Northern

blot
Northern blot es una tcnica de laboratorio que se utiliza para
detectar una secuencia de ARN especfica en un muestra de sangre
o de tejido.

Este mtodo se utiliza

muy frecuentemente
para realizar estudios de
expresin gnica.
La tcnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo
fundamento que la autorradiografa, y permite identificar la presencia
de una banda concreta en un gel de electroforesis, bien sea de
protenas o de cidos nucleicos:

*En 1977, James Alwine, David Kemp y

George Stark en la Universidad de
Stanford desarrollaron el northern blot*
 ELECTROFORESIS TRANSFERENCIA (BLOTTING)

Se transfieren las bandas de protenas o de

cidos nucleicos desde el gel hacia una
membrana de nitrocelulosa (flechas azules) para
Se separan las protenas o los cidos nucleicos en
que puedan reaccionar con la sonda radioactiva.
un gel de electroforesis.
*Con cidos nucleicos se utiliza un gel de agarosa

Se aaden sondas radioactivas de cidos nucleicos AUTORRADIOGRAFA

(con secuencia conocida). Se espera a que
reaccionen (A). Se coloca la membrana de
nitrocelulosa sobre una placa fotogrfica y se revela
(B).
 Extraer RNA total
Separarlo por tamao mediante electroforesis
Transferir e inmovilizar en una superficie slida (membrana nylon ).
Los sistemas de capilaridad inica se utilizan para transferir el RNA
desde un gel de electroforesis a una membrana de Northern blot.
 Despus del marcaje de la sonda, esta se hibrida con el RNA en
la membrana

La membrana debe de lavarse para asegurar que la sonda se ha

unido de forma especfica y para evitar ruido de fondo en las
seales emitidas por la misma
 Existen 2 tipos de membranas
a) NITROCELULOSA
Baja capacidad de unin de cidos nucleicos (80g /cc2)
Frgil
Carga negativa
b) NYLON
Mayor capacidad de unin (400-500g/cc2)
Mayor resistencia
Carga neutra o positiva
Los pequeos RNA no codificantes son secuencias involucradas en
diversas funciones celulares, tanto constitutivas como de regulacin.
La funcin para muchos de estos sRNAs an se desconoce, por lo cual
el inters y la necesidad de su deteccin, caracterizacin y validacin
funcional continan.

Definicin clulas vero : Una Lnea Celular derivada del

Rin del mono verde africano, (CERCOPITHECUS
AETHIOPS) utilizada principalmente en los estudios de
Replicacin Viral y Ensayos de placa.
*Extraccin de RNA total a partir de clulas Vero*

1) Separacin del RNA en gel de poliacrilamida.

2) Transferencia e inmovilizacin del RNA.
3) Pre-hibridacin e Hibridacin de la sonda.
4) Deteccin del RNA.
Se ha reportado la participacin de dichos RNAs en procesos
biolgicos como corte y empalme de exones, traduccin
gentica, desarrollo, diferenciacin, muerte celular, control
metablico, defensa antiviral, regulacin de expresin gentica
transcripcional y post-transcripcional.
 Permite observar la expresin gentica de
tejidos, rganos, niveles de estrs ambiental
e infecciones causadas por patgenos.
Sobreexpresin de oncogenes y la
desregulacin de genes oncosupresores en
clulas cancerosas.
Nos indica si existe algn tipo de delecin
en el proceso de transcripcin .
Con la alteracin de la sonda podemos
conocer la secuencia e incluso determinar
que regin del RNA ha sido delecionada
 La muestra de RNA requiere un mnimo de procedimiento
La tcnica puede ser fcilmente evaluada (degradacin, lmite
de deteccin).
Nos permite reconocer el anlisis de mutaciones y alteraciones
de RNAm de enzimas,
Es la tcnica ms sensible para detectar niveles de expresin de
ARNm
 El costo elevado de su elaboracin
Tcnica lenta que requiere grandes cantidades de ARN
La reproducibilidad de los datos no siempre es consistente.
Este problema se ha resuelto parcialmente haciendo
mediciones por duplicado
Su resultado depende de la sonda que se utilice, de las
propiedades qumicas de esta.
o http://www.ehu.eus/biomoleculas/isotopos/blot.htm
o https://www.genome.gov/glossarys/index.cfm?id=458
o https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287216/
o https://revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/48
522/54118
Northern blot es una tcnica de laboratorio que se utiliza para
detectar una secuencia de ARN especfica en un muestra de sangre
o de tejido.

