de Mendel, los genetistas realizaron ingeniosos experimentos para dilucidar cmo estaban dispuestos los genes en los cromosomas y cmo se transmitan de generacin a generacin Sin embargo, quedaban sin resolver dos interrogantes bsicas: Cmo funcionan y de qu estn hechos los genes? Era claro que la sustancia de la que estaban hechos los genes deba tener la capacidad de almacenar informacin en una forma que pudiera ser recuperada y utilizada por la clula. Incontables experimentos genticos con una amplia variedad de organismos han demostrado que los genes suelen ser muy estables en su paso de una generacin a otra. Sin embargo, en ocasiones se observaba que un gen se converta en una forma distinta; tales cambios genticos, llamados mutaciones, se transmitan despus sin cambio a generaciones posteriores. Cuando se supo ms acerca del cometido central de las protenas en virtualmente cada aspecto de la estructura y el metabolismo celulares, otros cientficos consideraron que stas eran los principales candidatos para constituir el material gentico. LA MAYOR PARTE DE LOS GENES PORTAN INFORMACION PARA LA SINTESIS DE PROTEINAS
La idea de que los genes y las enzimas (las
cuales son protenas, segn se sabe ahora) se relacionan de alguna manera fue expresada por primera vez con claridad por el mdico ingls Archibald Garrod, quien propuso que algunas enfermedades hereditarias del ser humano eran causadas por bloqueo de una secuencia de reacciones qumicas dentro del organismo. Garrod expuso una enfermedad gentica llamada alcaptonuria. que tiene un patrn de herencia autosmica recesiva simple. El trastorno afecta la va metablica que degrada (rompe) los aminocidos fenilalanina y tirosina y termina por convertirlos en dixido de carbono y agua. La orina de las personas afectadas contiene un intermediario de esta va, el cido homogentsico, el cual se torna negro cuando se expone al aire. Una mutacin en un gen especfico poda estar asociada con la ausencia o la presencia de una enzima especfica. A principios del decenio de 1940 se logr un avance importante para comprender la relacin entre genes y enzimas cuando George Beadie y Edward Tatum desarrollaron un nuevo enfoque para aborda el problema. Beadle y Tatum comenzaron por exponer una gran cantidad de esporas asexuales de Neurospora de tipo silvestre a rayos X o radiacin ultravioleta, a fin de inducir Las esporas sexuales aisladas se cultivaron en un medio completo, con todos los aminocidos y vitaminas normalmente necesarios para Neurospora. Tambin se someti a prueba cada cepa en un medio mnimo. Si una cepa aislada proliferaba en el medio completo pero no lo haca cuando era transferida al medio mnimo, Beadle y Tatum consideraban que haba ocurrido una mutacin que haba hecho incapaz a esa cepa de producir uno de los compuestos esenciales para el crecimiento. Esta correspondencia uno a uno entre genes y enzimas se enunci de manera sucinta como la hiptesis de un gen, una enzima. La idea de que un gen podra codificar la informacin necesaria para producir una sola enzima se sostuvo por casi un decenio, hasta que nuevos descubrimientos obligaron a modificar esta definicin. Se hizo evidente que los genes controlan no slo enzimas, sino tambin otras protenas. Linus Pauling y sus colaboradores demostraron que la estructura de la hemoglobina puede ser modificada por una mutacin en un solo locus. la definicin de gen se modific para enunciar que un gen codifica una cadena polipeptdica. Aunque se ha demostrado que inclusive esta definicin slo es correcta en parte, se sigue definiendo al gen en trminos de su producto. LAS PRUEBAS DE QUE EL DNA ES EL MATERIAL HEREDITARIO SE OBTUVIERON POR PRIMERA VEZ EN MICROORGANISMOS
Durante el decenio de 1940 la mayora de
los genetistas y bioqumicos estaban convencidos de que el material gentico deba ser protena. Se haba demostrado que los genes controlan la produccin de protenas. Debido a su complejidad y diversidad evidentes en comparacin con otras molculas, las protenas parecan ser el ingrediente del que se hacan los genes. En contraste, ya se saba que el DNA y otros cidos nucleicos estn formados por slo cuatro nucletidos, y lo que se conoca acerca de su configuracin los haca lucir relativamente montonos y poco atractivos para la mayor parte de los cientficos. En 1928, Frederick Griffith realiz una curiosa observacin acerca de dos cepas de neumococos (un tipo de bacterias) En 1944, O.T. Avery, C.M. MacLeod y M. McCarty del Rockefeller Institute, identificaron qumicamente como DNA el principio transformador de Griffith Durante los siguientes aos se acumularon nuevas pruebas de que los ncleos haploides de los granos de polen y los gametos (como el espermatozoide) contienen slo la mitad de la cantidad de DNA presente en clulas somticas diploides de la misma especie Debido a que era aceptada por todos la idea de que los genes se encuentran en los cromosomas, estos descubrimientos que correlacionaban el contenido de DNA con el nmero cromosmico aportaron una fuerte prueba circunstancial sobre la importancia del DNA en la herencia. LA ESTRUCTURA DEL DNA LE PERMITE ALMACENAR INFORMACION Y DUPLICARSE CON FIDELIDAD
