Pruebas Cruzadas Proceso

Crtico en Banco de Sangre

TLC Pedro Jurez Nez | Centro Estatal de Medicina Transfusional Guanajuato
 Otra vez la misma

Pa variar un poco tquenme la misma

Esa que me llega hasta el ..
Nada me han enseado los aos,
Siempre caigo en los mismos errores
Otra vez a brindar con extraos
Y a llorar por los mismos errores.
 3.1.83 Proceso crtico: actividad o conjunto de actividades
cuya metodologa de ejecucin pueda afectar
significativamente la seguridad de los donantes, los
receptores, los productos sanguneos o los servicios
prestados, que pueda influir en la calidad del producto final y
en los servicios prestados.
 Hemoclasificacin de
9.5.1.3 Las pruebas los sistemas AB0 y Rh
que se emplean para (antgeno D);
demostrar
compatibilidad
sangunea incluyen: Investigacin de anticuerpos
irregulares de importancia
clnica
3.1.120 Prueba de
compatibilidad: estudio
practicado in vitro empleando
R.A.I.
muestras de sangre del donante
y del receptor, para comprobar
la existencia de afinidad
inmunolgica recproca entre las
clulas del uno y el suero del
Pruebas cruzadas.
otro, para efectos
transfusionales.
 Metodologas aprobadas
NORMA Oficial Mexicana NOM-253-SSA1-2012NOM

9.5.1.4 Las pruebas a que hace

referencia el apartado anterior se
podrn realizar en tubo, soporte
slido, gel o esferas de vidrio.
Tubo:
se deber incluir
cuando menos una
prueba de
aglutinacin en
medio salino, una
prueba de
antiglobulina humana
(prueba de Coombs)
y consumo de
Coombs.
 M A T E R I A L (PRUEBA MAYOR) (PRUEBA MENOR) (AUTOCONTROL)
FA S E B I O L G I C O
D R AT

SUERO DEL RECEPTOR

SS SS
S A L I N A
SUSPENSIN DE G.R. DEL
RECEPTOR S S
R P I D A
SUERO DEL DONADOR
SS
SUSPENSIN DE G.R. DEL
DONADOR S
CENTRIFUGAR A VELOCIDAD Y TIEMPO OPTIMO - LEER ANOTAR

POTENCIADOR
Gamma LO-ION
SS SS SS
CENTRIFUGAR A VELOCIDAD Y TIEMPO OPTIMO - LEER ANOTAR

INCUBAR A MNIMO 30 MINUTOS

CENTRIFUGAR A VELOCIDAD Y TIEMPO OPTIMO - LEER ANOTAR
LAVADO
LAVAR 4VECES CON SOLUCION SALINA FISIOLOGICA

SS SS SS
ANTIGLOBULINA
HUMANA
COOMBS
CENTRIFUGAR A VELOCIDAD Y TIEMPO OPTIMO - LEER ANOTAR

SS SS SS
ERITROCITOS
SENSIBILIZADOS
(Clulas Control de
Coombs)
 Tubo:

VENTAJAS DESVENTAJAS

Se pueden elegir los aditivos para potenciar La aglutinacin es inestable

la reaccin:
Requiere fase de lavado
Albmina
Requiere lectura cuidadosa. MUY
LISS LISS/ALBUMINA (Gamma Lo-Ion)
SUBJETIVA
Enzimas (Bromelina)
Utiliza una cantidad importante de muestra
AGH (Coombs) (Glbulos rojos y suero).

Permite la manipulacin Mayor tiempo de proceso.

Es visible la hemlisis

Permite diferenciar incompatibilidad debida

a Anticuerpos Fros o Calientes
Soporte
slido, gel o
esferas de
vidrio:
las reacciones
debern incluir,
cuando la
prueba lo
requiera, un
medio
potenciador y la
prueba de
antiglobulina
humana.
 Soporte slido, gel o esferas de vidrio:

VENTAJAS DESVENTAJAS

Aumentan la sensibilizacin Costo elevado

Aumentan la productividad Aumenta n de falsos positivos .
Disminuyen el tiempo de incubacin. Pueden detectar anticuerpos que no
est claro si van a tener trascendencia
Elimina la fase de lavado. in Vivo.

