COLORANTES HEMATOLGICOS

Qu es un COLOR?

Es la onda del espectro de luz visible que absorbe y refleja un cuerpo

Espectro de luz visible:

380 nm. Violeta
780 nm..Rojo
 Un cuerpo es BLANCO cuando refleja todas las
longitudes de onda
Un cuerpo es NEGRO cuando absorbe todas las
longitudes de onda
Un cuerpo es ROJO cuando absorbe todas las
longitudes de onda menos las rojas
Qu es un COLORANTE?

Es una sustancia con la capacidad de transmitir un color a un

sustrato
Debe penetrar e interactuar con las estructuras moleculares
de las clulas
Las estructuras de las clulas que deseamos teir deben ser
tratadas previamente, mediante FIJACIN.

Fijacin: inmoviliza y permite que las estructuras puedan ser

posteriormente coloreadas sin ser arrastradas en el proceso
Durante la FIJACION se producen varios fenmenos:
Se coagulan las protenas celulares conservando su arquitectura
Pueden perderse algunas sustancias no esenciales para la
interpretacin citomorfolgica; los alcoholes disuelven las grasas
Las extensiones sanguneas se pueden fijar con calor seco, alcoholes,
formaldehdo, acetona, etc. El mejor fijador para morfologa es el
metanol (alcohol metlico)
QUE PRETENDEMOS CON LAS TINCIONES?

1. Identificar las clulas

2. Identificar sus estructuras internas
Densidad de la cromatina
Presencia de nuclolos
Citoplasma: Caractersticas
Granulacin
NUCLEO
CONTIENE ADN Y PROTEINAS ESPECIFICAS SU MAYOR O MENOR
DENSIDAD, EQUIVALENTE A MAS O MENOS MADUREZ, SE TRADUCE
POR UNA COLORACIN +/ INTENSA.
LA PRESENCIA DE NUCLEOLOS (ACUMULACION DE ARN PROPIA DE
CELULAS INMADURAS) SE VE COMO UNA ZONA CLARA RODEADA DE
UN HALO MAS INTENSO
RETICULO ENDOPLASMICO RUGOSO ES EL LUGAR DONDE SE
SINTETIZAN LAS PROTEINAS DE LAS CELULAS ES MUY RICO EN ARN
(RIBOSOMAS) CUYO CARACTER ACIDO ATRAE A LOS COLORANTES
BASICOS A VECES MUESTRA DILATACIONES QUE AL MICROSCOPIO
PARECEN PEQUEAS VACUOLAS SU PRODUCCION SE ENVIA AL
APARATO DE GOLGI, Y DE ESTE AL EXTERIOR
ESTRUCTURAS GRANULARES MITOCONDRIAS LISOSOMAS CENTRIOLOS
GRANULOS DE GLUCOGENO VACUOLAS OTRAS SE OBSERVAN CON EL
MICROSCOPIO OPTICO COMO GRANULOS, MAS O MENOS GRANDES,
QUE ADQUIEREN DISTINTA COLORACION SEGUN SU CONTENIDO
QU COLOR TRANSMITE UN COLORANTE?
1. El suyo propio
2. Metacromasia
3. alocromasia
COMO TRANSMITE EL COLOR?

Coloracin = impregnacin del sustrato

Reaccin qumica = citoqumica
MECANISMO USUAL DE COLORACION ATRACCION ELECTROSTATICA
Coloracin: Afinidad de carga elctrica del colorante por el sustrato
celular
Directa: Se produce una unin electro polar entre colorante y sustrato
Indirecta: El colorante necesita una pieza de unin intermedia, a la
que se denomina mordiente
Los mordientes suelen ser metales: aluminio, molibdeno, cromo,
vanadio, etc

El conjunto colorante + mordiente se

denomina laca
Ejemplo: Tanto la Hematoxilina como el
Rojo Nuclear emplean el Aluminio como
mordiente
 Coloracin progresiva
Se aade al sustrato celular el colorante muy diluido
(por ej. al 1%), y se deja durante tiempos diferentes
en distintas muestras. Se observa la tincin de
distintas estructuras de manera progresiva

Coloracin regresiva Partiendo del colorante muy concentrado, se

enjuagan gradualmente las muestras (diferenciacin) hasta lograr la
mejor visualizacin de determinadas estructuras celulares
METACROMASIA
Fenmeno tintorial en el que un colorante determinado tie a un
sustrato celular en un color diferente al propio

AZUL DE TOLUIDINA
GRUPO CROMOFORO: son grupos de tomos en
resonancia (e- en vibracin) que predisponen a
la molcula a ser colorante
FRACCION CROMOGENA: constituyen la mayor
parte de la molcula, a la que da color (peso y
densidad)
GRUPO AUXOCROMO: portador de la carga
elctrica, positiva o negativa, que se une al
sustrato
Grupos cromforos: -NO (nitroso)
-NO2 (nitro)
-N=N- (azo)
-C=S (tio)
Son grupos atmicos en resonancia (nubes de electrones en
vibracin), que confieren una aptitud colorante a la molcula.
Aportan el color de base: morado en el caso de la anilina
 Fraccin cromgena
Anillo bencnico
Cuanto mayor sea el peso de esta fraccin mas intensa
ser la accin colorante
Pueden ser cclicos (derivados de Benceno, Antraceno o
Naftaleno) o Acclicos (Etil, Metil,...)
Grupos auxcromos Catinicos (+): Amina primaria NH2 Amina
secundaria -NH- Derivados arlicos y alqulicos Aninicos (-): Carboxilo
COOH Sulfnico SO3H Oxidrilo OH Fosfrico PO4H3 Nota: Actan
como lugar de enganche al sustrato celular. Para ser activos deben
hallarse como sales solubles (sdicas, potsicas, cloruros, sulfatos, etc)
Los AUXOCROMOS CATIONICOS o bsicos (+) se salifican con los cidos
(-) del sustrato: afinidad del sustrato celular [-] por colorantes bsicos
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 COLORANTES NEUTROS