LA CLULA COMO UNIDAD

VITAL
 LA CITOLOGA
En el siglo XVII aparece la Citologa
como ciencia debido a:

Aparicin de Bacon, Descartes...:

lo que era una ciencia especulativa
pas a basarse en la experiencia y
la observacin.

Avances tecnolgicos: uso de

lentes para aumentar el tamao de las
cosas.

Curiosidad cientfica.
 LA
INTERDISCIPLINARIDAD,
LA COOPERACIN Y LA
CURIOSISDAD CIENTFICA
HAN SIDO Y SON LA
CLAVE DE LA MAYORA DE
LOS AVANCES
CIENTFICOS
 HISTORIA DEL ESTUDIO DE LA
CLULA

De qu estn compuestos los seres vivos?

Hasta el siglo XV se consideraba,

tomando como base las ideas de
Hipcrates (600 a.c.), que los seres vivos
estaban formados por una sustancia o
crasis a base de diferentes jugos o
humores
 HISTORIA DEL ESTUDIO DE LA
CLULA
EL MICROSCOPIO
Se invent, hacia 1610, por Galileo, segn
los italianos, o por Jansen, en opinin de
los holandeses
HISTORIA DEL ESTUDIO DE LA
CLULA
ROBERT HOOKE
HISTORIA DEL ESTUDIO DE LA CLULA

LEEUWENHOEK POPULARIZ EL USO DEL MICROSCOPIO

(1964)
HISTORIA DEL ESTUDIO DE LA CLULA:
DESARROLLO DE LA MIROSCOPA
 HISTORIA DEL ESTUDIO DE LA CLULA :
LA TEORA CELULAR
Schleiden y Schwan son considerados los autores iniciales de la Teora
Celular, complementada luego por Virchow (omnis cellula e cellula) y
universalizada a todos los tejidos por Ramn y Cajal (Premio Nobel en
1906).

La Teora Celular se puede resumir:

Existen seres unicelulares y pluricelulares: todos los organismos son
clulas o estn formados por ellas.
La clula es la unidad estructural, fisiolgica y reproductiva de los seres
vivos Es la unidad de vida independiente ms elemental.

Rodolfo Virchow Ramn y Cajal

COMPONENTES COMUNES EN LA
MAYORA DE CLULAS

MEMBRANA
PLASMTICA

CITOPLASMA

INFORMACIN
GENTICA

QUIN SE SALE DE LA NORMA?

 NIVELES DE ORGANIZACIN
CELULAR

CLULA PROCARIOTA CLULAS EUCARIOTAS

Bacillus anthracis
Tejido Cartilaginoso
 CLULAS PROCARIOTAS CLULAS EUCARIOTAS

ORIGEN 3500 ma aprox 1500 ma aprox

TAMAO Generalmente de 0,2 a 10 m Generalmente de 10 a 100 m

ORGANISMOS Archaeas y Bacterias Protoctistas, hongos, plantas y

animales
E. NUCLEAR No Si
ADN 1 molec ADN bc circular sin Cromosomas
histonas
TRANSCRIPCIN Y En = compart. e incluso al = t. Separadas espacial y
TRADUCCIN temporalmente
NUCLEOLO No Si
RIBOSOMAS 70 S 80S
CITOESQUELETO NO SI
ORGNULOS Pocos o ninguno Numerosos, sistema de memb
MEMB. PLASMT. Sin esteroles Con esteroles
PARED CELULAR Si, con PG Solo en vegetales, de celulosa
ORGNULOS mesosomas Mitocondrias y cloroplastos
ENERGTICOS
METABOLISMO De todos los tipos Generalmente aerobio
DIV. CELULAR Biparticin o gemacin Mitosis y meiosis
CLULA PROCARIOTA
 Organizacin Celular Procariota:
REINO MONERAS
DOMINIO ARQUEA DOMINIO BACTERIA

Ferroplasma acidiphilum
CLULA EUCARIOTA
 Organizacin Celular Eucariota:
DOMINIO EUCARYA
Reino Protoctista Reino Vegetal