Este mtodo se utiliza muy

frecuentemente para
realizar estudios de
expresin gnica.
 La tcnica de transferencia (blotting) se basa en el mismo fundamento que
la autorradiografa, y permite identificar la presencia de una banda
concreta en un gel de electroforesis, bien sea de protenas o de cidos
nucleicos:

Si se trata de protenas, la tcnica se llama Western blot.

Si se trata de DNA, la tcnica se llama Southern blot. *En 1977, James Alwine, David
Kemp y George Stark en la
Universidad de Stanford
Si se trata de RNA, la tcnica se llama desarrollaron el northern blot*
Northern blot.
 TRANSFERENCIA (BLOTTING)
ELECTROFORESIS

Se transfieren las bandas de protenas o de cidos

nucleicos desde el gel hacia una membrana de
nitrocelulosa (flechas azules) para que puedan
reaccionar con la sonda radioactiva.
Se separan las protenas o los cidos nucleicos en un gel
de electroforesis.
Con cidos nucleicos se utiliza un gel de agarosa

AUTORRADIOGRAFA
Se aaden sondas radioactivas de cidos nucleicos (con
secuencia conocida). Se espera a que reaccionen (A). Se
coloca la membrana de nitrocelulosa sobre una placa
fotogrfica y se revela (B).
1. Aislamiento de RNA
2. Desnaturalizar el RNA
3. Separar por electroforesis desnaturalizante
4. Transferir a membrana de nitrocelulosa o nylon
5. Hibridar con sonda especfica
6. Revelar con placa de Rayos X pantalla de fosforimager
Expresin
a) NITROCELULOSA
o Baja capacidad de union de acidos nucleicos(80microgramos/cc2)
o Fragil
o Carga negativa
b) NYLON
o Mayor capacidad de unin (400-500microgramos/cc2)
o Mayor resistencia
o Carga neutra o positiva
El procedimiento general comienza con la extraccin del RNA total de una muestra de tejido
homogenizado
Las muestras de ARN son entonces separadas por electroforesis en gel
Dada la fragilidad de los geles y la incapacidad de las sondas para penetrar en la matriz, las
muestras de RNA, separadas por tamao tras la electroforesis, sern trasferidas a una
membrana de Nailon por medio de capilaridad o un sistema de transferencia al vaco.
Los sistemas de capilaridad inica se utilizan para transferir el RNA desde un gel de
electroforesis a una membrana de Northern blot.
Despus del marcaje de la sonda, esta se hibrida con el RNA en la membrana
Finalmente, la membrana debe de lavarse para asegurar que la sonda se ha unido de forma
especfica y para evitar ruido de fondo en las seales emitidas por la misma
 Permite observar la expresin gentica de tejidos, rganos, niveles de
estrs ambiental e infecciones causadas por patgenos.
Sobrexpresin de oncogenes y la desregulacin de genes
oncosupresores en clulas cancerosas.
Nos indica si existe algn tipo de delecin en el proceso de
transcripcin .
Con la alteracin de la sonda podemos conocer la secuencia e incluso
determinar que regin del RNA ha sido delecionada
Ventajas
La muestra de RNA requiere un mnimo de procedimiento
La tcnica puede ser fcilmente evaluada (degradacin, lmite de deteccin).
Nos permite reconocer el anlisis de mutaciones y alteraciones de RNAm de enzimas, y el la regulacin de la
expresin gnica de marcadores moleculares de clulas leucmicas humanas y molculas del reconocimiento
inmunolgico

Desventajas
El costo elevado de su elaboracin
La reproducibilidad de los datos no siempre es consistente. Este problema se ha resuelto parcialmente
haciendo mediciones por duplicado
Su resultado depende de la sonda que se utilice, de las propiedades qumicas de esta.
Se requiere mucha mas de RNA(20microgramos de RNA total ).
 1. http://www.ehu.eus/biomoleculas/isotopos/blot.htm
2. https://www.genome.gov/glossarys/index.cfm?id=458
3. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4287216/