Published March 23, 2015

Una respuesta a la lesin estril ha sido optimizado para

incluir componentes esenciales de reparacin y excluir
influencias no deseadas o perturbadores.

Una lesin estril se define clsicamente como la lesin de

tejidos en ausencia de infeccin.

Se caracteriza por la presencia temprana de Neutrfilos al

sitio , un proceso que ha sido ampliamente estudiado y bien
documentado, destacando las fases secuenciales de
reclutamiento celular.
 Antecedentes
Los monocitos son clulas circulantes de la sangre que derivan
de progenitores mieloides.

Son importantes en la respuesta inflamatoria innata, ya que

se diferencian en macrfagos o en clulas dendrticas bajo
ciertas condiciones.

Se han identificado en ratones dos subpoblaciones

mayoritarias de acuerdo a la expresin de Ly6C y de los
receptores de quimosinas CCR2 y CX3CR1
 La poblacin ms numerosa en estado basal se
define como Ly6ChighCCR2high CX3CR1low, y la segunda
como Ly6ClowCCR2lowCX3CR1high.

Ambas se corresponden con las poblaciones

humanas
CD14+CD16-CCR2highCX3CR1low (clsica)
CD14+CD16++CX3CR1highCCR2low (no clsica)
CCR2 es importante para la salida de monocitos de la
mdula sea
Tanto los monocitos adherentes CX3CR1high como los circulantes
CCR2hi, son reclutados hacia los lugares de inflamacin.
 Materiales y Mtodos
Ratones C57BL

Los anticuerpos y las manchas.

Anti- mouse- Ly6c, Anti- mouse Il-4, anti- mouse il-10 y anti- CD16
y CD32.

Ozono y el bloqueo de los tratamientos con anticuerpos

Para el agotamiento de neutrfilos, se administraron los ratones
ya sea con 200 ug purificado anti-Ly6G (1A8) o control de isotopo
(IgG2a) ip 24 h y 1 h antes de la induccin de lesiones y de nuevo
24 h despus de la induccin de lesiones
 Inflamacin estril inducida por la lesin necrtica focal.
Los ratones fueron anestesiados con isoflurano y una pequea incisin se hizo
justo por debajo del nivel del diafragma para exponer el hgado. Se indujo Una
lesin focal nica en la superficie del hgado a una profundidad de ~ 80 micras
utilizando la punta de una aguja calentada 30 de calibre montada en un
dispositivo electro-cauterio

Preparacin del hgado de ratn para microscopa intravital.

El ratn se coloco en posicin lateral derecha y se cortaron los ligamentos que
unen el hgado al diafragma y el estmago permitiendo el hgado que se
exterioriza en un cubreobjetos de cristal en la platina del microscopio
invertido.
 Generacin de modelos 3D
Planos xy ( con intervalos de 5um), se utilizo una unidad de enfoque ASI a una de
Olympus, modelos 3D extrados de software Velocity .

Anlisis semicuantitativo de monocitos y clulas necrticas.

Las instantneas fueron generados a partir de vdeos intravital y las imgenes correspondientes
al canal rojo de fluorescencia (RFP + ; o canal verde fluorescente (GFP clulas Sytox naranja o
PI) + fueron exportados para su anlisis en ImageJ clulas o Sytox verde).

Citometra de flujo anlisis.

Los ratones fueron sacrificados y las biopsias hepticas de la zona lesionada se recogieron en PBS
fro. Una sola clula suspensiones fueron generados por la rotura mecnica a travs de una malla de
nylon de 40 micras, se lavaron con PBS fro, se resuspendieron en 40% de Percoll isotnico (Sigma-
Aldrich) y en capas sobre 70% de Percoll isotnico.
Resultados

Proinflammatory monocytes home to site of sterile injury and facilitate tissue
repair. (ac) Images from 8 to 48 h after focal necrotic injury of the liver demonstrating
the response of Ccr2RFP/+ (left) and Ccr2RFP/RFP monocytes (right). (a) CCR2-RFP monocytes
(red), (b) necrotic cells (green), (c) overlay. Bars, 200 m. Data are representative of at
least four independent experiments. (d and e) Quantification of RFP monocytes
in Ccr2RFP/+ and Ccr2RFP/RFP mice (measured by percentage of area covered by RFP) either
surrounding lesion (d) or within the lesion (e). Data are representative of at least two
independent experiments, each with three mice per group. (f) Quantification of dead
cells (measured as percentage of area covered by Sytox green) within the lesion. (g)
Quantification of monocytes per field of view (FOV) in the liver from sham-
operated Ccr2RFP/+ and CcrRFP/RFP mice. (dg) n = 6 mice per group; error bars are the SEM.
(h) Monocytes were harvested from the bone marrow of Ccr2RFP/+ and Ccr2RFP/RFP mice,
mixed 1:1 and i.v. transferred to a WT recipient 6 h after focal injury. 24 h after transfer,
the ratio of Ccr2RFP/+:Ccr2RFP/RFP monocytes were measured in the blood and surrounding
the liver injury. Data are representative of one experiment with three mice per group.
 Conclusin
Estos datos demuestran una serie continua de fenotipos de monocitos en
lugar de los dos perfiles circunscritos propuesto originalmente

Esta convergencia probablemente refleja una respuesta inmune y la

reparacin ptima

Nuestra nueva comprensin de la plasticidad de monocitos dentro del

microambiente del tejido potencialmente podra abrir la puerta a nuevas
dianas de intervencin teraputica en el cncer y otras enfermedades.