El DNA no fue ampliamente aceptado como
material gentico sino hasta que James Watson y Francis Crick propusieron un modelo para su estructura, el cual era extraordinariamente explicativo. Su importantsima contribucin fue integrar toda esta informacin en un modelo que demuestra cmo la molcula puede a! mismo tiempo contener informacin y servir como su propia plantilla o patrn para autoduplicarse. LOS NUCLETIDOS PUEDEN ESTAR UNIDOS POR ENLACES COVALENTES EN CUALQUIER ORDEN Y FORMAR POLMEROS LARGOS
Cada elemento de construccin del
DNA es un nucletido, que consiste en un azcar pentosa (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. La base nitrogenada se une al carbono 1' del azcar, y el fosfato se une al carbono 5'. Las bases son dos purinas, adenina (A) y guanina (G), y dos pirimidinas, timina (T) y citosina (C). Los nucletidos estn unidos por enlaces covalentes para formar un esqueleto de azcar y fosfato alternados. El.carbono 3' de un azcar se une al fosfato 5' del azcar adyacente, para formar un enlace fosfodister 3',5'. De este modo es posible formar un polmero con longitud indefinida, en el cual los nucletidos pueden enlazarse entre si en cualquier orden Una cadena polinucleotdica es direccional (tiene un sentido). No importa cuan larga sea la cadena, un extremo (el extremo 50 tiene un carbono 5', y el otro (el extremo 30 tiene un carbono 3' que no est unido a otro nucletido. EL DNA SE COMPONE DE DOS CADENAS DE POLINUCLETIDOS ENTRELAZADAS EN UNA DOBLE HLICE
Mediante estudios de difraccin de rayos X en
cristales de DNA purificado, realizados en.el laboratorio de M.H.F. Wilkins, Rosalind Franklin obtuvo importante informacin acerca de la estructura del DNA. Las imgenes demostraban de manera clara que el DNA tiene un tipo de estructura helicoidal y tres tipos principales de patrones regulares repetitivos en la molcula, con las dimensiones de 0.34,3-4 y 2.0 nm. Franklin y Wilkins haban deducido, segn estos patrones, que las bases nucleotdicas (que son molculas planas) se apilan como los peldaos de una escalera. Estos investigadores llegaron a un modelo que se apegaba a los datos existentes. Las cadenas nucleotdicas se ajustaban a las dimensiones de las caractersticas radiogrficas slo si cada molcula de DNA consista en dos cadenas polinucleotdicas dispuestas en una doble hlice. En su modelo, los esqueletos de azcar y fosfato de las dos cadenas constituan la parte externa de la hlice. Cada par de bases est a 0.34 nm exactos de los pares adyacentes arriba y abajo. Dado que estn presentes con exactitud 10 pares de bases en cada vuelta completa de la hlice, cada vuelta tiene 3-4 nm de altura. Para satisfacer los datos, las dos cadenas deben estar dispuestas en sentidos opuestos; de este modo, cada extremo de la doble hlice debe tener un fosfato 5' expuesto en una cadena y un grupo hidroxilo 3' en la otra. Como las dos cadenas corren en sentidos opuestos, se dice que son mutuamente antiparalelas. EN EL DNA DE DOBLE CADENA SE FORMAN PUENTES DE HIDRGENO ENTRE LA ADENINA Y LA TIMINA, Y ENTRE LA GUANINA Y LA CITOSINA
Hacia 1950, Erwin Chargaff y colegas, en la
Columbia University, haban determinado la composicin de bases del DNA de varios organismos y tejidos. Dijo Chargaff, "las proporciones de purinas y pirimidinas, y tambin las de adenina y timina y de guanina y citosina, no eran muy distintas de 1". En otras palabras, en las molculas de DNA, A = T y G = C. Los estudios de difraccin de rayos X indicaron que la doble hlice tiene anchura precisa y constante, como se demuestra por las reflexiones de 2.0 nm. Las pirimidinas, citosina y timina, slo contienen un anillo de tomos y son menores que las purinas, guanina y adenina, que contienen dos anillos. Si cada peldao de la escalera contuviera una purina y una pirimidina, la anchura de la hlice tendra en ese punto exactamente 2.0 nm; la combinacin de dos purinas (cada una de las cuales mide 1.2 nm de ancho) dara una medida mayor, y la combinacin de dos pirimidinas, una menor. Pueden formarse dos enlaces de hidrgeno entre adenina y timina, y tres entre guanina y citosina. Este concepto de pareamiento de bases especficas explica con claridad las reglas de Chargaff. La cantidad de citosina debe ser igual a la cantidad de guanina, porque cada citosina de una cadena debe parearse con una guanina de la otra cadena. De manera similar, cada adenina en la primera cadena debe corresponder a una timina en la segunda cadena. Por lo tanto, las secuencias de bases en las dos cadenas son complementarias, pero no idnticas entre s: en otras palabras, la secuencia de nucletidos en una cadena determina la secuencia complementaria de nucletidos en la otra. LA DUPLICACION DEL DNA ES SEMICONSERVATIVA