Paramecium sp Klebsormidium sp Xilema y floema de pino

Reino Animal
Reino Hongos

Saccharomyces cerevisiae Scytalidium thermophilum

Epitelio Cbico Simple humano

LOS TRES DOMINIOS DE WOESE (1990)

El Sistema de los Tres

Dominios, propuesto por
Woese, es un modelo
evolutivo de clasificacin
basado en las diferencias
en las secuencias del
ARNr 16S y ARNt de la
clula, la estructura de
los lpidos de la
membrana, y la
sensibilidad a los
antibiticos.
 I. EL ORIGEN DE LA VIDA

Cambios Geolgicos
Hace 4500 ma, Descargas elctricas
Bombardeo de meteoritos
en La Tierra... Sin oxgeno

En 1922, Oparin propone: compuestos

orgnicos simples pudieron originarse a partir
de una mezcla de molculas orgnicas (Sntesis
prebitica).
 II. EL ORIGEN DE LA VIDA
En 1952 Stanley Miller (1952): Oparin
tena razn.
III. EL ORIGEN DE LA VIDA
Una vez surgidos los primeros
compuestos orgnicos, stos pudieron
combinarse entre s hasta dar lugar a una
molcula con capacidad de copiarse a s
misma, posiblemente ARN, y
posteriormente apareceran el ADN y las
protenas. Estas molculas se rodearon
de membrana y establecieron el control
sobre su replicacin: Las primeras
clulas vivas!
III. EL ORIGEN DE LA VIDA: otras teoras

Cometas y condritas

las arqueobaterias

Panspermia ?
 LOS PRIMEROS SERES VIVOS
BACTERIAS ANAEROBIAS CON
METABOLISMO FERMENTATIVO

CIANOBACTERIAS
Estromatolito
ATMSFERA CON OXGENO fsil. 3500ma
Evidencia de vida
ms antigua de la que
hay registro fsil en la
Tierra

PRIMERAS CLULAS CON RESPIRACIN

AEROBIA
Origen de las clulas eucariotas:
Teora Endosimbitica

LINN
MARGULIS
 Origen de las clulas eucariotas:
Teora Endosimbitica

Actualmente la idea ms aceptada es que:

1.- El ncleo se form por invaginacin de la
membrana plasmtica y de ah se originaron
tambin los orgnulos membranosos del sistema de
endomembranas.
2.- Mitocondrias y Cloroplastos se originaron por
endosimbiosis.
 Origen de las clulas eucariotas:
Teora Endosimbitica
CLULA HOSPEDADORA:
Una Archea que perdi la pared.
CLULAS SIMBIONTES:
Una bacteria prpura no sulfurosa: MITOCONDRIA.
Una Cianobacteria: CLOROPLASTO.

Plantas, algas verdes Animales, hongos

Plantas
y algunosy protistas
algas Animales, hongos y
y algunos protistas
protozoos
 EVIDENCIAS A FAVOR DE LA TEORIA
ENDOSIMBITICA
Las mitocondrias tienen su propio ADN en
una sola molcula continua, como las de las
procariotas
Muchas de las enzimas de las membranas
celulares de las mitocondrias se encuentran
tambin en las membranas de las bacterias.
Las mitocondrias solo se forman por fisin
binaria a partir de otras mitocondrias
Varias especies de Cianobacterias viven
dentro de otros organismos como plantas y
hongos, lo que demuestra que esta
asociacin no es difcil de mantener
Pruebas en contra de la teoria
ENDOSIMBITICA

Las mitocondrias y los plastos contienen

intrones, una caracterstica exclusiva del ADN
eucaritico. Por tanto debe de haber ocurrido
algn tipo de transferencia entre el ADN nuclear
y el ADN mitocondrial/cloroplstico.
 ORIGEN DE LA CLULA EUCARIOTA:
Consideracin actual
Actualmente se considera que la evolucin pudo
darse a travs de dos vas:

La aparicin de membrana nuclear, retculo

endoplsmico, aparato de Golgi, vacuolas y
lisosomas se explicara mediante la Teora
autgena.

