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IDENTIFICAO DO MATERIAL GENTICO

Caractersticas do Material Gentico


Deve conter informao complexa.
- Capaz de armazenar grandes quantidades de informao (instrues
para todas as caractersticas e funes do organismo.
- Capacidade de variar - diferentes espcies e mesmo membros de uma
mesma espcie diferem em seu contedo gentico.
- Estvel.
O material gentico deve se replicar fielmente.
- Cada organismo comea a vida como uma nica clula divises
celulares e as instrues genticas devem ser transmitidas com grande
preciso.
IDENTIFICAO DO MATERIAL GENTICO

Em 1869 Johann Friedrich Miescher descobriu o DNA.

Ele buscava determinar os componentes qumicos do ncleo celular e usava


os glbulos brancos contidos no pus para suas pesquisas.

Analisando os ncleos, Miescher descobriu a presena de um composto de


natureza cida, desconhecido at o momento. Esse composto era rico em
fsforo e em nitrognio. Foi denominado, nuclena.

Em 1880, Albrecht Kossel, demonstrou que a nuclena continha bases


nitrogenadas em sua estrutura.

Nove anos depois, Richard Altmann, aluno de Miescher, comprovou a


natureza cida do composto - cido nucleico.
IDENTIFICAO DO MATERIAL GENTICO

Foi descoberto que a degradao do cido nuclico liberava quatro tipos de


bases nitrogenadas:
- dois tipos de bases pricas: adenina e guanina
- dois tipos de bases pirimdicas: citosina e timina

Um outro produto da degradao era a pentose.

O fsforo estava presente na forma fosfato.

Tinha-se at o momento que o cido nuclico era composto de bases


nitrogenadas (pricas e pirimdicas), de um glicdio (pentose) e de fosfato.

Em 1890, foi descoberto em levedura um outro tipo de cido nuclico, que


possua uracila ao invs de timina e ribose ao invs da desoxirribose - RNA.

Dois tipos de cidos nuclicos:


- cido ribonuclico (RNA) ; cido desoxirribonuclico (DNA)
IDENTIFICAO DO MATERIAL GENTICO

Em 1912, Phoebus Levine e Walter Jacobs concluram que o componente


bsico dos cidos nucleicos era uma estrutura composta por uma unidade
que se constitua numa base nitrogenada ligada a uma pentose, e esta por
sua vez, ligada a um fosfato - denominada nucleotdeo.

Um cido nucleico polinucleotdeo.

Os estudos dos cidos nucleicos continuaram por muitos


anos sem que os cientistas soubessem de sua
importncia como material hereditrio, descoberta que
s foi realizada muitos anos depois.
A descoberta do Princpio Transformante

1928: Experimentos feitos por F. Griffith com bactrias


(Streptococus pneumoniae) .

Bactria infectava camundongo e o matava.

Duas cepas:
Cepa lisa (cepa S Smooth) infecciosa (virulenta); cresce como colnias
lisas em placa de Petri (ela encapsulada por uma capa de polissacardeos
que a torna resistente ao sistema imune do camundongo).
Cepa rugosa (cepa R - Rough) no-infecciosa (no-virulenta); colnias
rugosas (no tem a capa, vulnervel).
Estudou o efeito das cepas das bactrias em camundongos.
Infectou camundongos com a bactria pneumococo.
Experimento
1) Injetou a cepa S no camundongo morreu
2) Injetou a cepa R no camundongo vivo
3) Injetou cepa S morta pelo calor em
camundongos - vivo
4) Injetou nos camundongos uma mistura de
cepa R viva e cepa S morta pelo calor os
camundongos morreram.
A cepa R e a cepa S morta pelo calor no eram
virulentas quando administradas
independentemente.
Isolou o sangue do camundongo morto e fez uma
cultura, e descobriu bactrias lisas presentes no
sangue do camundongo morto.
A cepa S morta pelo calor transformou a cepa R
viva na cepa S Princpio Transformante
Em 1944, Avery, Macleod e McCarty descobriram a
natureza do princpio transformante

- Repetiram os experimentos de transformao em uma proveta.


- Descobriram que poderiam converter a cepa R em uma cepa S bastando
para isso adicionar um extrato livre de clulas da cepa S na cepa R.