El DNA puede contener informacin codificada
en su secuencia de bases. El modelo tambin sugiere una forma en que esa informacin puede ser copiada de manera precisa, proceso conocido como duplicacin (o replicacin) del DNA. El modelo sugera que, como los nucletidos se parean entre s de manera complementaria, cada cadena de la molcula de DNA podra servir como plantilla o patrn para la sntesis de la cadena opuesta. Cada semihlice podra entonces parearse con nucletidos complementarios para restituir al compaero faltante. El resultado seran dos dobles hlices de DNA, cada una idntica a la original y consistente en una cadena original de la molcula progenitora y una cadena complementaria recin sintetizada. Este tipo de copiado de informacin se conoce como mecanismo de duplicacin semiconservativa. LA DUPLICACIN DEL DNA ES COMPLEJA Y POSEE DIVERSAS CARACTERSTICAS QUE LE SON PROPIAS
El proceso requiere una "mquina de
duplicacin" compleja contiene una gran cantidad de protenas y enzimas. Muchas de las caractersticas esenciales de la duplicacin del DNA son universales, si bien existen algunas diferencias entre procariotes y eucariotes, debido a que su DNA se organiza de manera diferente. LAS CADENAS DE DNA DEBEN DESENROLLARSE DURANTE LA DUPLICACIN
El desembrollamiento es efectuado por
enzimas helicasas de DNA, las cuales recorren la hlice, desenrollando las cadenas a medida que avanzan. Una vez que las cadenas estn separadas, protenas desestabilizadoras de la hlice se unen por separado a cada cadena, impidiendo que vuelva a formarse la doble hlice mientras se copian las cadenas. Enzimas especiales llamadas topoisomerasas producen roturas en la molcula de DNA y despus vuelven a unir cada cadena, liberando la tensin e impidiendo de manera eficaz la formacin de nudos durante la duplicacin. LA SNTESIS DE DNA SIEMPRE PROCEDE EN EL SENTIDO 5 - 3'
Las enzimas que catalizan la unin de las
subunidades nucleotdicas se denominan polimerasas de DNA. Pueden agregar nucletidos slo en el extremo 3' de una cadena polinucleotdica en crecimiento, y esta cadena debe estar pareada a la cadena que se est copiando Como la nueva cadena polinucleotdica se alarga con la unin del grupo fosfato 5' de la nueva subunidad nucleotdica al grupo hidroxilo 3' del azucaren el extremo de la cadena preexistente, la nueva cadena PARA LA SNTESIS DEL DNA SE REQUIERE UN RNA CEBADOR
Las polimerasas de DNA es que slo pueden
agregar nucletidos al extremo 3' de una cadena polinucleotdicajw existente. Entonces, cmo puede iniciarse la sntesis de DNA una vez que se han separado las dos cadenas? La respuesta es que primero se sintetiza un pequeo fragmento (por lo comn de unos cinco nucletidos) de un RNA cebador o iniciador (RNAprimer) en el punto de inicio de a duplicacin. El RNA o cido ribonucleico, es un polmero de cido nucleico consistente en subunidades nucleotdicas que se asocian por pareamiento de bases complementarias con la plantilla de DNA de cadena sencilla (monocatenario). El RNA cebador es sintetizado por un complejo protenico al que se denomina ribosoma, que incluye una enzima capaz de comenzar una nueva cadena de RNA opuesta a la cadena de DNA Luego de que se han agregado unos pocos nucletidos, la polimerasa de DNA desplaza el primosoma y puede entonces agregar subunidades al extremo 3' del corto RNA cebador Este es degradado despus por enzimas especficas, y el espacio es ocupado por cido desoxirribonucleico (DNA). LA DUPLICACIN DEL DNA ES DISCONTINUA EN UNA CADENA Y CONTINUA EN LA OTRA
La duplicacin del DNA comienza en sitios
especficos de la molcula de DNA, denominados orgenes de duplicacin, y ambas cadenas se duplican al mismo tiempo en una estructura en forma de Y que se conoce como horquilla de duplicacin (o punto de crecimiento). La posicin de la horquilla de duplicacin est en constante desplazamiento a medida que el proceso avanza a cargo de dos molculas de polimerasa de DNA idnticas. Una agrega nucletidos al extremo 3' de una de las nuevas cadenas, que siempre crece hacia la horquilla de duplicacin. Dado que esta cadena puede formarse de manera continua y uniforme, se le llama cadena directora (tambin conocida como lder o continua). Una segunda molcula de polimerasa de DNA idntica a la anterior agrega nucletidos al extremo 3' de la otra cadena nueva, llamada cadena seguidora (tambin conocida como rezagada o discontinua), que siempre crece en sentido opuesto a la horquilla de duplicacin. Por ello, esta cadena se sintetiza en fragmentos cortos, porque la enzima polimerasa de DNA necesitara desplazarse muy lejos de la horquilla para agregar segmentos de manera continua al extremo 3' de la cadena. Estos segmentos de 100 a 1 000 nucletidos se denominan fragmentos de Okazaki en honor de su descubridor, Rei jii Okazaki. Cada fragmento de Okazaki es iniciado por un RNA cebador distinto y crece hacia el extremo 5' del fragmento previamente sintetizado por la polimerasa de DNA. Cuando se alcanza el RNA cebador de! fragmento previamente sintetizado, dicho RNA se degrada, y el espacio resultante es llenado con DNA. Los fragmentos son unidos luego por ligasa de DNA, una enzima que une el extremo 3' de un fragmento de DNA al extremo 5' de otro. LA MAYOR PARTE DE LA SNTESIS DE DNA ES BIDIRECCIONAL
