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cidos nucleicos
Estefany Proao
Ramiro Altamirano
cidos nucleicos son difciles
de separar de: Componentes
de membrana
Protena residual o aadido
Otras molculas solubles.
http://m.youtube.com/watch?v=oJsOC03th2A
Qu es?
Protocolo bsico consiste en el
tratamiento homogneo con
disolventes orgnicos.
Etapas bsicas:
Romper pared celular y
membrana plasmtica para
poder acceder al ncleo de la
clula.
Romper membrana nuclear para dejar libre el
ADN.
Proteger el ADN de enzimas que puedan
disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se
precipite en alcohol.
ADN en alcohol se desenrolla
y precipita en la interface
entre el alcohol y el agua.
Perdida significativa de
ADN.
Salting Out (Wizard)
Tcnica de tipo inorgnica
Utiliza reactivos bajos en toxicidad
Permite visualizar la malla del ADN
DESVENTAJA
Requiere mayor cantidad de muestra
Lisis
Extraccin
Precipitacin
Resuspensin
Video salting Out
http://m.youtube.com/watch?v=pxJMAGNWG
IY
Columnas Silice (Purelink DNA
invitrogen)
Lisis de partculas a elevadas temperaturas
Proteinasa K
ADN purificado para aplicaciones que
permiten la deteccin viral y genotipificacin
A partir de fluidos biolgicos frescos o
congelados libres de clulas (plasma, suero,
lquido cefalorraqudeo) y sobrenadantes de
cultivo celulares
Unin selectiva de cidos nucleicos virales a la
matriz de slice bajo altamente condiciones de
desnaturalizacin
Ventajas de columnas de silice