Mas o que havia no extrato livre de clulas que poderia converter a cepa
R em cepa S?

Protena? DNA? RNA?


Pegaram o extrato livre de clulas e o
trataram com vrias enzimas para
verificar se o extrato ainda era efetivo
na transformao de R S.
1) Extrato livre de clulas + proteases
ativo portanto no era uma protena;
2) Extrato livre de clulas +
ribonuclease ativo portanto no era
RNA;
3) Tratou o extrato livre de clulas +
desoxirribonuclease inativo -
DEVE SER DNA
Experimento de Hershey e Chase

Experimento de Alfred Hershey e Marta Chase com


bacterifagos em E. coli - 1952

Como ocorre o processo de infeco?


O bacterifago injeta seu DNA, seu capsdeo proteico ou ambos?

Para rastrear se a protena e ou o DNA entram na clula, eles usaram


radioistopos

Quando o fago infecta a bactria, ele injeta seu DNA viral dentro
da clula. O DNA replicado novos vrus de prognie so feitos
lise da clula causando a morte celular.
- foi usado o istopo 35S
para marcar protena
virais (marca apenas
protenas, porque o
enxofre no est
presente no DNA)

- foi usado o istopo 32P


para marcar o DNA viral
(marca apenas o DNA
porque o fsforo no est
presente em protenas)
Havia relutncia em aceitar o DNA como responsvel pela transmisso
gentica por ser muito simples.

O DNA teria que reunir as seguintes caractersticas:


Capacidade de auto-replicao
Capacidade de codificar informaes em grande nmero

Os blocos construtivos do DNA eram conhecidos, mas a sua estrutura


no.

Estes blocos so nucleotdeos formados de:


Desoxiribose; Base nitrogenada; Fosfato
A descoberta de Chargaff
No perodo de 1949 a 1953, estudos realizados no laboratrio
de Erwin Chargaff e colaboradores buscaram quantificar cada
um dos tipos de base nitrogenada do DNA (adenina, timina,
citosina e guanina) de vrias espcies. Para isso utilizaram
mtodos de cromatografia.

Concluses

A quantidade de nucleotdeos pirimidnicos (T+C) sempre igual a


quantidade total de nucleotdeos purnicos (A+G)
A Quantidade de T = A; C = G
A Quantidade de A+T diferente de G + C
A relao A + T / G + C espcie especfica
Rosalind Franklin e Maurice Wilkins (dama sombria)

A famosa cristalografia de raios-X do DNA produzida por Rosalind Franklin.


O DNA longo e fino.
1953 James Watson e Francis Crick propuseram a Dupla hlice baseando-se
nos dados de Rosalind e Wilkins e nas relaes de Chargaff.
Ganharam o prmio Nobel de fisiologia em 1962.
Comea a era da Biologia Molecular
Estrutura dos cidos Nuclicos

A molcula de DNA composta de


polinucleotdios enrolados, ao longo de um
mesmo eixo formando uma dupla hlice, onde
os grupos fosfatos e as desoxirriboses
esto localizados na parte externa da dupla
hlice formando o esqueleto e as bases
nitrogenadas ficam na parte interna
Estrutura dos cidos Nuclicos

Composio dos cidos Nuclicos


DNA e RNA

Polmeros lineares de nucleotdeos unidos por ligaes fosfodister

Estrutura bsica de um nucleotdeo e sua composio.


Estrutura dos cidos Nuclicos

Composio dos cidos Nuclicos DNA e RNA


Composio geral dos nucleotdeos (monmeros)
Grupamento fosfato - Acar - Base nitrogenada (purinas e pirimidinas)

Grupamento fosfato

Base nitrogenada
Acar
Diferenas entre DNA e RNA
Estrutura do DNA 5
3
Dupla hlice, onde cada hlice uma
cadeia de nucleotdeos mantidos juntos
por ligaes fosfodister.

As duas hlices so mantidas juntas por


pontes de hidrognio.

As fitas so invertidas e complementares

3 5
Estrutura dos cidos Nuclicos

Ligao fosfodister

a ligao do fosfato, presente no carbono 5 da


pentose, com a hidroxila, presente no carbono 3
da pentose.

uma ligao muito forte e por esta razo o


DNA muito estvel.
Estrutura dos cidos Nuclicos

O DNA tem duas pontas livres, que no fazem


nenhuma ligao fosfodister. Uma das pontas
chamada de 5, onde h o fosfato livre. A outra
ponta chamada de 3, onde h o OH livre.