La aparicin de mitocondrias y cloroplastos se

explicara mediante la Teora endosimbitica.
MTODOS DE ESTUDIO DE LA
CLULA
NECESIDAD DE CONOCER LA CLULA
(Aplicaciones farmacuticas, mdicas, industriales,
conocimiento...)

Necesidad del desarrollo de tcnicas que

permitan observar su estructura, y aclarar su
composicin y arquitectura molecular.
MTODOS DE ESTUDIO DE LAS
CLULAS
Bsicamente se cuenta actualmente con cinco
modalidades principales para abordar el estudio de las
clulas, y frecuentemente suelen utilizarse en forma
conjunta ms de una de ellas:
1 - Observacin de la estructura de las clulas por
medio de microscopios (In vivo o post mortem).
2 - Fraccionamiento de clulas y anlisis de sus
molculas (citoqumica).
3 - Aislamiento y cultivo de clulas.
4 - Localizacin de molculas biolgicas por medio de
istopos radioactivos o anticuerpos marcados.
5 - Utilizacin de la tecnologa del ADN recombinante.
 1. Mtodos de estudio de la
morfologa y estructura celular
El pequeo tamao y la transparencia a la
luz visible de la clula han propiciado el
desarrollo de una gran variedad de
tcnicas, enfocadas a aumentar el poder
resolutivo y el contraste.
El estudio de la morfologa de las clulas
puede llevarse a cabo en dos condiciones:
Mtodos de estudio in vivo.
Mtodos de estudio post-mortem.
 1.1.Mtodos de estudio in vivo.
Estudian al organismo vivo. Consisten en una
observacin directa, ayudada por instrumentos
pticos ms o menos complejos.
El problema que presenta este tipo de estudios
es que el contraste que presentan las
estructuras biolgicas puede ser mnimo y es
necesario aumentarlo. Esto se consigue
mediante colorantes intravitales o determinado
tipo de microscopios (de campo oscuro, de
contraste de fases...)
 Observacin
in vivo al
microscopio
ptico de
una gota de
agua de
maceta.
(protozoo)
Organismo unicelular ciliado
(Vorticella sp).
Observacin in vivo
1.2. Mtodos de estudio post-mortem.
Es un mtodo que consiste en preservar la morfologa y
composicin de las clulas tras su muerte con el fin de estudiar los
detalles de la morfologa celular. Los pasos que se siguen, antes de
la observacin al microscopio, son:

Fijacin de clulas
Los fijadores suelen actuar sobre las protenas celulares
precipitndolas. Este proceso permite detener los procesos vitales.
La fijacin se puede realizar mediante mtodos fsicos, como la
congelacin, o mtodos qumicos, como el tetraxido de osmio,
lquido de Bouin, aldehdos...
Tras la fijacin de las muestras se procede a la obtencin de cortes
finos (se utilizan los llamados microtomos, en el que se introduce la
muestra previamente endurecida e incluida en una parafina o
resinas epoxi, que es el mtodo ms usual).
Tincin.
La tincin nos permite crear contrastes artificiales para facilitar la
observacin
Las tinciones son sustancias de naturaleza orgnica y aromtica, y
se reconocen 2 grandes grupos: cidos y bsicos..
 Microtomo

Ultramicrotomo
 1.3. TCNICAS DE TINCIN
1.3.1. Tincin general. Una de las tinciones
ms utilizada es la hematoxilina-eosina:

