Bacterias Anaerobias

Esporuladas
y
no Esporuladas

Ctedra Microbiologa General

FACENA UNNE
2010
Objetivo

Conocer las principales caractersticas

biolgicas de los grmenes anaerobios
esporulados y no esporulados, su capacidad
para producir infecciones, las posibilidades
diagnsticas y las medidas profilcticas
Anaerobios No Esporulados
Caractersticas generales

Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxgeno

Anaerobios estrictos: requieren un 0% de oxgeno para crecer
Anaerobios aerotolerantes: sobreviven hasta con 0,5% de
oxgeno
Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y cofactores.
Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.
Producen infecciones oportunistas, generalmente endgenas.
Las infecciones generalmente son mixtas con bacterias
aerobias.
Incluyen a varios gneros de cocos y bacilos, grampositivos y
gramnegativos.
 Bacterias Anaerobias
Efecto txico del oxgeno

Efecto txico directo

Formacin de anin perxido y superxido

Oxidacin de enzimas esenciales que contengan grupos SH-

Inhibicin del metabolismo de flavoprotenas y NADH oxidasa

Imposibilidad para alcanzar potenciales redox bajos

Dficit o ausencia de catalasa y/o superxido dismutasa (presente en

aerotolerantes)
 Factores de virulencia de
bacterias anaerobias
Adherencia a las clulas
Polisacrido capsular
Endotoxina
Hialuronidasa, colagenasa, fibrinolisina,
neuraminidasa
Exotoxinas
 Flora Normal Anaerobia

Piel: la flora normal se limita a los folculos pilosos.

Boca y faringe: flora muy abundante. Las encas son un nicho muy
importante. Se asocian con infecciones a nivel de cabeza y cuello.

Intestinos: hay 1.000 veces ms anaerobios que aerobios. Degradan

sales biliares, sintetizan vitaminas y se oponen a la colonizacin por
otras bacterias. Se relacionan con infecciones abdominales.

Vagina: Predominan los Lactobacillus en condiciones normales.

Alteraciones hormonales y tratamientos con antibiticos alteran la
flora con sobrecrecimiento de otras bacterias (vaginosis). Se asocian
con aborto sptico.
 Flora normal anaerobia

Cavidad oral y TRS:

Piel: Bacilos gram-negativos:
Porphyromonas
Propionibacterium acnes
Prevotella, Fusobaterium
Peptostreptococcus nucleatum
Cocos gram-positivos
Actinomyces
100:1 (ANA/AER)

Tracto genital Colon

femenino:
Bacilos gram-negativos:
Bacilos gram-negativos: Bacteroides grupo
Porphyromonas fragilis Cocos gram-
Prevotella bivia-disiens positivos - Clostridium,
Cocos gram-positivos Eubacterium,
Lactobacillus - Bifidobacterium
Clostridium
1000:1 (ANA/AER)
Cocos Gramnegativos Anaerobios

Gnero Veillonella

V. parvula
Cocos Grampositivos Anaerobios

Gnero Peptostreptococcus

P. anaerobius
P. magnus
P. micros
P. asaccharolyticus
Bacilos Grampositivos Anaerobios

Gnero Actinomyces
A. israelii
A. odontolyticus
A. viscosus

Gnero Eubacterium
E. lentum
E. aerofaciens

Gnero Lactobacillus
L. cassei
L. bulgaricus
L. yoghurtii
Bacilos Grampositivos Anaerobios

Gnero Propionibacterium
P. acnes
P. propionicum
P. granulosum
P. avidum

Gnero Bifidobacterium
B. dansium

Gnero Mobiluncus
M. curtisii
M. mullieris
Bacilos Gramnegativos Anaerobios

Gnero Bacteroides
B. fragilis
B. thetaiotaomicron

Gnero Porphyromonas
P. gingivalis
P. endodontalis
Gnero Prevotella
P. melaninogenica
P. bivia
Gnero Fusobacterium
F. nucleatum
F. necrophorum
Caractersticas de las infecciones por
Anaerobios

ENDOGENAS

Polimicrobianas
Relacionadas a
mucosas
Sinrgicas
Caractersticas de las infecciones por
Anaerobios

EXOGENAS

Clostridiales
No Clostridiales
 Infecciones por anaerobios:

Odontgenas Cabeza y cuello

Abdominales
Piel y partes blandas
Ginecolgicas: vaginosis, abscesos
vaginales, aborto sptico, etc