Cuando el DNA de doble cadena se separa, se
generan dos horquillas de duplicacin, de manera que la molcula se duplica en ambos sentidos a partir del origen de duplicacin. Un cromosoma eucaritico est constituido por una molcula lineal extremadamente larga, de manera que el proceso es acelerado por la existencia de mltiples orgenes de duplicacin. La sntesis contina en cada horquilla de duplicacin hasta encontrarse con otra que avanza en sentido opuesto, lo que da por resultado la formacin de un cromosoma que contiene dos dobles hlices de DNA. Cada doble hlice corresponde a una cromtide. Los extremos de los cromosomas eucariticos, llamados telmeros, plantean problemas especiales en la duplicacin. EL DNA DE LOS CROMOSOMAS SE EMPACA DE MANERA MUY ORGANIZADA
Las clulas eucariticas y procariticas difieren
de manera notable en su contenido de DNA as como en la organizacin de las molculas de ste. Una clula eucaritica tpica contiene mucho ms DNA que una bacteria, y se organiza en el ncleo en mltiples cromosomas, cuyo tamao y nmero varan sobremanera entre las diferentes especies. En los eucariotes. el DNA, con carga negativa, se asocia a protenas bsicas con carga positiva llamadas histonas, para fomiar nucleosomas. La unidad fundamental de estos complejos consiste en una estructura de DNA con forma de cuenta y con 146 pares de bases arrollada alrededor de un centro en forma de disco constituido por ocho molculas de histona (dos de cada uno de cuatro tipos distintos). Si bien en un inicio el nucleosoma se defini como una cuenta ms un segmento de DNA que la une a una cuenta adyacente, en la actualidad ese trmino se refiere slo a la cuenta misma (esto es, las ocho histonas y el DNA arrollado a su alrededor). Los nucleosomas son parte de la cromatina, el complejo de cidos nucleicos y protena que constituye los cromosomas. Por ejemplo, un quinto tipo de histona, conocido como histona Hl, se asocia al DNA de enlace y se encarga de empacar nucleosomas adyacentes (cada uno de 11 nm de dimetro) entre s para formar una cadena de 30 nm de dimetro. Estas cadenas se organizan en grandes lazadas, mantenidas juntas por una serie de protenas de andamiaje distintas de las histonas. Las lazadas interactan entonces de maneras complejas para formar la cromatina que se observa en un cromosoma condensado durante la metafase. Los nucleosomas funcionan como diminutos carretes, con lo cual evitan que las cadenas de DNA se enmaraen. Sin embargo, sus funciones son ms que estructurales, ya que su configuracin tambin afecta la actividad del DNA con que estn asociadas. ACIDO RIBONUCLEICO Y SNTESIS DE PROTENAS: EXPRESIN DE LA INFORMACIN GENTICA
La clula duplica la secuencia de bases de su DNA de modo
que esa secuencia se transmita de manera precisa a los descendientes. La expresin gnica es una serie compleja de sucesos por los cuales la informacin contenida en la secuencia de bases del DNA se descodifica y utiliza para especificar la constitucin de las protenas de la clula. Las protenas producidas influyen entonces en el fenotipo de alguna manera; estos efectos van desde rasgos fsicos visibles hasta cambios sutiles slo observables al nivel bioqumico. La TEM ilustra la transcripcin, el primer paso importante de la expresin gnica. En ella se sintetizan molculas de RNA complementarias a la plantilla de DNA. Un segundo paso primordial de la expresin gnica es la traduccin, o sntesis de protenas. EL DNA SE TRANSCRIBE PARA FORMAR RNA, QUE LUEGO SE TRADUCE PARA FORMAR PROTEINAS
La secuencia de bases del DNA determina la
secuencia de aminocidos en las protenas, la informacin contenida en l no se utiliza de manera directa. Ms bien, un cido nucleico relacionado, el cido ribonucleico o RNA, acta como intermediario entre cido desoxirribonucleico y las protenas. Al igual que el DNA, el RNA es un polmero de nucletidos, pero existen algunas diferencias importantes entre ellos. El RNA suele ser monocatenario (de una sola cadena), si bien determinadas regiones internas de algunos tipos de RNA tienen secuencias complementarias que les permiten plegarse y parearse para formar cortos segmentos bicatenarios (de doble cadena). En el RNA el azcar es ribosa. similar a la desoxirribosa del DNA, pero con un grupo hidroxilo extra. La base uracilo sustituye a la timina; como sta, es una pirimidina y puede formar dos enlaces de hidrgeno con la adenina. De este modo, uracilo y adenina son un par complementario. Cuando un gen codificador de protena se expresa, se hace una copia en RNA de la informacin contenida en el DNA. Este proceso es parecido a la duplicacin del cido desoxirribonucleico en que la secuencia de bases