MECANISMOS

REGULADORES Y
FERMENTACIONES
INDUSTRIALES
I. REGULACION Y COORDINACION DEL METABOLISMO
MICROBIANO
II. INDUCCION
III. REGULACION CATABOLICA
IV. REGULACION POR RETROALIMENTACION
V. REGULACION DE LA SINTESIS DE RNA POR
AMINOACIDOS
VI. REGULACION POR EL ESTADO O CARGA
ENERGETICA
VII. REGULACION POR CONTROL DE LA PERMEABILIDAD
 REGULACION Y COORDINACION DEL
METABOLISMO MICROBIANO
UN MICROORGANISMO QUE CRECE SIGUE EL SIGUIENTE
PROCESO METABOLICO
1. Rompe molculas de alto almidn
peso molecular

glucosa, 6C
2. Introduce en la clula
derivados ms pequeos
piruvato, 3C

3. Los degrada a molculas

ms pequeas Amino cidos,
nucletidos, vitaminas,
carbohidratos y
4. Los convierte en unidades cidos grasos.
monomricas
Protenas, coenzimas,
cidos nucleicos,
Mucopptidos,
 QUE IMPLICA TODO ESTE PROCESO METABOLICO ?

Produccin de cientos de enzimas que actan

coordinadamente para evitar el caos.

500 reacciones metablicas se conectan con la va glucoltica y

el ciclo del cido ctrico.

Cada reaccin requiere una enzima determinada

QUE POSEE LA CELULA PARA ACTUAR

COORDINADAMENTE ?

Mecanismos de control, que regulan las reacciones

qumicas.

Por lo tanto: Una clula ideal no tiene produccin excesiva

de metabolitos
 EXISTEN MICROORGANISMOS MAL
REGULADOS QUE
PRODUZCAN EN DEMASIA DETERMINADOS
METABOLITOS ?
SI

Esto ha permitido que existan microorganismos

mal regulados en determinadas rutas bioqumicas
y por lo tanto produzcan en demasa determinados
metabolitos.

!!!! Estos microorganismos nos

interesan .!!!!!

PODEMOS PROVOCAR QUE UN

MICROORGANISMO BIEN REGULADO
PRODUZCA UN DETERMINADO COMPUESTO
ALTERANDO SUS
MECANISMOS REGULADORES ?
INDUCCION
I. INDUCCION

ENZIMAS CONSTITUTIVOS
Enzimas siempre presentes entre la enorme cantidad de
enzimas que un microorganismo es capaz de producir .

ENZIMAS INDUCIBLES
Enzimas no presentes, o lo estn en cantidades mnimas y
que ante la presencia de una sustancia (sustrato), la clula
aumenta enormemente su cantidad.

INDUCTOR
Sustancia que incrementa la sntesis de novo de las
enzimas inducibles
INDUCCION
Forma de regulacin de la expresin de genes,
slo cuando el apropiado sustrato del
enzima est presente.
Muchas enzimas catablicas [la mayor parte
industriales] son inducibles.

EL MECANISMO DE LA INDUCCCION
[En los procariotas]:

Protenas represoras controlan la

transcripcin gnica

comienza . . .

Cuando la protena represora y la

enzima RNA polimerasa se unen fuertemente
a regin operadora y regin promotora
Si est presente la protena represora : la
RNA polimerasa no puede actuar, no
producindose la transcripcin.

Si no est presente la protena represora :

la RNA polimerasa se une, producindose
la transcripcin.

La protena represora reconoce un

ligando especfico y esta unin activa la
transcripcin al disminuir la afinidad de la
protena represora por su secuencia de
DNA especfica (operador).
INDUCCION NEGATIVA
(control negativo)

Regulacin, en cual el
gen/es (operon) est
reprimido, en condiciones
normales
 OPERN Lac DE Escherichia coli :
SINTESIS DE ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN GLUCOSA
Y GALACTOSA.

