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Papillomaviridae
(Papiloma virus Polyomaviridae
18 gneros )
Papilomavirus
humanos
Alfa
papillomavirus
(15 especies)
Nu - Mu Gamma Beta
papilomavirus papilomavirus papillomavirus papillomavirus
ESTRUCTURA
Cpside icosadrica no lipdica de 72
capsmeros.
Genoma de ADN circular de doble hebra,
compuesto por 7200 8000 pb.
Se divide en 3 regiones:
Temprana: codifica protenas virales E1
E2 E4 E5 E6 y E7.
Tarda: codifica protenas de la cpside
L1 y L2.
De control: contiene ADN para la
replicacin y expresin del genoma viral.
TEMPRANA
E1: Modulacin de la replicacin del ADN
E2: Regula la expresin de E6 y E7 en la transcripcin viral.
E3: Desconocida
E4: Disrupcin de citoqueratina en clulas escamosas.
E5: Ligada a transformacin celular y receptores de factores de
crecimiento.
ALTO RIESGO
E6: Ligada a transformacin celular e interacciona con las
protenas p53
E7: Incremento de proliferacin celular Interacciona con las
protenas pRb
E1 reclutan protenas Hsp (formar helicasa),
SSB(destabilizadoras) y DNA polimerasas
(replicacin) para dar origen a la helicasa viral.
L1: Junto con la alfa-integrina ayuda a unir a la clula basal con el virus
L2:
Receptor: Integrina 6
Genes L1 y L2:
La descapsidacin son genes que se
tiene lugar en el expresan en las
endosoma. clulas basales y
parabasales del
epitelio.
Infeccin por VPH Replicacin genoma ncleo por Protena E1.
La presente investigacin tiene como objetivo principal, detectar las
regiones oncognicas E6 y E7 de Virus del Papiloma Humano mediante
PCR en pacientes Papanicolau negativo del Instituto de Enfermedades
Neoplsicas de la Libertad. As mismo, como objetivos secundarios,
determinar el grado de incidencia tipificando oncogenes de alto y bajo
riesgo, as como tambin, evaluar el tipo de infeccin que presenta
cada paciente a causa de la presencia simultnea de ciertos genotipos
de VPH.
MATERIALES Y METODOS
RESULTADOS
Figura 1. Deteccin de VPH mediante PCR con primers MY09-MY11, 1-20 :Muestras de estudio,
C-: Control negativo, C+ : Control positivo, M; Marcador de peso molecular (100pb), CP: Patrn de
corrido (150pb)
Figura 2. Deteccin de VPH mediante PCR con primers GP5
+ - GP6+.01-06:Muestras de estudio,
C-:Control negativo, C+ :Control positivo,
M: Marcador de peso molecular (100pb)
Figura 4. Deteccin de oncogenes E6 Y E7 de VPH 16
Figura 3 .Deteccin de oncogenes E6 Y E7 de VPH 16
(119pb) y VPH 18 (172pb) mediante PCR.04-15:
(119pb) mediante PCR.01-14: Muestras de estudio,
Muestras de estudio,16 y 18 :Genotipos de VPH,
C-:Control negativo, C + control positivo,
C-:Control negativo, C+:Control positivo, M: Marcador
M: Marcador de peso molecular (100pb)
de peso molecular (100pb )
Figura 5. Deteccin de oncogenes E6 y E7 de VPH 33(398 pb)
mediante PCR.01-12: Muestras de estudio, C-:Control
negativo, M: Marcador de peso molecular (100pb).
Figura 6. Deteccin de oncogenes E6 y E7 de VPH 52 Figura 7. Deteccin de oncogenes E6 y E7 de
(229 pb) mediante PCR . 04-12: Muestras de estudio, PVH 6/11(334pb) mediante PCR . 16-20:
C-:Control negativo, CP : Patrn de corrido (150pb), Muestras de estudio, M : Marcador de peso
M : Marcador de peso molecular (100pb) molecular (1 kb)
Oncogenes (E6 YE7) de genotipos 10 16
encontrados
CASOS
Infecciones simples Infecciones mltiples 11 16
1 16 13 16
2 16
14 16
3 16
15 16
4 16,33,52
16 - - - -
5 16
17 6/11
6 16,18
7 16,52 18 6/11
8 16 19 6/11
9 16,18 20 6/11
DISCUSION
Se ha estudiado que en el 99% de casos tratados de Cncer Cervicouterino
est implicado algn genotipo de VPH por lo que se considera un factor
necesario para el desarrollo del cncer invasivo. A este grupo se le denomina
VPH de alto riesgo y entre estos tenemos los tipos: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45,
52, 56, 58, etc. As mismo, se estima que en mas del 75% de casos estn
asociados frecuentemente a los genotipos 16, 18, 31, 33 y 52; y en menor
grado los VPH de bajo riesgo 6 y 11, ms frecuentes en causar verrugas
genitales o cambios leves en el cuello uterino.
La deteccin mediante PCR de VPH presenta una sensibilidad aproximada del
90%, con un intervalo ms compacto (84.9 100%) y no vara con la edad;
mientras que en los anlisis citolgicos la especificidad se incrementa con la
edad y resulta ms baja.
El perfil electrofortico se visualiz en gel de poliacrilmida al 4%
y la tincin con nitrato de plata permiti, la identificacin
especifica de los oncogenes E6 y E7 de tipos de VPHs presentes
en una muestra mediante la simple determinacin de la longitud
del amplicon.