en la cadena de RNA es determinada por pareamiento de bases complementarias con una de las cadenas de DNA. Como la sntesis de RNA implica que la informacin contenida en un tipo de cido nucleico (DNA) se copie en otro tipo de cido nucleico (RNA), el proceso se denomina transcripcin. El RNA que porta la informacin especfica para elaborar una protena se denomina RNA mensajero, o mRNA. En la segunda fase de la expresin gnica, la informacin transcrita en el mRNA se utiliza para especificar la secuencia de aminocidos de una protena. Este proceso se denomina traduccin, porque consiste en convertir el "lenguaje de cidos nucleicos" de la molcula de mRNA en el "lenguaje de aminocidos" de la protena. La informacin codificadora de protena en el mRNA est contenida en su secuencia de bases. Una secuencia de tres bases consecutivas, llamada codn, especifica un aminoacido. Para la traduccin se requiere maquinaria celular que pueda reconocer y descodificar los codones del mRNA. Los RNA de transferencia (tRNA) son partes fundamentales de esa maquinaria descodificadora porque actan como "adaptadores" que establecen una conexin entre aminocidos y cidos nucleicos. Esto es posible porque cada tRNA es capaz de: 1. Enlazarse con un aminocido especfico y 2. Reconocer el codn de mRNA apropiado para ese aminocido especfico. Un tRNA determinado reconoce un codn especfico porque tiene una secuencia de tres bases, llamada anticodn, la cual se asocia con el codn del mRNA por pareamiento de bases complementarias. En nuestro ejemplo, el anticodn exacto que es complementario al codn para la treonina es 3'-UGC -5. Para la traduccin tambin se requiere que: 1. Los anticodones de tRNA se enlacen al mRNA 2. Los aminocidos llevados por los tRNA se unan en el orden especificado por el mRNA. Esto lo realizan los ribosomas, complejos organelos formados por dos unidades distintas, cada una con varias protenas y RNA ribosmico (rRNA). Los ribosomas se unen a un extremo del mRNA y lo recorren, lo cual permite que los tRNA se fijen en secuencia al mRNA. De este modo los aminocidos se colocan de manera adecuada para unirse mediante enlaces peptdicos en la secuencia correcta para formar un polipptido Los cientficos observaron que las bases del DNA podan servir como un "alfabeto" de cuatro letras, y plantearon la hiptesis de que combinaciones de tres de estas cuatro letras (4 3) permitan formar un total de 64 "palabras", ms que suficientes para especificar todos los aminocidos naturales. Hacia 1967 concluy el "desciframiento" del cdigo gentico, con lo cual se verific la existencia del cdigo de tripletes de bases comn a todos los organismos. LA TRANSCRIPCION ES LA SINTESIS DE RNA A PARTIR DE UNA PLANTILLA DE DNA
A partir del DNA se transcriben tres tipos
principales de RNA: RNA nbosmico (rRNA), RNA de transferencia (tRNA) y RNA mensajero (mRNA). La mayor parte del RNA es sintetizado por polimerasas de RNA dependientes de DNA, enzimas presentes en todas las clulas. Estas enzimas requieren DNA como plantilla o patrn y guardan muchas semejanzas con las polimerasas de DNA. Como stas, sintetizan cidos nucleicos en el sentido de 5' a 3 Utilizan trifosfatos de nuclesido (nucletidos con tres grupos fosfato) como sustratos, de los que extraen dos fosfatos cuando las subunidades se enlazan de manera covalente con el extremo 3' del RNA. Como la duplicacin del DNA y la hidrlisis del ATP, estas reacciones son fuertemente exergnicas. Del mismo modo en que las dos cadenas pareadas de DNA son antiparalelas, la cadena transcrita del DNA y la cadena de RNA complementaria tambin son antiparalelas entre s. EL RNA MENSAJERO CONTIENE SECUENCIAS DE BASES QUE CODIFICAN PROTENAS
Una polimerasa de RNA comienza la
transcripcin una vez que se ha unido a una secuencia de DNA denominada promotor, el cual no se transcribe. La de RNA no requiere un cebador. El primer nucletido en el extremo 5' de una nueva cadena de mRNA retiene su grupo trifosfato, pero a medida que cada nucletido adicional se incorpora en el extremo 3' de la molcula en formacin, van eliminndose dos de sus fosfatos a la vez, en una reaccin exergnica que deja el fosfato restante disponible para formar parte del esqueleto de fosfato de azcar (como en el DNA). El ltimo nucletido en incorporarse tiene un grupo hidroxilo 3' expuesto. La terminacin de la transcripcin, igual que su inicio, es controlada por un conjunto de secuencias de bases especficas. Estas secuencias al final del gen actan como las seales de "alto" para la polimerasa de RNA. Por convencin, se dice que una secuencia de bases en un gen o en la secuencia de mRNA transcrita desde ste es ascendente o descendente respecto de determinado punto de referencia. Ascendente (corriente arriba o simplemente arriba) significa hacia el extremo 5' de la secuencia de mRNA o el extremo 3' de la cadena transcrita de DNA. Descendente (corriente abajo o simplemente abajo) quiere decir hacia el extremo 3' del RNA o el extremo 5' de la cadena transcrita de cido desoxirribonucleico. EL RNA MENSAJERO CONTIENE SECUENCIAS DE BASES ADICIONALES QUE NO CODIFICAN DIRECTAMENTE PROTENA