AUSENCIA DE LACTOSA: protena represora est unida

al operador, bloqueando el acceso de la RNA polimerasa
a su regin de unin (promotor), impidiendo la
transcripcin

PRESENCIA DE LACTOSA: sta se une a la protena

represora desligandola del operador permitiendo el
acceso de la RNA polimerasa al promotor activando la
transcripcin

La lactosa es un inductor natural del opern Lac de

Escherichia coli.
 OPERN Lac DE Escherichia coli :
SINTESIS DE LAS ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN
GLUCOSA Y GALACTOSA.
 OPERN Lac DE Escherichia coli :
SINTESIS DE LAS ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN
GLUCOSA Y GALACTOSA.
 OPERN Lac DE Escherichia coli :
SINTESIS DE LAS ENZIMAS QUE HIDROLIZAN LACTOSA EN
GLUCOSA Y GALACTOSA
 INDUCCION POSITIVA

( control positivo )

Mecanismo alternativo de la regulacin negativa:

Es la regulacin por medio de protenas

activadoras de la expresin gnica.

En este caso la protena activadora facilita la

unin de la RNA polimerasa.

Estas protenas activadoras, al igual que las

protenas represoras, se unen a ligandos
especficos (inductor) pero en este caso se
incrementa la afinidad de la protena activadora
por el DNA con lo que se activa la transcripcin.
 Si la protena activadora (Ej. CAP ) se
halla presente:

La RNA polimerasa se une y tiene lugar

la transcripcin

Si la protena activadora (Ej. CAP ) no se

halla presente:
La RNA polimerasa no se une y no tiene
lugar la transcripcin

Este tipo de control gnico recibe el

Controles positivos y negativos de la
transcripcin del ADN en mRNA.
MANIPULACION, A NIVEL DE SINTESIS, DE
LA PRODUCCION DE UNA ENZIMA

Podemos manipular, a nivel de sntesis,

la produccin de un enzima bien sea:

1. Introduciendo inductores autnticos o

anlogos. isopropil -d-galactsido es
el mejor inductor del operon lac

2. Por mutacin del gen regulador (el que

codifica para la protena represora)
inactivando la protena represora.

3. Por mutacin del operador con lo que

la protena represora no presentar
afinidad por l.
REGULACION CATABOLICA
Represin Catablica
(Efecto de la Glucosa)
MECANISMOS REGULADORES Y
FERMENTACIONES INDUSTRIALES

III. REGULACION CATABOLICA

SUPONGA A LA BACTERIA Escherichia Coli
CRECIENDO EN UN MEDIO CON VARIAS
FUENTES DE CARBONO
QUE SUCEDERIA ?

1. La bacteria podra sintetizar enzimas para

degradar todas las fuentes de carbono
presentes.
Esto supondra un enorme derroche de energa
al sintetizar protenas que no son
estrictamente necesarias.
2 La bacteria lo que hace es sintetizar el sistema
enzimtico para la utilizacin del mejor
sustrato, reprimindose la sntesis de los
otros sistemas enzimticos.
 REPRESION POR CATABOLITO :
EFECTO GLUCOSA

La glucosa fu el primer sustrato

estudiado que ocasionaba represin
catablica
Por lo que tambin se le llama efecto
glucosa, aunque no es el nico
sustrato que produce este efecto.

Slo cuando se agota el primer

sustrato se sintetizan enzimas para
la utilizacin del siguiente.
Efecto de la glucosa en la expresin de las protenas codificadas
por el opern lac

El transporte de glucosa al
interior de la clula inhibe a la
enzima adenilato ciclasa que
es la que produce el AMPc.
Debido a que el papel del
complejo CAP-AMPc es encender
la transcripcin, este tipo de
control se considera como
CONTROL POSITIVO.
El AMPc se une a una protena de
unin llamada CAP o CRP. El
complejo AMPc-CAP y no la
protena CAP por s sola, es capaz
de unirse a un sitio en los
promotores de los operones
sensibles a la represin catablica.
La unin con el complejo hace al
promotor ms eficiente, por lo
tanto se llevarn a cabo ms
procesos de iniciacin de la
REPRESION POR CATABOLITO: FUENTES
DE CARBONO REPRESORES

La combinacin de la induccin y
represin aseguran una economa
celular notable ya que slo se sintetizan
los enzimas indispensables.