La reaccin es semipermanente. NO permite diferenciar entre

anticuerpos fros y calientes.
Eliminan subjetividad en interpretacin de resultados.
Retrasa la transfusin en casos de
Requieren poco volumen de muestra.
urgencia
Trazabilidad

Permite automatizacin
Resumen de Metodologas

Guidelines for the Antibody Identification.- AABB.- 2009-2010 Scientific Seccin Coordinating Comittee
 Calidad

Costos Servicio
 NORMA Oficial Mexicana NOM-253-SSA1-2012

4.3 Para garantizar la seguridad y calidad de las unidades de sangre y

componentes sanguneos, as como, la de los servicios prestados, los bancos de
sangre y los servicios de transfusin, debern contar con un sistema de gestin de
la calidad, que estar especificado en un manual de calidad, el cual deber incluir
procedimientos normalizados de operacin, guas
e instructivos de fcil comprensin, aplicabilidad e implementacin.
 Prueba Cruzada = Coombs Indirecto

Suero/Plasma Fase de Fase de

Globulos rojos Aglutinacin
del Receptior Sensibilizacin. Coombs
del donador
Potenciador
Lavado
Fase preanaltica
 Fase Preanaltica

Identificacin del Solicitud de Transfusin Muestras Piloto

Receptor y Resumen Clnico (Receptor donador)
Corroboracin verbal 19.3.4.7 Solicitud de Identificacin
cuando esto sea Productos sanguneos. Calidad
posible. (NOM 253). Cantidad
Revisin del nombre NOM-004-SSA3-2012. Conservacion
anotado en la pulsera Del expediente clnico.
Transporte
de identificacin
A travs de los
registros del
expediente clnico.
Consentimiento
informado.
Fase Preanaltica
Solicitud de transfusin
 Fase Preanaltica
Solicitud de transfusin va telefnica
13.1.4 Se aceptarn peticiones por va telefnica o
por medios electrnicos mientras proporcionen la
informacin completa. Las solicitudes por va
telefnica debern ser avaladas con el envo
ulterior del formato de solicitud adecuadamente
llenado.

13.1.5 Tratndose de solicitudes telefnicas o por

medios electrnicos, el personal del banco de
sangre o del servicio de transfusin que las reciba
las solicitudes deber llevar un registro escrito que
incluya:

a) Fecha y hora de recepcin de la solicitud,

y

b) Nombre del mdico que indica la

transfusin y de la persona que realiza la llamada.

13.1.6 Para que el banco de sangre o el servicio

de transfusin suministre unidades o mezclas de
componentes sanguneos por una peticin urgente,
el mdico solicitante deber indicar que la
situacin es de suficiente apremio como para
transfundir sin las pruebas de compatibilidad
completas.
 Fase Preanaltica
Solicitud de transfusin
Diagnstico Problema serolgico
Anemia Hemoltica autoinmune Coombs directo positivo, autoanticuerpo(s)
Artritis reumatoide Coombs directo positivo
Spsis Poliaglutinacin (antgenos t y Tk)
Leucemia Antgenos A/B deprimidos
Infeccin bacteriana, Cncer de Coln, Antgeno B adquirido
Obstruccin intestinal
Hemoglobinuria de la marcha Hemlisis
Carcinoma, Linfomas, Timomas, Colagenosis Anticuerpos calientes
Linfomas, neumonas, sfilis, virosis, Enf. De Anticuerpos fros
Waldestron
Mononucleosis, cirrosis Anti i
HPF, sndromes virales en nios Anti-P (bifsico)
Mieloma mltiple Rouleaux
Inmunodeficiencias Agamaglobulinemia Ausencias de anticuerpos ABO
 Fase Preanaltica
Solicitud de transfusin
Antecedentes PROBLEMA SEROLGICO

Transfusin de GR, transplante de mdula sea Aglutinacin de campo mixto / Doble

poblacin
Transfusin previa pasada o reciente, transfusin de plasma con Aloanticuerpos irregulares
aloanticuerpos.
Transfusin previa de crioprecipitados, plaquetas, PFC no Anticuerpos ABO inesperados
isogrupo, ST 0.
Exanguineotransfusin, transfusin masiva, transplante de mdula Aparente cambio de grupo
sea.
Reaccin hemoltica, hemlisis no inmune. Hemlisis
Tratamiento con inmunoglobulinas IV Coombs directo positivo y/o anticuerpos
inesperados
Administracin de inmunoglobulinas Anti-Rh prenatal o postparto. Anticuerpos Anti-Rh

Pacientes politransfundidos, transfusin pasada o reciente de Anticuerpos Anti-HLA

granulocitos
Exanguineotransfusin, Recambio plasmtico / plasmafresis. Ausencia o disminucin de aglutininas ABO
 Fase Preanaltica
Muestra Piloto Receptor

Tubo Gel
9.2 Los laboratorios de los bancos de sangre y, en su caso, los servicios de
transfusin debern contar con procedimientos escritos para el manejo,
trasvasado y etiquetado de las muestras que permitan garantizar su correcta
trazabilidad.