El RNA bacteriano completo contiene ms
que la secuencia de nucletidos que codifican una protena. La polimerasa de RNA inicia la transcripcin de un gen muy por arriba (en sentido ascendente) de las secuencias codifiicadoras de protena. Como resultado, el mRNA tiene una secuencia directora no codificadora en su extremo 5'. Esta secuencia contiene seales de reconocimiento para la unin de ribosomas, lo cual perrmite a stos colocarse de manera correcta para traducir el mensaje. La secuencia directora es seguida por la secuencia codificadora, que ya contiene los mensajes para la codificacin de las protenas. En las clulas bacterianas, una o mas protenas pueden ser codificadas por una sola molcula de mRNA . Al final de cada secuencia codificadora se encuentra un codn de terminacin (o codn de alto). Estos codones (UAA, UGA y UAG) no codifican aminocidos, sino que especifican el final de la protena. Despus de stas van las secuencias seguidoras no codificadoras en el extremo 3', cuya longitud es variable. EL MENSAJE DEL ACIDO NUCLEICO SE DESCODIFICA DURANTE LA TRADUCCION
La traduccin, o sntesis de protenas,
agrega otro nivel de complejidad al proceso de transferencia de informacin porque implica la conversin del cdigo de cuatro bases del acido nucleico en el alfabeto de 20 aminocidos de las protenas. Para la traduccin se requiere el funcionamiento coordinado de ms de 100 tipos de macromolculas, incluidos los componentes protenico y de RNA de los ribosomas, el mRNA, y aminocidos unidos a tRNA. UN AMINOCIDO DEBE UNIRSE A RNA DE RANSFERENCIA ANTES DE QUEDAR INCORPORADO EN UN POLIPEPTIDO
Los aminocidos se unen por medio de enlaces
peptdicos para formar protenas . Esta unin implica el enlace de los grupos amino y carboxilo de aminocidos adyacentes Francis Crick propuso que se requera una molcula que actuara como "adaptador" en la sntesis de protenas y constituyera el enlace entre mRNA y protenas. Los adaptadores de Crick resultaron ser molculas de RNA de transferencia (tRNA). El DNA contiene genes especiales para tRNA, los cuales son transcritos para formar los tRNA. Los aminocidos se unen de manera covalente a sus respectivas molculas de tRNA por medio de enzimas especficas denominadas sintetasas de aminoacil-tRNA, que utilizan ATP como fuente de energa. Los complejos resultantes, llamados aminoacil- tRNA, son capaces de unirse a la secuencia codificadora del mRNA a fin de alinear los aminocidos en el orden correcto para formar la cadena polipeptdica LAS MOLCULAS DEL RNA DE TRANSFERENCIA POSEEN REGIONES ESPECIALIZADAS CON FUNCIONES ESPECFICAS
Una molcula de tRNA debe poseer varias
propiedades: 1. Debe ser reconocida por una sintetasa de aminoacil-tRNA especfica que una el aminocido correcto. 2. Debe tener una regin que acte como sitio de fijacin para el aminocido. 3. Debe ser reconocida por los ribosomas. 4. Debe tener un anticodn, o sea una secuencia de enlace complementaria especfica para el codn de mRNA correcto Los tRNA son cadenas polinucleotdicas de unos 70 nucletidos de largo, cada una con varias secuencias de bases nicas as como algunas otras secuencias que son comunes para todos los tRNA. El pareamiento de bases complementarias dentro de cada molcula de tRNA hace que sta se doble y se pliegue para formar dos o tres asas de nucletidos no pareados, una de las cuales contiene el triplete anticodn. El sitio de fijacin del aminocido se encuentra en el extremo 3' de la molcula. El grupo carboxilo del aminocido se une al grupo hidroxilo 3' expuesto del nucletido terminal, lo que deja al grupo amino libre para participar en la formacin del enlace peptdico. El patrn de plegamiento da por resultado una distancia constante entre el anticodn y el aminocido en todos los tRNA que se han examinado a la fecha, lo cual permite una colocacin precisa de los aminocidos durante la traduccin. EN LOS RIBOSOMAS SE RENEN TODOS LOS COMPONENTES DE LA MAQUINARIA DE TRADUCCIN
Los ribosomas procaritico y eucaritico no son
idnticos, ambos estn compuestos de dos subunidades constituidas por protena y RNA ribosmico, que se transcribe a partir de DNA y no transfiere informacin especfica, sino que su funcin es estructural y cataltica. La subunidad grande contiene una depresin en una superficie en la cual se ajusta la subunidad pequea. El mRNA se inserta en un surco formado entre las superficies de contacto de las dos subunidades. Dentro de cada ribosoma hay dos depresiones, los sitios de unin A y P para las molculas de tRNA. El tRNA que retiene la cadena polipeptdica ocupa el sitio P. El sitio A se llama as porque en l se une el aminoacil-tRNA que entrega el siguiente aminocido en la secuencia. Despus de la formacin del enlace peptdico entre el aminocido en el sitio A y el extremo de la cadena polipeptdica en formacin, el tRNA (ahora con toda esa cadena unida) se desplaza al sitio P del ribosoma y deja el sitio A disponible para la siguiente molcula de aminoacil-RNA de transferencia Una de las funciones del ribosoma es sostener en la orientacin correcta la plantilla de mRNA, el aminoacil-tRNA y la cadena peptdica en crecimiento, de modo que pueda leerse el cdigo gentico y formarse el enlace peptdico. LA TRADUCCIN INCLUYE INICIACIN, ALARGAMIENTO Y TERMINACIN