Evitando el uso de fuentes de carbono

represoras en el medio de cultivo se
puede aumentar la produccin de
enzimas sensibles a la represin
catablica.
Por ejemplo: usando manosa en el
crecimiento de Pseudomonas
fluorescens var. cellulosa se produce
 REGULACION
POR
RETROALIMENTACION
IV. REGULACION POR RETROALIMENTACION

REGULACION DE RUTAS ANABOLICAS O DE BIOSINTESIS

En contraste a las rutas catablicas que suelen estar

reguladas por el sustrato inicial.
Como ocurre en los dos sistemas de regulacin ya
descritos: Induccin y Regulacin catablica

Las rutas anablicas o de biosntesis suelen estar

reguladas por el producto final
Como es el caso de la retroalimentacin
 Las rutas anablicas o de biosntesis suelen estar reguladas por el producto final
Como es el caso de la retroalimentacin (feedback)

sustrato
producto
inicial
final

Ribosoma
INDUCCION
mRNA
represin

DNA
Las rutas catablicas suelen estar reguladas por el sustrato inicial.
Como ocurre en los dos sistemas de regulacin : Induccin y Regulacin
catablica
Existen dos tipos fundamentales
de regulacin por
retroalimentacin:

4.1. Inhibicin por

retroalimentacin

4.2. Represin por

retroalimentacin

4.3. Regulacin por

retroalimentacin en rutas
ramificadas
4.1. INHIBICIN POR
RETROALIMENTACIN

Es un fenmeno en el cual un metabolito,

generalmente el metabolito final de una
secuencia metablica Inhibe la accin de una
enzima anterior que, generalmente, es la
primera de la secuencia.
INHIBICIN POR
RETROALIMENTACIN
MATERIAL INICIAL

Enzima A

Primer intermediario

Enzima B

Segundo intermediario

Enzima C

Tercer intermediario

Enzima D

PRODUCTO FINAL

LA ACTIIVIDAD DE LA PRIMERA ENZIMA DE LA VIA ES INHIBIDA POR EL PRODUCTO

FINAL CONTROLANDOSE SI LA PRODUCCION DEL PRODUCTO FINAL
Inhibicin por retroalimentacin

El inhibidor es el producto final y no un derivado en contraste

con el sistema clsico de inhibicin por competicin

El inhibidor (producto final) no se parece ni en tamao, ni en

forma, ni en carga al sustrato.

Por lo que se llama inhibicin alostrica.

En la inhibicin por competicin:

El inhibidor se asemeja al sustrato y compite por el sitio activo

del enzima (Inhibidor Isostrico).
Las ENZIMAS ALOSTRICOS
generalmente :

Estn formados por dos o ms

subunidades.

Una de las cuales lleva el centro

activo (sitio de unin al sustrato); y

La otra el sitio de unin al inhibidor

Cuando el inhibidor se une a su centro,

se distorsiona la conformacin del
enzima impidiendo la unin del enzima
 Como es posible qu un producto final
inhiba la actividad de una enzima que acta
sobre un sustrato muy poco relacionado con
el ?
ENZIMA ALOSTERICA: Mecanismo de inhibicin enzimtica por efecto alostrico

Sitio alostrico Sitio de unin con el sustrato

Efector alostrico Sustrato

Cambio de conformacin sn sl sitio

de unin con el sustrato. La reaccin enzimtica procede
Se inhibe la reaccin enzimtica

El sustrato no
se puede unir

Cuando el efector se combina con el sitio alosterico, se altera la conformacion

de la enzima que el sustrato ya no se puede unir
Regulacin de la sntesis de lisina por
retroalimentacin
4.2. REPRESIN POR
RETROALIMENTACIN

La represin por retroalimentacin es un

fenmeno muy comn.
Regula la sntesis de aminocidos y nucletidos
pricos y pirimidnicos.