El tubo deber ser identificado a pie de cama, en su caso utilizar etiqueta

impresa.
Compararse con la pulsera de identificacin y ficha de identificacin del
Identificacin
paciente.
Debidamente rotulado de manera legible e indeleble con los siguientes
datos:
Nombre Completo del paciente
Numero exclusivo de expediente o registro.
Fecha y hora de recoleccin de la muestra.
Iniciales de quien realiza la recoleccin.
 Fase Preanaltica
Muestra Piloto Receptor
Tubo
Muestra sin anticoagulante
Libre de hemlisis
Preferentemente obtenida por
puncin directa de la vena.
Obtener de forma asptica y
puncin limpia
Una vez obtenida la muestra
Calidad mezclar por inversin de 8
a 10 veces.
*Reposo mnimo
recomendado antes de
centrifugar 30.
*Centrifugacin 1000 a
1200Xg durante 10.
Separar el suero de los
eritrocitos tan pronto como sea
posible.
*Obtencin de muestras sanguneas de calidad analtica: mejora continua de la etapa preanaltica.- Luis Moran Villatoro.- AMBC.
Gel
Segn especificaciones del fabricante sin
anticoagulante o con EDTA.
Libre de hemlisis.
MISMAS RECOMENDACIONES DE
OBTENCIN.
*Centrifugar 2000 a 3000 xg 15
No requiere reposo.
PROCESO CEMT
1. Centrifugar LA SANGRE TOTAL durante
5a 2150 xg (3900 RPM r=12.7 cm.).
2. Observar el plasma y si se detecta
turbidez, separar plasma de glbulos
rojos y centrifugar el plasma 5 2150 Xg.
3. Decantar el plasma a otro tubo
debidamente rotulado.
Fase Preanaltica
Muestra Piloto Receptor
 Fase Preanaltica
Muestra Piloto

Muestra Basal, toma

directa filtrada
Muestra Basal
remitida
Paciente femenino, 34 aos, IRC, Politransfundido, G2P2,B Rh positivo, Rr, conocida por inmunizacin a Fya,
ahora presenta mezcla de Anti-Fya y Anti-E.
 Fase Preanaltica
Muestra Piloto Receptor

Tubo Gel
4 mL (1 tubo)
Cantidad 5 mL (1 tubo) 2 tubos con EDTA
1 tubo Sin anticoagulante
Preferentemente separados
Preferentemente separados glbulos rojos
Conservacin y glbulos rojos de suero y en
de plasma y en refrigeracin sin contacto
transporte refrigeracin sin contacto directo
directo con hielo o refrigerantes
con hielo o refrigerantes
Fase Analtica
 Reactivos Equipo Personal Variables Reaccin Ag- AC

Adecuado para el uso. 4.7 El personal que a) Temperatura

15.8.1 Cada lote nuevo
Mantenimiento acorde labora en los bancos ptima de
15.8.2 El proceso interno de
inspeccin a que se refiere el al uso. de sangre, servicios
apartado anterior, deber Calibracin con
reaccin para
de transfusin y cada anticuerpo
incluir cuando menos lo patrones trazables.
siguiente: puestos de
a) Comprobar que el sangrado, deber b) Ph
estado del embalaje sea 15.7 Control de equipos. observar lo c) Concentracin
adecuado; NOM 253 SSA2-2012.
b) Las condiciones de
dispuesto en los de antgeno y
conservacin al momento de Tabla 39: Requisitos documentos que anticuerpo
la recepcin; mnimos para el control integran el sistema
c) Verificar aspecto fsico; de otros equipos de gestin de la d) Potencial inico
d) Lmite de vigencia, y del medio
e) Concordancia de lo calidad.
descrito en el inserto y el 4.12.3 Personal e) Tiempo de
contenido del juego de incubacin
reactivos. suficiente, calificado
15.8.3 Tabla 40 de NOM 253 y formado para el
desempeo de sus
actividades.
Velocidad de rotacin 3350 rpm 3900 rpm