SNC: abscesos cerebrales, empiema subdural

Oseas
 Infeccin por anaerobios:
Factores predisponentes

Factores predisponentes:
Enfermedades vasculares Cuerpos extraos
Shock Enfermedades malignas
Traumatismos Edema
Cirugas Infecciones previas
 Infecciones por anaerobios
Caractersticas
Olor ptrido de las secreciones purulentas
Proximidad a mucosas
Gas en el sitio de la infeccin
Necrosis tisular o gangrena
Tratamiento previo con aminoglucsidos (inactivos frente a anaerobios)
Infeccin secundaria a mordeduras animales o humanas
Paciente portadora de Dispositivo Intrauterino
Maniobras comprometedoras (ciruga abdominal o aborto provocado)
Evolucin lenta de la enfermedad
Coloracin negra de la herida
Grnulos de azufre (actinomycosis)
No desarrollo en aerobiosis de los microorganismos observados en el
Gram.
Infecciones por anaerobios
Son polimicrobianas y endgenas, por lo tanto su
etiologa puede ser predecible de acuerdo a la
localizacin.
El hallazgo de un patgeno determinado permite
sospechar cual es el foco de infeccin
Las caractersticas de la muestra nos permiten
sospecharlos.
Tratamiento basado en: debridamiento, drenaje y
ATB
 Infecciones por anaerobios
Prevencin

Uso racional de los antimicrobianos

Tratamiento de las enfermedades de base
Minimizar el uso de tcnicas invasivas
Disminuir el tiempo de internacin
Tratar rpidamente las heridas profundas, especialmente
las punzantes o secundarias a mordeduras humanas y de
animales
 Recoleccin,
transporte y
conservacin de
muestras
Muestras NO aptas para
cultivo anaerobios
Heces o materiales que estn
contaminados con contenido intestinal
(excepcin C. difficile)
Exudados vaginales o cervicales
Orinas tomadas por miccin espontnea o
sonda
Esputos, secreciones nasofaringeas o
materiales tomados por broncoscopa sin
proteccin.
Muestras aptas para cultivo
anaerobios
Lquidos normalmente estriles: LCR,
pleural, peritoneal, etc.
Muestras tomadas por puncin a travs de
piel sana (Heridas, hematomas,
colecciones, puncin suprapbica, etc.)
Muestras de endometrio, pulmn, etc.,
tomadas por biopsia o cepillos recubiertos.
Biopsias (de sitios sin flora habitual)
Transporte y conservacin de
muestras
Las muestras lquidas, purulentas y de volumen considerable
pueden transportarse en tubos estriles.
Las colecciones claras o de volmenes reducidos pueden
inyectarse en frasquitos con tapn de goma y atmsfera
inerte, sin introducir aire.
No es conveniente el sistema de transporte de muestras en
jeringas, porque permite la difusin del oxgeno al interior de
la muestra.
Los raspados, hisopados y piezas de tejido pequeas
pueden colocarse en tubos que contengan medio de Stuart,
Cary-Blair, pre-reducido.
Las piezas de tejido con un volumen mayor a 1 cm3, pueden
transportarse en recipientes estriles, sin conservantes.
 Transporte de Muestras

Frascos para hemocultivos

anaerbicos
Jeringa y aguja con tapn de goma
(No se aconseja por cuestiones de
bioseguridad)
Frascos con medios prerreducidos
Tiempo de transporte sugerido segn: volumen,
mtodo de conservacin y tipo de muestra

Tiempos hasta la
Muestra
siembra
Aspirados
< 1 ml 10 minutos
1-2 ml 30 minutos
> 2 ml 2 3 horas

Tejidos y biopsias
- +) en recipiente estril sin anaerobiosis
30 minutos
- +) en bolsa anaerbica
2- 3 horas
Conclusiones
Obtener las muestras en forma adecuada
Protegerlas de los efectos deletreos del
oxgeno
Mantenerlas a temperatura ambiente
Las mejores muestras son las obtenidas de
cavidades cerradas a travs de tejidos no
contaminados
 Bacterias anaerobias:
Diagnstico microbiolgico
e identificacin
Cultivo de anaerobios:
Muestra

Caractersticas macroscpicas:
aspecto, olor, fluorescencia, etc

Observacin microscpica:
flora polimicrobiana, leucocitos, orienta
terapia emprica, etc.
Grmenes Anaerobios - Diagnstico