Por ejemplo:
Si existe un nivel alto del aminocido triptfano
en el medio de cultivo, el microorganismo no va
a gastar energa sintetizando los enzimas
implicados en la biosntesis de triptfano.
ESTA REGULACIN SE LLEVA A CABO
MEDIANTE EL PRODUCTO FINAL

EN ESTE CASO TRIPTFANO, QUE

IMPIDE QUE LOS GENES QUE CODIFICAN
PARA ESOS ENZIMAS NO SE
TRANSCRIBAN EN RNA MENSAJERO.
 EL OPERN TRP EN Escherichia
coli

En Escherichia coli el opern trp

est formado por:

Un promotor
Un operador, y
Cinco genes que codifican para
los enzimas implicados en la
sntesis de triptfano.
 EL OPERN TRP EN Escherichia
coli

El GEN REGULADOR codifica para una

protena represora inactiva que no se
puede unir al operador por lo que la RNA
polimerasa se une al promotor
sintetizndose las enzimas.

Por el contrario, si el triptfano est

presente y no se necesita ms, la
protena represora se une al triptfano y
se convierte en su forma activa, la cual se
une al operador bloqueando la unin de
la RNA polimerasa al promotor e
impidiendo la sntesis de los enzimas.
4.3. REGULACIN POR RETROALIMENTACIN
EN RUTAS RAMIFICADAS: VIA
BIOSINTETICA

Inhibicin por retroalimentacin

PROLINA

ACIDO GLUTAMICO

ARGININA

Inhibicin por retroalimentacin

Existen tres tipos de regulacin por
retroalimentacin en rutas ramificadas:

a) Isoenzimas o Diferencial

b) Concertado

c) Acumulativo
 a. Isoenzimas o Diferencial

A B C F G

Varios enzimas diferentes (denominados isoenzimas)

catalizan la reaccin inicial estando cada uno de ellos
inhibido por un producto distinto.
 Concertada

A B C F G

Distintos productos se unen para inhibir

una nica enzima.
 c. Acumulativa

A B C F G

Distintos productos inhiben en distinta

proporcin a una nica enzima.
 A la hora de utilizar un
microorganismo a nivel
industrial:

El ms fcil de desregular sera

el concertado.

Por lo que, se tiende a usar

aquellos microorganismos que
utilizan este sistema.

Es el caso de Corynebacterium
glutamicum para la produccin
de lisina (aminocido deficitario
en vegetales).
MECANISMOS REGULADORES Y
FERMENTACIONES INDUSTRIALES

V. REGULACION DE LA SINTESIS DE RNA POR

AMINOACIDOS

Escherichia coli un "control global"

Regular la sntesis de RNA en los casos de crisis
metablica

La mayor parte de ejemplos de

regulacin vistos responden a
condiciones nutricionales especficas:

Presencia de un disacrido, o

Ausencia de un aminocido en el medio.

 Escherichia coli un "control global"
Regular la sntesis de RNA en los casos de crisis
metablica

Hace ms de 20 aos se descubri en

Escherichia coli un "control global" :
Cuando se transferan las clulas de
un medio rico a un medio pobre se
paraba la sntesis de RNA
disminuyendo la sntesis de
protenas.

Esta observacin indica que las clulas

bacterianas pueden regular la sntesis
de RNA en los casos de crisis
Actualmente se sabe que SE
INHIBE sntesis de rRNA y tRNA
bajo esas condiciones:

Cuando se ACUMULAN dos

guaninas polifosfatos
(ppGpp y pppGpp) las
cuales son sintetizadas por
la enzima Rel A
 CUANDO FALTA UN AMINOCIDO, EN LA
SNTESIS DE PROTENAS

El correspondiente tRNA se encuentra en el

ribosoma sin su grupo aminoacil.

Provoca que la enzima Rel A sintetice pppGpp

a partir de GTP (que se utiliza como fuente de
energa en muchos pasos de la sntesis
proteica).