Mxima FCR 1200 xg 2200 xg

Aceleracin 8 desde 3350 rpm
Desaceleracin
Tiempo Seleccin manual en modo 999 Rango 0 to 30 minutos
segundos. Increments: 0 a 1 minuto 5
1 a 5 minutos 15
5 a 30 minutos - 1.
Temperatura Optima de reaccin de los anticuerpos

C ABO MN P Lewis I H Rh Kell Kidd Duffy Otros

IgG
40
37 Bifsicos, PROTEINAS, ALOANTICUERPOS
34 pueden ser
31 inmunes
28
25
CARBOHIDRATOS,

AUTOANTICUERPOS
22 IRREGULAR
19
16
NATURAL
13
11
9
6
3
0
 Ph

Ph ptimo para
la fase de
sensibilizacin 6.5 7.0

Un marcado descenso
en el ph, incrementa la
disociacin de los
complejos antgeno
anticuerpo.

SSF Ph: 5 y 6
Concentracin de antgeno y anticuerpo / tiempo
de reaccin

Instrucciones del inserto del fabricante

Potencial inico del medio
Lavado
Fase postanaltica
 Pruebas cruzadas

Prueba Mayor Autocontrol

Compatible: Negativo:

No se detectaron No se detectan
autoanticuerpos
Anticuerpos del paciente contra
los antgenos del donador.
Incompatible !!!!!
 Prueba Cruzada Positiva Incompatible

Anticuerpos del Anticuerpos contra el

Acs. adquiridos
Receptor Producto
Plasma transfundido
Aloanticuerpo(s) Glbulos Rojos previamente ,
plaquetas,
Autoanticuerpo(s) almacenados Crioprecipitados
Globulina inmune Rh
Alo y Reactivos (aditivos) Inmunoglobulina
intravenosa
Autoanticuerpos Diluyentes de Globulina
antilinfocitica
(Antitimoctica)
Rouleux glbulos rojos
Autocontrol Positivo

Autoanticuerpo(s)

Auto y Aloanticuerpos

Aloanticuerpos contra glbulos rojos recin

transfundidos.

Anticuerpos relacionados a Drogas

Inmunoglobulinas elevadas en el suero.

Anticuerpos adquiridos pasivamente.

 Fase

Aglutinantes Sensibilizantes y visualizados en

fase de Coombs C
A
F Anti-M, - N, Lea ,-P1, -I, -i, -H, Anti D, -C, -c, -E, -e; L
-HI. -K; -Jka, -Jkb; -Fya , -Fyb; -S, -s. 3
R T I
7
I . E
Generalmente aparecen de Generalmente aparecen despus
O A N
manera natural de estmulo inmune. C
S . T
Considerados sin importancia Considerados Clnicamente E
clnica. significativos. S
Interpretacin

Fase P Mayor AC Liberacin para

transfundir.
Compatible Si
Negativo
Incompatible No
Salina Compatible Si
Positivo
Incompatible No/*
Compatible Si
Negativo
Incompatible No/**
Coombs Compatible Si
Positivo
Incompatible No/*

* Slo bajo circunstancias especiales y previa notificacin al Mdico tratante y

Responsable del Banco de sangre.
** Anticuerpos contra antgeno de alta incidencia.
Pruebas cruzadas

COMPATIBLES
RECEPTOR CON CARECER DEL Ag
RAI POSITIVO CORRESPONDIENTE

TRANSFUSION NEONATOS

NO SUERO PRUEBAS CRUZADAS

RN CON
CD POSITIVO? MATERNO?

SI

ELUIDO GR

9.5.6 Pruebas cruzadas / NORMA Oficial Mexicana NOM-253-SSA1-2012

 Prueba Cruzada en Neonatos.