Sospecha clnica

Toma de Muestra

Coloracin de Gram

Siembra en Agar sangre con y sin ATB

Incubar 48 hs a 37C en
anaerobiosis
Morfologa colonial y Gram

Pruebas bioqumicas
Diagnstico microbiolgico:
Cultivo

Utilizar medios frescos, recientemente preparados

o pre-reducidos

Procesar rpidamente

Evaluar qu microorganismos buscamos para

elegir el medio: suplementos especficos
Diagnstico microbiolgico:
Medios
Medios slidos NO selectivos: (Agar base
enriquecido: Brucella, Columbia, Schaedler, etc)
Agar Base + Vit K (1 mg/ml) + Hemina (5 mg/ml) +
sangre lacada al 5% (BHKA)
Medios slidos selectivos:
BHKA + KAN (30 a 50 g/ml)
BHKA + VAN (5 g/ml)

Medios lquidos: Resguardo (Backup)

Caldo BHI, tioglicolato suplementado con cistena, Vit K y
hemina.
Cultivo de anaerobios:
Atmsfera
Mtodos para generar atmsfera anaerobia:
Mezcla de gases: Se utiliza una mezcla compuesta por
5-10% H2, 5-10% CO2 y 80 a 90% de N2,
Generadores comerciales: Hay diferentes sistemas
comerciales:
Con catalizador (Gas Pack, BBL; Anaerobic Gas
generator, Oxoid): BH4Na y cido ctrico y una tableta
de HCO3Na para generar H2 y CO2
Sin catalizador: mezcla de reactivos que fijan el O2 y
generan CO2.
** Activados con agua: Anaerocult, Merck; Britania.
** Activan al contacto con el aire: Anaerogen, Oxoid; Key
Scientific, Mitsubishi; Genbox, Biomerieux
Cultivo de anaerobios:
Atmsfera

Sistemas de incubacin:
a) Jarras anaerobias
b) Cmara anaerobia
c) Bolsas anaerobias
Obtencin de atmsfera anaerobia
Obtencin de atmsfera anaerobia

Cmara Anaerobia
Cultivo de anaerobios:
Incubacin - Controles
Incubacin:
al menos 48 hs a 35-37C, hasta 5 a 7 das.
Atmsfera anaerobia (< 1% O2)
Control de anaerobiosis
Indicadores de Ox-Red: resarzurina, azul de
metileno
Recuperacin de anaerobios estrictos:
F. nucleatum, BGN pigmentados, etc.
Bacterias anaerobias
Identificacin
Identificacin de Anaerobios:
Limitaciones tcnica

Bacterias fastidiosas
Requerimientos culturales especiales
Atmosfera (<1% O2)
Nutrientes
Tiempo de desarrollo
Metabolismo (algunos inactivos)
 CULTIVO DE ANAEROBIOS:
Identificacin

Procedimiento a seguir con cada colonia:

Prueba de tolerancia
Descripcin
al oxgeno (CA)
macroscpica
(en agar chocolate en
Lata con vela)
Colonia
Coloracin de Gram
 IDENTIFICACION
PRESUNTIVA Gram

1- Bacilos gram negativos:

Discos potencia especial : 2- Bacilos gram positivos:
Vc 5g+ Cs 10g + Ka 1000 g Esporulados: No esporulados:
Indol Glucosa CAMP reversa Catalasa
Bilis Gelatina Urea Nitrato
Nitrato Lipasa Lecitinasa Indol
Esculina Indol
Catalasa
4- Cocos gram
positivos:
3- Cocos gram
SPS Indol
negativos:
Nitrato Esculina
Nitrato
Catalasa Urea
Fluorescencia (UV) Tablas
Especficas
Identificacin
IDENTIFICACION: CONCLUSIONES

Buena observacin micro y macroscpica

Siempre hacer pruebas bsicas de entrada
Utilizar pruebas rpidas en spot o enzimas
preformadas (inculo alto)
Asegurarse buen desarrollo en pruebas de
crecimiento.
Anaerobios Esporulados
Caractersticas generales

Son incapaces de desarrollar en contacto con el oxgeno

Resisten hasta 120C, la desecacin y cambios de pH
Forman parte de la flora normal del hombre y de los animales.
Se los encuentra ampliamente distribuidos en el agua, el suelo
y las plantas
Producen infecciones oportunistas.
Su accin se manifiesta por la produccin de potentes
exotoxinas.
Incluyen al gnero Clostridium con varias especies.
Las infecciones son muy tpicas y el diagnstico generalmente
es clnico.
Anaerobios Esporulados

Clasificacin

Neurotxicos
Clostridium tetani
Clostridium botulinum
Histotxicos
Clostridium perfringens
Clostridium septicum
Enterotxicos
Clostridium difficile
Clostridium perfringens
Clostridium tetani
Clostridium tetani

Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.

