetanol de segunda
generacin (lignocelulsico).

La eficacia de este proceso depende en parte de la capacidad de las

enzimas para interrumpir polisacridos cristalinos, obteniendo as acceso
a cadenas polimricas individuales.

La alternativa enzimtica, utilizando celulasa y hemicelulasa, evita el uso

de cidos fuertes y resulta en una corriente ms limpia de azcares para
la fermentacin y menos subproductos.
Los microorganismos lignocelulolticos, especialmente
hongos, han atrado un gran inters como degradadores de
biomasa
Para aplicaciones a gran escala debido a su capacidad para
producir grandes cantidades de enzimas lignocelulolticas
extracelulares.
La ampliacin de la produccin de etanol lignocelulsico,
requiere una reduccin adicional del coste de produccin.
En conjunto, para mejorar la tecnologa y reducir el costo de
produccin, se deben abordar dos cuestiones principales:
i) mejorar las tecnologas para superar la recalcitransicin de
la conversin de biomasa celulsica (pretratamiento,
hidrlisis y fermentacin).
ii) ii) grandes cantidades.
MERCADO GLOBAL DE LAS
ENZIMAS