9.5.7 Las pruebas de hemocompatibilidad previas a una transfusin en neonatos y

menores de cuatro meses de edad debern incluir:

a) Investigacin de los grupos AB0 y Rh (D) en una muestra del menor,

empleando una prueba de aglutinacin directa o bien, mediante la genotipificacin
sangunea. En este grupo de edad no se requiere efectuar la prueba inversa, y

b) Rastreo de anticuerpos irregulares y pruebas cruzadas, que se efectuarn de

conformidad con lo siguiente:

- Se emplear el suero o plasma de la madre, de carecer de muestras maternas,

se debern efectuar con un eluido de los eritrocitos del menor, y

- En caso de que el menor hubiese sido previamente transfundido, el rastreo de

anticuerpos irregulares y las pruebas cruzadas debern realizarse, con el suero o
plasma maternos, cuando se disponga de estas muestras e invariablemente con el
eluido de los eritrocitos del menor.
 9.5.6.2 Las pruebas cruzadas tendrn una vigencia
mxima de 72 horas cuando:

a) En los ltimos tres meses el receptor tenga antecedentes propiciadores

de aloinmunizacin, tales como embarazo o transfusiones, o

b) Cuando el receptor hubiese recibido una transfusin despus de la

realizacin de la prueba cruzada.

De existir cualquiera de estas situaciones la prueba cruzada deber

repetirse.
 9.5.6.3 Variaciones:

a) No ser necesario efectuar la prueba cruzada menor, cuando se

transfundan concentrados de eritrocitos con muy bajo contenido plasmtico,
tales como los suspendidos en soluciones aditivas o eritrocitos lavados;

b) Cuando un receptor tuviese una prueba de antiglobulina directa

positiva, las pruebas cruzadas se realizarn empleando el suero del receptor
y un eluido de los eritrocitos del mismo, y

c) Cuando se transfunda plasma no se requiere hacer la prueba cruzada

mayor.
 9.5.6.4 Urgencias transfusionales.

9.5.6.5 La urgencia transfusional no exime la prctica de las pruebas

cruzadas de compatibilidad;
La sangre o CE podrn liberarse anticipadamente para su transfusin

AB0 y Rh de la unidad y de receptor

Prueba rpida en medio salino.
Se continuar con las pruebas de compatibilidad (preferentemente solucin de liss).

Prueba de Coombs.

De detectarse incompatibilidad en las pruebas cruzadas, el banco de

sangre o, en su caso, el servicio de transfusin, deber dar aviso
inmediatamente, con la finalidad de evitar o interrumpir la transfusin.
 BUSQUEDA DE UNIDAD MENOS
INCOMPATIBLE
Mezcla de Auto + Alo
Aloanticuerpo > Autoanticuerpos
Mezcla de aloanticuerpos.
El aloanticuerpo(s), considerado
ms fuerte se har ms evidente.
 Dilucin del suero del paciente

Existen dos mtodos documentados [1] ;

1. Preparar una dilucin 1:5 del suero del paciente.

2. Titular el suero del paciente contra un pool de Glbulos Rojos detectores

(semipanel) hasta encontrar una aglutinacin de 1+ ( semipanel del
Panel del Siglo XXI).

[1]What do you do when all units are incompatible? George Garratty American Red Cross Blood Services Southern
California Rev Med Inst Mex Seguro Soc 2005; 43 (Supl 1): 107-111 S111
 BUSQUEDA DE UNIDAD MENOS INCOMPATIBLE

Dilucin de suero del

paciente* (1:5 la Seleccione unidad
correspondiente a 1+) Se que no contenga
NO SI
identifica el Ag
anticuerpo? correspondiente y
Realice Pruebas
cruzadas
Realice Identificacin de
Anticuerpos irregulares
(IDAI) Notifique al Mdico
Tratante

Realice pruebas
cruzadas con el suero
diluido y seleccione la
unidad con el menor
grado de aglutinacin.
TRANSFUNDIR
 CONSIDERACIONES

NO ABUSAR DEL TERMINO MENOS INCOMPATIBLE

SE SUGIERE EMPLEAR
COMPATIBLE CONTRA ALOANTICUERPOS
AUTOANTICUERPOS PRESENTES SE SUMINISTRA UNIDAD MENOS
INCOMPATIBLE
PRUEBA CRUZADA POSITIVA, ANTICUERPO APARENEMENTE NO SIGNIFICATIVO
PRUEBA CRUZADA POSITIVA, AUTOANTICUERPO PRESENTE/ALOANTICUERPO
PRESENTE

(Petz LD. A physician's guide to transfusion in autoimmune

haemolytic anaemia. Br JHaematol 2004;124:712-7).