Por conveno, uma sequncia de DNA que no


possui nenhuma especificao em suas pontas, ter
na sua extremidade esquerda (comeo) a ponta 5 e
na sua extremidade direita (fim) a ponta 3.
Pareamento de Bases Estrutura dos cidos Nuclicos

A = T ou T =A
G C ou C G

Bases so complementares.

Pontes de hidrognio so formadas entre as bases


A = T 2 pontes de hidrognio
G C 3 pontes de hidrognio

G C MAIS ESTVEL
Estrutura dos cidos Nuclicos

Os pares de base distam 0.34


nm. Uma volta completa da hlice
requer 3.4 nm (10 bases/volta).

A hlice de DNA tem cavidades


(Sulcos) de diferentes tamanhos,
Sulco maior: 12
Sulco menor: 6
Estrutura dos cidos Nuclicos
Tipos de DNA (conformaes)

DNA B
a forma mais abundante na clula
a forma clssica do DNA
A dupla hlice gira para a direita

DNA A
Forma mais compacta
Encontrado nos hbridos DNA:RNA

DNA Z
Sequncias GC repetidas
A dupla hlice gira para a esquerda
Estrutura dos cidos Nuclicos

Modelo Dupla Hlice do DNA - Caractersticas principais

Duas cadeias polinucleotdicas esto arranjadas em dupla-hlice no


sentido horrio.
As cadeias nucleotdicas so anti-paralelas:
As espinhas dorsais ose-fosfato esto fora da dupla hlice, e as bases
orientadas para dentro do eixo central.
Os pares de base complementares das fitas opostas so mantidas unidas
por pontes de hidrognio .
A pareia com T ( 2 pontes-H ), e G pareia com C ( 3 pontes-H ).
ex.: 5-TATTCCGA-3
3-ATAAGGCT-3
Os pares de base distam 0.34 nm. Uma volta completa da hlice requer
3.4 nm (10 bases/volta).
As espinhas dorsais ose-fosfato no esto igualmente espaadas,
resultando em maior e menor sulcos.
ORGANIZAO DO MATERIAL GENTICO CELULAR
Como acomodar/armazenar enormes quantidade de informao gentica
no pequeno volume de uma clula?

Por exemplo a bactria E. coli tem apenas um cromossomo com


aproximadamente 4.64 milhes de pares de bases, se esticado seria
1000 vezes maior que ela.

As clulas humanas contm 6 bilhes de pares de bases, que esticados


teriam cerca de 1,8 metros. O menor cromossomo humano teria 14.000
o tamanho do ncleo.

Assim fica evidente que as molculas de DNA tem que ser


exageradamente compactadas pra poderem se justar a espaos to
pequenos
Cromossomo bacteriano
A maioria 1 molcula de DNA circular, encontrou-se molculas lineares em
algumas espcies.
No um circulo aberto, relaxado 3 a 4 milhes de pares de bases.
No DNA nu, no apresenta histonas. H um complexo com protenas que
ajudam a compact-lo.
Fago T2
A estrutura do DNA pode ser considerada em 3 nveis hierrquicos:
Estrutura primria que a sequncia de nucleotdeos;
Estrutura secundria que a hlice bifilamentar;
Estrutura terciria que refere-se a um dobramento que possibilita o DNA ser
compactado no pequeno espao de uma clula.

CROMATINA
o complexo de DNA, protenas histnicas e no histnicas, presente no ncleo
de uma clula eucaritica.

Uma molcula de DNA para cada filamento de cromatina.

PROTENAS
Cromossomais no histnicas: desenvolvem papis estruturais e enzimticos
Histonas: protenas bsicas que mantm a estrutura do DNA, que uma molcula
muito comprida. H1, H2A, H2B, H3 e H4.
O DNA das clulas est
empacotado no ncleo

Este empacotamento se d atravs


da associao do DNA (-) com
protenas chamadas histonas (+)

As histonas permitem a regulao


da expresso gnica ao abrirem ou
fecharem a cromatina, permitindo o
acesso ao DNA por outras protenas
(fatores de transcrio)

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