Los cidos nucleicos y otros componentes

cidos de la clula tienen afinidad por los
colorantes bsicos. (hematoxilina)
El citoplasma, de naturaleza bsica, se tie
con colorantes cidos. (eosina)
Seccin de un glomrulo de un rin de mamfero obtenida a partir
de una inclusin en parafina y teido con hematoxilina-eosina. Los
ncleos aparecen de color violceo (hemtoxilina) y el citoplasma de
color rosado (eosina).
 1.3. TCNICAS DE TINCIN
1.3.2. Tcnicas especficas.
Tincin de Feulgen: especfica para el ADN.
Tie el ncleo de color morado)
Tetraxido de osmio o Sudn III para lpidos.
Las protenas se colorean de azul con
nihidrina.
La celulosa o el almidn con Lugol, etc.
 1.3. TCNICAS DE TINCIN
1.3.3. Tincin diferencial: utilizan al menos
dos colorantes distintos; es el caso de la
llamada tincin de gram que permite
diferenciar bacterias gram + (color azul)
de bacterias gram (color rojo), en base a
su pared celular.
 Tincin de Gram

Gram - Gram +
 1.3. TCNICAS DE TINCIN
1.3.4. Las tinciones tambin pueden
utilizarse para poner de manifiesto
determinada actividad enzimtica. Por
ejemplo, la existencia de fosfatasa cida,
caracterstica de los lisosomas, se puede
observar mediante la tcnica de Gomori.
 TCNICA DE GOMORI

1. Incubacin del tejido

con glicerofosfato de
sodio.
2. Se aade nitrato de
plomo. (con el fsforo
liberado por la
fosfatasa cida, forma
fosfato de plomo, que
precipita y es
fcilmente identificable
al m.e.)
Ganglio linftico de rata.
 1.3. TCNICAS DE TINCIN
1.3.5. Tincin con colorantes fluorescentes.
Naranja de acridina, se tien especficamente
el ADN y ARN.
Tincin de Auramina, etc.
Mycobacterium
(bacterias cido alcohol resistentes)
Tincin de Auramina: Consiste en teir con Auramina
(Colorante fluorocrmico), decolorar con cido alcohol,
contracolorear con permanganato potsico, lavar con
agua abundante y dejar secar
1.4.TIPOS DE MICROSCOPIOS
1.4.1. MICROSCOPA
PTICA
1.4.1. MICROSCOPA PTICA
Las dos caractersticas ms importantes de
un microscopio son:
Amplificacin: aumento del objetivo x aumento del ocular
Poder de resolucin (distancia mnima para que
dos puntos prximos se vean como puntos
diferentes) , que depende de:
Longitud de onda de la luz incidente: a menor
longitud de onda, mejor resolucin (= menor poder
de resolucin).
ndice de refraccin del medio que se encuentra
entre la muestra y el objetivo. (aire)
1.4.1. MICROSCOPA PTICA
CONCLUSIN:
El principal factor limitante es la longitud de
onda de la luz visible, es imposible construir
un microscopio con un poder de resolucin
inferior a 0,2 micrmetros.
Los objetivos de inmersin tienen un poder de
resolucin mayor, ya que utilizan una
sustancia viscosa como el aceite (indice de
refraccin=1,5) frente al aire (ndice de
refraccin=1).
 1.4.1. TIPOS DE MICROSCOPIOS
PTICOS
1.4.1.1. M. de Campo Claro: para observar muestras
in vivo.
1.4.1.2. M. de Campo Oscuro: para observar
microorganismos; en l un disco opaco bloquea la luz, de forma
