Beruflich Dokumente
Kultur Dokumente
TEMA:
- Antibiticos Valoraciones Microbiolgicas
INTEGRANTES:
- Chochoca Vsquez, John.
- Garay Fuertes, Isabel.
- Mera Santa Cruz, Ermitanio.
- Tafur Carranza, Patricia.
- Tirado Enrquez, Fiorella.
- Valle Len, Charlie.
Pruebas y Valoraciones biolgicas:
Antibiticos Valoraciones Microbiolgicas
La potencia o actividad de los antibiticos se calcula comparando
el grado de inhibicin de microorganismos sensibles y especficos
determinada por concentraciones conocidas del antibitico
analizado y una sustancia de referencia.
En los antibiticos puede haber ligeros cambios qumicos que se
traducen en prdida de actividad antimicrobiana que no pueden
demostrarse por mtodos qumicos, por esta razn, en caso de
duda respecto a la actividad de un antibitico, los mtodos de
valoracin microbiolgica prevalecen sobre los mtodos qumicos.
Valoracin microbiolgica de un antibitico
Para valorar microbiolgicamente un antibitico, se pueden emplear dos tcnicas: la valoracin
en cilindro-placa (o en placa) y la valoracin turbidimtrica (o en tubo), ambos comparan la
respuesta del microorganismo de prueba, frente a una Sustancia de referencia (SRef) de
actividad conocida y una muestra tratadas en las mismas condiciones.
NOTA: Se debe tomar las precauciones de seguridad adecuadas al realizar estas valoraciones debido a las
posibles alergias a los frmacos ya que se utilizan cultivos vivos de microorganismos.
Valoracin de cilindro-placa (o en placa).
Se basa en la difusin del antibitico desde un cilindro vertical, a travs de una superficie
con agar solidificado en un plato o placa de Petri. el crecimiento del microorganismo
especifico inoculado en el agar resulta inhibido en una rea circular o zona en torno al
cilindro que contiene la solucin del antibitico.
Valoracin turbidimtrica (o en tubo).
Se basa en la inhibicin del crecimiento de un microorganismo en una solucin uniforme
del antibitico en un medio fluido que favorece el crecimiento del microorganismo en
ausencia del antibitico.
Unidades y sustancias de referencia.
La potencia de los antibiticos se designa en unidades (U) o en microgramos (g) de
actividad. En un principio, se consideraba que un antibitico seleccionado como sustancia
de referencia constaba en su totalidad de una sola entidad qumica y por lo tanto, se le
asignaba una potencia de 1 000 g/mg. En muchos de estos casos, a medida que los
mtodos de fabricacin y purificacin para ciertos antibiticos avanzaron en su desarrollo,
fue posible obtener antibiticos con ms de 1 000 g de actividad/mg.
CONTROLES QUE SE REALIZAN PARA LAS
VALORACIONES MICROBIOLGICAS
Aparato. El material del laboratorio usado para almacenar y transferir microorganismos de
prueba debe ser estril y estar exento de residuos que pudieran interferir en la valoracin ( ver
limpieza y material de vidrio). Usar un mtodo de esterilizacin validado tal como calor seco,
vapor o irradiacin; o utilizar material del laboratorio estril y desechable.
Control de temperatura. Se requiere control termosttico en varias etapas de una valoracin
microbiolgica: durante el cultivo de un microorganismo y la preparacin de su inculo, as como
durante la incubacin en las valoraciones en placa o tubo.
Microorganismo de prueba. Para asegurar el desempeo aceptable de los microorganismos
de prueba, estos deben almacenarse y conservarse de manera apropiada. Durante la validacin
o verificacin del mtodo se deben establecer las condiciones de almacenamiento especficas.
Si se observa un cambio en las caractersticas morfolgicas y fisiolgicas del microorganismo,
desechar los cultivos.
Almacenamiento prolongado. Para el almacenamiento prolongado, mantener los
microorganismos de prueba en una solucin de almacenamiento adecuada, tal como suero fetal
de ternero al 50%, en caldo glicerol al 10% - 15%, en caldo soya tripticasena, sangre de oveja
desfribinada o en leche descremada. Los cultivos que se almacenan durante periodos
prolongados se recomienda liofilizarlos; se prefieren temperaturas de -60C o inferiores; son
aceptables temperaturas inferiores a -20C.