Este pppGpp por medio de una pirofosforilasa

llamada Gpp lo convierte en ppGpp que a su
vez inhibe la sntesis de rRNA y tRNA
permitiendo nicamente la sntesis de
aminocidos.
 CUANDO EXISTEN NIVELES ACEPTABLES
DE AMINOCIDOS

El ppGpp por medio de una 3'

fosforilasa llamada Spo T se convierte
en el intermediario normal GDP
GTP

El mecanismo por el cual se activan unos

mRNA (los implicados en la sntesis de
aminocidos) y otros se inhiben no se
conoce de momento.

Este mecanismo, preciso y rpido,

protege a la bacteria de un crecimiento
deficiente
MECANISMOS REGULADORES Y
FERMENTACIONES INDUSTRIALES

VI. REGULACION POR EL ESTADO O CARGA

ENERGETICA

ESTADO ENERGETICO DE LA CELULA

Existe una ecuacin emprica mediante la cual se

puede determinar el estado energtico de una
clula:

[ATP] + 1/2 [ADP]

E= ---------------------------------
[ATP] + [ADP] + [AMP]

Cuando el valor de E es alto: indica que no hay

biosntesis

Cuando el valor de E es bajo: indica que hay

biosntesis
puesto que se est
ESTADO ENERGETICO DE LA CELULA

Se ha comprobado que una clula en

fase logartmica de crecimiento,
metabolismo primario, presenta un
valor de E = 0,5.
Sin embargo, en fase estacionaria
tiene un valor de E = 0,8.
En fase estacionaria cambia
drsticamente el metabolismo celular
pasando al metabolismo secundario.
Los motivos por los cuales ocurren
estos cambios no se conocen, aunque
deben ser mltiples debido al gran
nmero de reacciones metablicas
donde actan el ATP, ADP y AMP.
GULACION POR CONTROL DE LA PERMEABILIDAD

La membrana citoplasmtica controla el paso

de los nutrientes al interior de la clula, as
como hacia el exterior de la clula.

Existen cuatro mecanismos que regulan el

transporte de nutrientes.

1.- Difusin pasiva

2.- Difusin facilitada
3.- Transporte activo
4.- Transporte por translocacin de
grupo
 1. Difusin pasiva

Molculas de H2O y algunos nutrientes

liposolubles pasan libremente a travs
de la membrana hasta equilibrar
concentraciones.

No hay consumo de energa.

 2. Difusin facilitada

Los nutrientes se unen a una

protena transportadora para
atravesar la membrana pasando
de mayor a menor concentracin.

No hay consumo de energa.

 3. Transporte activo
La mayor parte de los nutrientes son
transportados mediante este
mecanismo.

Este proceso permite concentrar, en el

interior celular, altos niveles de
nutrientes necesarios para las
actividades metablicas.

Hay consumo de energa.

El ATP distorsiona el sitio de unin a la

protena transportadora dificultando a
la molcula la salida de la clula.
 4. Transporte por translocacin de
grupo

En este tipo la protena transportadora

es una enzima que aade un grupo
fosfato del cido fosfoenolpirvico al
nutriente durante el transporte.

Este nutriente alterado ya no es capaz de

unirse a la protena transportadora por lo
que se acumula dentro de la clula.
 Inhibicin feedback
Generalmente, el control de actividad de las enzimas es por encendido o apagado de las
enzimas y est asociado con enzimas alostricas durante la inhibicin de feedback:

Cuando los productos en una va aumentan, ellos mismos producen feedback a la

primera enzima de la va y cierran la sntesis de los productos finales e intermedios.
 Vas ramificadas
Feedback acumulativo: ni F ni H pueden reducir separadamente por
completo la actividad de e1, posiblemente cada uno puede lograr una
reduccin parcial pero juntos pueden pararla totalmente.
Feedback secuencial: F y H provocan feedback en e4 y e6
respectivameante provocando la acumulacin de D.
D entonces produce feedback sobre e1.
Feedback multivalente: ni F ni H por separado producen efecto
alguno en e1 pero juntos tienen actividad inhibitoria.