Las esporas ingresan a travs de heridas.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.
La forma vegetativa produce una exotoxina (tetanoespasmina).
La toxina difunde por va neural hasta las neuronas motoras.
En SNC bloquea la liberacin de glicina y GABA. A nivel perifrico
inhibe la liberacin de acetilcolinesterasa dando como resultado la
estimulacin incontrolada de los msculos esquelticos.
El paciente muere por parlisis de los msculos respiratorios.
Clostridium tetani
 Clostridium tetani - Prevencin

Se previene vacunando con el toxoide tetnico (Vacuna DPT o

antitetnica sola).
Se aplica a los 2, 4 y 6 meses. Primer refuerzo a los 18 meses y
segundo refuerzo al ingreso escolar. Cada 10 aos deben
aplicarse refuerzos. La embarazada debe vacunarse al 5to y 7mo
mes de embarazo.
Deben lavarse perfectamente las heridas profundas,
principalmente las producidas por material herrumbrado y las
contaminadas con tierra o materia fecal.
En caso de heridas puede emplearse profilcticamente la
antitoxina, la cual se administra en forma conjunta con la vacuna.
Clostridium botulinum
 Clostridium botulinum

Se encuentran en la tierra y sedimentos acuticos

La fuente ms comn de intoxicacin es la ingestin de
conservas o fiambres caseros.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina en el
alimento y la forma vegetativa produce una exotoxina.
La toxina ingresa por va digestiva y difunde por va humoral hasta
las neuronas motoras.
La toxina bloquea la liberacin de acetilcolina dando como
resultado una parlisis flccida de los msculos esquelticos.
El paciente muere por parlisis de los msculos respiratorios.
Clostridium botulinum
 Clostridium botulinum - Prevencin
Deben cumplirse estrictamente las normas de
seguridad en la manipulacin de los alimentos
en la industria alimentaria.
Debe educarse a la poblacin general respecto
de los procedimientos seguros de envasado de los
alimentos.
En caso de dudar del origen de los alimentos,
deben calentarse 10 minutos a 100C para destruir
la toxina.
No debe administrarse miel a lactantes menores de
1 ao de edad (Botulismo del lactante).
No existe vacuna de aplicacin universal.
 Aplicaciones de la
Toxina botulnica tipo A: Botox
Indicaciones terapeticas

Espasticidad asociada con accidente cerebro

vascular.
Tratamiento en pacientes con parlisis cerebral
Distona cervical (tortcolis) en adultos
Blefarospasmo y espasmo hemifacial
Correccin del estrabismo
Tratamiento focalizado de la hiperhidrosis axilar.
 Aplicaciones de la
Toxina botulnica tipo A: Botox
Indicacin cosmtica

Correccin esttica facial para

remocin de arrugas
glabelares.
Clostridium perfringens
 Clostridium perfringens

Se encuentran en el suelo e intestino del hombre y animales.

La bacteria ingresa a travs de heridas en forma endgena o
exgena.
Al alcanzarse el potencial redox adecuado la espora germina.
La forma vegetativa produce varias exotoxinas
Las toxinas difunden por contigidad produciendo necrosis tisular
y abundante cantidad de gas.
La infeccin se manifiesta como gangrena gaseosa cuando afecta
al tejido subcutneo o como mionecrosis cuando afecta al tejido
muscular
Con frecuencia debe amputarse el miembro afectado.
Clostridium perfringens
Clostridium perfringens
 Clostridium perfringens - Prevencin

No existe vacuna de aplicacin universal.

Deben extremarse las medidas de asepsia durante las cirugas
abdominales o al aplicar inyecciones intramusculares
profundas.
Deben tratarse rpidamente con antibiticos las heridas
contaminadas.
Cmaras hiperbricas.