Cultivos primaros. Preparar los cultivos primarios transfiriendo microorganismos de prueba de los
viales de almacenamiento prolongado a medios apropiados e incubar en condiciones adecuadas.
Almacenar los cultivos primarios a la temperatura apropiada, por lo general a 2 C- 8 C, y desechar
despus de tres semanas. Se puede usar el mismo cultivo primario para preparar los cultivos de
trabajo por un mximo de siete das nicamente.
Cultivos de trabajo. Preparar los cultivos de trabajo transfiriendo el cultivo primario a medios slidos
apropiados para obtener colonias aisladas. Incubar los cultivos de trabajo en condiciones apropiadas
para obtener un crecimiento satisfactorio para la preparacin de los inculos de prueba.
Crecimiento o desempeo no caracterstico de un microorganismo de prueba. Usar cultivos
madre, cultivos primarios o cultivos de trabajo nuevos cuando un microorganismo de prueba presente
crecimiento o desempeo no caracterstico.
Diseos de valoracin. Los diseos experimentales adecuados son clave parra incrementar la
precisin y minimizar el sesgo.
Valoracin en cilindro-placa. Las comparaciones se limitan a las relaciones entre las mediciones
del dimetro de la zona dentro delas placas, sin tener en cuenta la variacin entre placas.
Valoracin turbidimtrica. Para evitar un sesgo sistemtico colocar aleatoriamente tubos
duplicados en gradillas separadas de manera que cada gradilla contenga un conjunto completo de
tratamientos. La valoracin turbidimtrica, debido a la configuracin de las muestras en las gradillas
para tubos de ensayo es sensible a ligeras variaciones de temperatura.
METODO DE CILINDRO - PLACA
Esta tcnica es la ms utilizada dada su exactitud y
sensibilidad; se fundamenta en la difusin del antibitico
desde un cilindro vertical (o desde una perforacin circular
en el agar) a travs de una capa de agar solidificada en una
placa de petri hasta inhibir totalmente el crecimiento del
microorganismo aadido en el medio de cultivo, en un rea
circular o zona de inhibicin entorno al cilindro que contiene
una solucin del antibitico. Las distintas respuestas
obtenidas (dimetros de los halos de inhibicin) son
proporcionales a las dosis de antibitico utilizadas.
METODO TURBIDIMETRICO
Se basa en la inhibicin del crecimiento de un cultivo
de microbiano en una solucin uniforme del antibitico
en un medio lquido que promueva su rpido
crecimiento en ausencia del antibitico.
El mtodo consiste en inocular en un medio adecuado
una suspensin del microorganismo escogido, que
tenga una sensibilidad al antibitico a ser examinado;
tal que se d una inhibicin lo suficientemente grande
en las condiciones del ensayo. Usar una cantidad
conocida de la suspensin escogida; as como obtener
una medida de opacidad leble despus de un periodo
de incubacin cerca de 4 horas.
PREPARACION DEL INOCULO
INCULOS
Suspender el organismo de prueba obtenido de un cultivo reciente en 3 ml de
solucin salina SR estril. Enterococcus hirae y Staphylococcus aureus se cultivan en un
medio liquido no en agar. Espaciar la suspensin salina sobre la superficie de dos o ms
placas de agar (ver tabla 8). Incubar durante el tiempo y a la temperatura o hasta que el
crecimiento sea evidente.
Los medios requeridos para la preparacin de los inculos de los organismos de prueba
se preparan con los ingredientes listados en esta seccin .Se permite pequeas
modificaciones de los ingredientes individuales ; asimismo , se pueden usar medios
deshidratados reconstruidos ,siempre que los medios resultantes tengan propiedades de
crecimiento.
Medios : disolver los ingredientes en agua para obtener y ajustar las soluciones con
hidroxido de sodio o acido clorhdrico , segn se requiera , de modo que despus de la
esterilizacin con vapor el PH sea el especificado
TABLAS
SOLUCIONES AMORTIGUADORAS
MEDIOS Y SOLUCIONES PARA
ANTIBITICOS