El proceso de sntesis de protenas suele dividirse
en tres fases distintas: iniciacin (o inicio), ciclos repetitivos de alargamiento, y terminacin: 1. INICIACIN .- Consiste en varios pasos y requiere varias protenas, llamadas factores de iniciacin. Esta fase comienza con la carga de un tRNA de iniciacin especial en la subunidad ribosmica pequea. En todos los organismos, el codn para la iniciacin de la sntesis de protenas es AUG, el cual codifica el aminocido metionina . Una vez que el tRNA iniciador se ha cargado en la subunidad pequea, el complejo de iniciacin se une a las secuencias de reco- nocimiento de ribosomas especiales cerca del extremo 5' del mRNA, que se encuentran en sentido ascendente respecto de las secuencias codificadoras. El enlace da por resultado el alineamiento del anticodn del tRNA iniciador con el codn de iniciacin AUG del mRNA. La subunidad ribosmica grande se une entonces al complejo y forma el ribosoma terminado. 2. ALARGAMIENTO.-La adicin de otros aminocidos al polipptido en formacin se denomina alargamiento o elongacin. El tRNA iniciador se une al sitio P del ribosoma y deja libre el sitio A; ste puede ser ocupado entonces por el aminoacil- tRNA especificado por el siguiente codn. El aminoacil-tRNA apropiado se une al sitio A por pareamiento de bases especficas de su anticodn con las del codn de mRNA com- plementario. Este paso de enlace requiere energa, que en este caso proviene del trifosfato de guanosina (GTP), una molcula de transferencia de energa similar al ATP. El grupo amino del aminocido en el sitio A se alinea ahora con el grupo carboxilo del aminocido precedente en el sitio P. Entonces ocurre la formacin de un enlace peptdico entre el grupo amino del nuevo aminocido y el grupo carboxilo del previo. En el proceso, el aminocido unido al sitio P es liberado de su tRNA y se une al aminoacil-tRNA en el sitio A. Esta reaccin es espontnea (esto es, no requiere energa adicional) porque se transfiri energa de ATP durante la formacin del aminoacil-tRNA. Sin embargo, s requiere una enzima (peptidiltransferasa). Vale la pena mencionar que existen indicios de que esta enzima no es una protena, sino un rRNA que forma parte de la subunidad ribosmica grande. Tal RNA catalizador recibe el nombre de ribozima. La sntesis de protenas siempre procede del extremo amino terminal al extremo carboxilo terminal de una cadena peptdica en formacin. Una vez que se ha formado el enlace peptdico, la molcula de tRNA se desprende del sitio P. La cadena peptdica en formacin, que ahora est unida al tRNA en el sitio A, se transpone entonces al sitio P y deja el sitio A abierto para el siguiente aminoacil-tRNA. Este proceso de transposicin requiere energa, que una vez ms es proporcionada por GTP. La formacin de cada enlace peptdico slo requiere alrededor de 1/20 de segundo, de manera que mediante repeticin del ciclo de alargamiento una protena con tamao promedio de unos 360 aminocidos se completa en unos 18 segundos. 3. TERMINACION.- La sntesis de la cadena polipeptdica es terminada por "factores de liberacin" que reconocen el codn de terminacin o de alto en el extremo de la secuencia codificadora. El reconocimiento de un codn de terminacin por los factores de liberacin hace que el ribosoma se disocie en sus dos subunidades, que pueden utilizarse entonces para formar un nuevo complejo de iniciacin con otra molcula de RNA mensajero. LA TRANSCRIPCION Y LA TRADUCCION SON MAS COMPLEJAS EN EUCARIOTES QUE EN PROCARIOTES
Aunque los mecanismos bsicos de
transcripcin y traduccin son muy similares en todos los organismos, existen algunas diferencias significativas entre eucariotes y procariotes, sobre todo en lo que se refiere a las caractersticas de sus mRNA. Las molculas de mRNA eucaritico experimentan modificacin y procesamiento postranscripcionales Los cromosomas eucariticos se confinan al ncleo de la clula, y la sntesis protenica tiene lugar en el citoplasma. El mRNA debe ser transportado a travs de la envoltura nuclear hacia el citoplasma antes de que pueda ser traducido. Adems, el transcrito original debe ser modificado de varias maneras (mientras an se encuentra en el ncleo) antes de ser competente para el transporte y la traduccin. La modificacin del mensaje eucaritico comienza cuando el transcrito de RNA en crecimiento mide unos 20 a 30 nucletidos de largo. En ese punto algunas enzimas forman un casquete o cubierta (cap) en el extremo 5' de la cadena de mRNA en crecimiento. Tal casquete o cubierta