que slo la luz refractada por la muestra alcanza el objetivo y la
muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro.
1.4.1.3. M. de Contraste de Fases: se basa en que
las diferentes estructuras celulares tienen distinta densidad y, por
tanto, vara su ndice de refraccin.
1.4.1.4. M. de Interferencia Diferencial de
Nomarsky: utiliza un prisma refringente que divide la luz en
dos rayos polarizados que interfieren entre s, rpoporcionando una
imagen de la clula que parece tridimensional.
Funcionamiento del microscopio de
campo oscuro
Qu microscopio se ha utilizado?
Fibroblasto en cultivo. A) Microscopa de campo claro (B)
Microscopa de contraste de fase (C) Microscopa diferencial de
contraste de interferencia (DIC) Nomarski. (D) Microscopa de
campo oscuro (tomada de Alberts y col., Molecular Biology of the
Cell, 2004)
 1.4.1.TIPOS DE MICROSCOPIOS
PTICOS
1.4.1.5. M. de
Fluorescencia: emplea
una lmpara especial y un
filtro que permiten emitir luz a
diferentes longitudes de onda
y excitar ciertas molculas
(fluorocromos) capaces de
emitir fluorescencia
(absorcin de una
determinada y emisin de
luz de una mayor visible)
El microscopio de fluorescencia
Olympus BX61, acoplado con
una cmara digital
Microscopa de fluorescencia
Microscopa de fluorescencia
Microscopa de Se observa una micrografa
de una clula en mitosis.
Para obtener esta imagen,
fluorescencia se emplearon tres
molculas fluorescentes
distintas con el fin de teir
tres componentes celulares
diferentes. Se us un
anticuerpo acoplado a una
protena fluorescente verde
para detectar a los
microtbulos, otro
anticuerpo acoplado a una
protena fluorescente roja
para detectar a los
centrmeros, y un colorante
fluorescente azul para teir
el ADN, que se encuentra
condensado formando los
cromosomas. (Fuente:
Alberts y col., Molecular
Biology of the Cell, 2004).
 1.4.2. MICROSCOPIA
ELECTRNICA
Utiliza un haz de electrones en lugar de un haz
de luz. Como la longitud de onda de los
electrones es menor que la de la luz, el poder
de resolucin aumenta considerablemente
(unos 0,2 nanmetros).
El haz debe proyectarse en un sistema al vaco.
Las lentes de cristal son sustituidas por lentes
electromagnticas (electroimanes).
Existen dos tipos de microscopios electrnicos:
el de transmisin (TEM) y el de barrido (SEM).
1.4.2. MICROSCOPIA
ELECTRNICA
 MICROSCOPIO
ELECTRNICO DE
TRANSMISIN (MET)
El haz de electrones
atraviesa la muestra.
La imagen se forma por la
dispersin de los electrones
en funcin del espesor, de la
densidad molecular y del n
atmico de los tomos de la
muestra.
Se le aaden tomos
pesados para acentuar la
dispersin electrnica.
MICROSCOPIO
ELECTRNICO DE
BARRIDO (MEB)
El haz de electrones no
atraviesa la muestra.
La imagen se forma por el
reflejo del haz de electrones
al incidir sobre la superficie
de la muestra en funcin del
relieve IMAGEN
TRIDIMENSIONAL.
Previamente a la
observacin se realiza la
vaporizacin de un metal
pesado
 QU MICROSCOPIO SE HA
UTILIZADO?