consiste en un nucletido poco comn, 7- metilguanilato, que es un monofosfato de guanosina con un grupo metilo en uno de los nitrgenos de la base. Los ribosomas eucariticos no pueden unirse a un mensaje sin cubierta. Los mRNA eucariticos sean mucho ms estables que los mRNA procariticos. La vida media promedio de una molcula de mRNA de una clula de mamfero es de unas 10 h (contra 2 min de una clula bacteriana). Una segunda modificacin del mRNA eucaritico ocurre en el extremo 3' de la molcula. Cerca del extremo 3' del mensaje terminado suele haber una secuencia de bases que sirve como seal para la adicin de una "cola" con muchas adeninas, conocida como cola poliadenilada o cola poli-A. Alrededor de 1 min despus de que se ha completado el transcrito, algunas enzimas del ncleo reconocen esta seal de poliadenilacin y cortan la molcula de mRNA en ese sitio. No es clara la funcin de la poliadenilacin, si bien existen indicios de que ayuda a exportar el mRNA desde el ncleo y quiz tambin estabilice algunos mRNA contra la degradacin en el citoplasma. SE TRANSCRIBEN TANTO SECUENCIAS DE NUCLETIDOS NO CODIFICADORAS COMO CODIFICADORAS A PARTIR DE LOS GENES EUCARITICOS
Los genes eucariticos tienen secuencias
codificadoras interrumpidas; esto es, dentro de las secuencias codificadoras de protena del gen hay largas secuencias de bases que no codifican aminocidos en el producto protenico final. Las regiones no codificadoras en el gen se denominan intrones (se cuencias intermedias), en oposicin a los exones (secuencias expresadas), que son partes de la secuencia codificadora de protena. Un gen eucaritico tpico suele tener mltiples exones e intrones, aunque el nmero es bastante variable EL CODIGO GENETICO SE LEE COMO UNA SUCESION DE CODONES
Experimentos permitieron determinar el cdigo de
los 64 posibles codones , que son en lo esencial universales para todos los seres vivos Los investigadores tambin pudieron demostrar de manera concluyente que el cdigo consiste en tripletes que no se superponen. Recurdese que el cdigo gentico que definimos y utilizamos es un cdigo de mRNA. Las secuencias de anticodonesdel tRNAas como la secuencia de DNA a partir de la cual se transcribe el mensaje son complementarias EL GEN SE DEFINE COMO UNIDAD FUNCIONAL
Es una secuencia de nucletidos que
contiene la informacin necesaria para producir un RNA o una protena especficos. Por tanto, un gen incluye secuencias reguladoras no codificadoras as como secuencias codificadoras. LAS MUTACIONES SON CAMBIOS DEL DNA
Son causadas por cambios en la secuencia
de nucletidos del DNA La tasa global de mutaciones observada es mucho menor que la frecuencia de daos al DNA, porque todos los organismos tienen sistemas especiales de enzimas que pueden reparar determinados tipos de alteraciones en el cido desoxirribonucleico. Las mutaciones suministran la diversidad de material gentico que permite estudiar la herencia y la naturaleza molecular de los genes, las mutaciones tambin causan la variacin necesaria para que ocurra la evolucin en una especie dada. Las mutaciones pueden modificar los genes de diversas maneras . El tipo ms sencillo de mutacin, llamado mutacin puntual o mutacin por sustitucin de bases, implica un cambio en un solo par de nucletidos. Las sustituciones de bases que dan por resultado la sustitucin de un aminocido por otro algunas veces se denominan mutaciones de sentido falso o de sentido incorrecto. Tales mutaciones pueden tener una amplia variedad de efectos. En las mutaciones por corrimiento del marco de lectura, en la molcula de DNA se insertan o eliminan uno o dos pares de nucletidos, con lo que se altera el marco de lectura Otros tipos de mutaciones pueden deberse a un cambio en la estructura cromosmica. Estos cambios suelen tener una amplia variedad de efectos, porque abarcan a numerosos genes. Un tipo de mutacin es causado por el "salto" de secuencias de DNA a mitad de un gen. Estas secuencias mviles de DNA. llamadas transposones, no slo trastornan el funcionamiento de algunos genes sino que en determinadas condiciones tambin activan genes previamente inactivos Algunas regiones del DNA, conocidas como puntos ca- lientes mutacionales, presentan mayor probabilidad que otras de experimentar mutacin. No todas las mutaciones son espontneas; muchos de los tipos de mutaciones antes descritos tambin pueden ser causados por agentes a los que se conoce como mutgenos. Entre stos se encuentran diversos tipos de radiaciones ionizantes, como rayos X, gamma, csmicos y ultravioleta. Algunos mutgenos qumicos reaccionan con bases especficas del DNA y las modifican, lo que causa errores en el pareamiento de bases complementarias cuando la molcula de DNA se duplica. Otros mutgenos se insertan en la molcula de DNA y modifican el marco de lectura normal durante la duplicacin. Hay una estrecha relacin entre mutaciones somticas y cncer. Muchos mutgenos son tambin carcingenos, agentes que producen cncer.