C. albicans en estado reproductivo Detalle de una clula

 QU MICROSCOPIO SE HA
UTILIZADO?

Ameba Alga unicelular

 QU MICROSCOPIO SE HA
UTILIZADO?

ASTROCITO Mycobacterium tuberculosis

 QU MICROSCOPIO SE HA
UTILIZADO?

Leptospirillum
 1.4.2.1. Tcnicas especficas de
microscopia electrnica.
Difraccin de rayos x

Criofractura

Znula
ocluyente
de epitelio
 2. FRACCIONAMIENTO
CELULAR. CITOQUMICA

El objetivo del fraccionamiento celular es disgregar las

clulas separando los orgnulos principales de modo
que, sus funciones individuales puedan ser estudiadas.
El instrumento usado para fraccionar las clulas es la
centrfuga capaz de girar a diversas velocidades. La
ms poderosa, llamada ultracentrfuga puede dar
vueltas tan rpidamente como 80000 revoluciones por
minuto (RPM)
 2. FRACCIONAMIENTO
CELULAR. CITOQUMICA
De estas fracciones se pueden obtener muestras puras
de los diversos componentes celulares mediante
tcnicas bioqumicas como:
Cromatografa: separa los componentes de una mezcla
de sustancias haciendo que stas se desplacen por un
medio como, por ejemplo, papel.
Electroforesis: separa protenas segn la carga, ya que
las hace desplazarse en un campo elctrico.
Coloracin: consiste en hacer visible los compuestos
qumicos conociendo sus diferentes afinidades
tintoriales.
Marcaje con istopos. (AUTORRADIOGRAFA)
Inmunocitoqumica..
3. AISLAMIENTO Y CULTIVO DE
CLULAS.
Cultivar clulas en el laboratorio permite contar
con poblaciones homogneas de clulas vivas,
interactuando unas con otras en condiciones
controladas, en las que pueden realizarse
diferentes estudios experimentales. En este
sentido, la manipulacin de clulas resulta
mucho ms sencilla y precisa que el trabajo con
animales de laboratorio; adems, representa
una posibilidad ticamente aceptada de realizar
experimentacin con clulas de origen humano.
3.1. Aislamiento de clulas: pasos
a)Reducir el tejido a una suspensin de clulas
libres. Esto se consigue utilizando medios
qumicos que provocan la disgregacin de las
clulas.. (Por ej. Tripsina)
b)Aislamiento de cada tipo de ellas, lo que puede
hacerse separando las clulas ms grandes o
las ms densas...o mediante citmetro.
c) Actualmente se cuenta con aparatos que
realizan una separacin automtica muy precisa
y rpida, son los llamados clasificadores
celulares activados por fluorescencia, o
citmetros.
 Citmetro
Separa clulas previamente disgregadas, algunas de las cuales
se han marcado especficamente con fluorescencia. Las clulas
estn contenidas en un medio lquido, en muy baja
concentracin, y pasan por el aparato dentro de pequeas
gotitas, cada una de las cuales contiene slo una clula, o
ninguna. Por medio de un rayo lser, el citmetro detecta la
presencia o no de fluorescencia, proporcionando una carga
elctrica distinta segn el caso, lo que permite la clasificacin
final de las clulas.
Los citmetros permiten tambin realizar el recuento de las
clulas mientras se realiza la separacin. Esta tcnica es llamada
citometra de flujo, y se la utiliza en investigacin y en anlisis
para el diagnstico mdico oncolgico o inmunolgico. Una vez
aisladas las diferentes poblaciones de clulas, pueden utilizarse
directamente para anlisis bioqumico, o bien destinarse al cultivo
celular in vitro.
 3.2. Cultivo de clulas
Los cultivos se realizan dentro de recipientes de vidrio o plstico
(generalmente cpsulas de Petri o botellas).
Los materiales a ser cultivados (clulas de uno o ms tipos, tejidos,
o bien rganos o trozos de rganos) deben extraerse y mantenerse
en soluciones similares a los lquidos tisulares, en condiciones
estriles para evitar el crecimiento de bacterias u hongos.
Las clulas aisladas pueden cultivarse en suspensin, flotando en
el medio, o bien adheridas a una superficie de vidrio o plstico.
Sobre este sustrato las clulas crecen formando una capa nica o
monocapa.
Los cultivos celulares pueden observarse en cualquier momento en
que sea necesario, utilizando contraste de fases en "microscopios
invertidos". Estos son aparatos adaptados especialmente para la
visualizacin de materiales de considerable grosor; para ello los
objetivos estn situados debajo de la platina y la iluminacin se
realiza desde arriba de la misma.
 4. Localizacin de molculas
biolgicas por medio de istopos
radioactivos o anticuerpos
marcados.

4.1. Autorradiografa
4.2. Inmunocitoqumica
 4.1. Autorradiografa
Consiste en incubar las clulas en
presencia de determinados istopos
radiactivos que podrn ser incorporados a
determinadas molculas.
Estos radioistopos son instables y emiten
radiaciones ionizantes que se pueden
registrar con aparatos, como el de Geiger,
o bien mediante su impresin en una
pelcula fotogrfica.
 4.2. Inmunocitoqumica
La especificidad de la unin
antgeno-anticuerpo puede
aprovecharse para poner en
evidencia, especficamente, una
molcula determinada, en una
clula o tejido. As puede saberse
el tipo de actividad de esa clula,
o distinguirla de otras. Para ello
se utilizan anticuerpos marcados
que se unen especficamente a
determinadas molculas de dicha
clula, las que son reconocidas
como antgenos.