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Registrador
Solventes
(fase móvil)
Bomba(s)
COLUMNA
Detector
(UV)
Mezclador
Inyector
Colector de
MUESTRA fracciones
FASE ESTACIONARIA
CROMATOGRAFÍA
α= [moléculas adsorbidas]
[mol. adsorbidas] + [mol. desorbidas]
coeficiente de reparto
METODOLOGÍA ANALÍTICA EN EL ANÁLISIS DE TRAZAS
TENDENCIA EN COSTE
LIMITES DE DETECCIÓN, ppm (Aprox.)
BIOENSAYO, GRAVIMETRÍA
>1
TENDENCIA EN SELECTIVIDAD
COLORIMETRÍA, ESPECTROFOTOMETRÍA
0.1
GC-MS Y HPLC-MS
<0.0001
AÑO (Aprox.)
Alimentos: Directiva 90/642 CEE Aguas: Normativa Europea
de Aguas de Consumo
76/464/EEC
Tomate Pimiento Pepino
Abamectine 0.01 0.01 0.01
Benomyl 0.50 0.10 0.50
0.1 mg/l plaguicidas individuales
Cyromazin 0.50 2.00 0.10 0.5 mg/l plaguicidas totales
Dimetomorf 0.50 0.02 0.50
Ethiofencarb 2.00 2.00 2.00
Flufenoxuron 0.50 0.50 0.20 Lista negra de plaguicidas prioritarios
Hexaflumuron 0.05 0.50 0.05
Hexitiazox 0.05 0.50 0.10 Aldrin Disulfoton Monolinuron
Imidacloprid 0.10 0.50 0.10 Atracina Endosulfan Ometoato
Lufenuron 0.02 0.02 0.02 Azinfos-etil Endrin Oxidemeton-metil
Methomyl 1.00 1.00 0.02 Azinfos-metil Fenitrorion Paration-etil
Oxamyl 2.00 2.00 2.00 Clordane Fention Paration-metil
Teflubenzuron 0.50 0.50 0.20 Coumafos Hepatclor Foxim
Tiabendazole 0.10 1.00 1.00 2,4-D Hexaclorobenceno Propanil
Acrinathrin 0.10 0.20 0.02 DDT Linuron Pirazon
Bifenthrin 0.20 0.20 0.01 Demeton Malation Simazina
Buprofecin 0.50 0.50 0.20 Diclorprop MCPA 2,4,5-T
Chlorpyriphos-me 0.50 0.50 0.05 Diclorvos Mecoprop Triazofos
Endosulfan 1.00 1.00 1.00 Dieldrin Metamidofos Triclorfon
Malathion 3.00 3.00 3.00 Dimetoato Mevimfos Trifluralin
Methalaxyl 0.20 0.05 0.05
Methamidophos 0.50 0.01 1.00
CONFIRMACIÓN DE RESULTADOS
• Mayor coste
• Mayor tiempo de análisis
TIPOS DE CROMATOGRAFÍAS
Fase Móvil
- Gaseosa (Cromatografía de gases)
- Líquida (Cromatografía Líquida)
Fase Estacionaria
- Líquida (inmovilizada, soporte)
- Sólida
TIPOS DE CROMATOGRAFÍAS
CRITERIOS DE SEPARACIÓN:
1.SOLUBILIDAD
Fase “Normal”: F. Estacionaria polar, F. Móvil apolar
1. INTERCAMBIO IÓNICO
Fase estacionaria positiva: Intercambio aniónico
Fase estacionaria negativa: Intercambio catiónico
2. INTERACCIÓN HIDROFÓBICA
Fase estacionaria hidrofóbica
4. ADSORCIÓN INESPECÍFICA
hidroxiapatita, colorantes inmovilizados
TIPOS DE CROMATOGRAFíA
Tipo de Tipo de cromatografía
interacción/reparto
Reparto Solubilidad •Fase Normal
•Fase Reversa
Tamaño •Exclusión Molecular
FASE
ESTACIONARIA
Clasificaciones de cromatografía
a. columna
b. batch
a. Gravedad
Permite trabajar con flujos altos para lo que se requiere aplicar presión
Dos tipos
+
carga aniónico aniónico
débil fuerte
(DEAE) (QAE)
pH
catiónico catiónico
fuerte débil
(SP) (CM)
-
Condiciones iniciales Aplicación de la muestra
- -
+ + - -
+ + + - + + + -
+ +
- - + + + - + + + -
- - - -
- -
-
+ -
+ + + -
+
- + + + -
- -
-
- -
+ + - -
+ + + - + + + -
+ +
- - + + + - + + + -
- - - -
- -
-
+ -
+ + + -
+
- + + + -
- -
-
- -
+ - -
+ + + - +
+ + + - +
- - + + + - +
- - - + + + -
- -
-
Aumento en la concentración de sales Elución de la proteína de interés
- - - -
+ + + +
+ + + - + + + - + + + - + + + -
- - -
- - - -
- -
+ - +
+ + + + + + -
- -
- -
- - -
+ + + +
+ + - + ++ + - + + + - + + + -
- - -
- - - -
- -
+ +
+ + + - + + + -
- -
- -
- - -
-
+ +
+ + + - + + + + - +
+ + + -
- + + + - - -
- - - -
-
Cromatografía de afinidad
Enzima-sustrato
Anticuerpo-antígeno
Enzima-coenzima
Proteína-ligando específico
Salting out
El soporte está sustituído por alifáticas pero más largas (8 -18 carbonos) y
la densidad de sustituyentes es mayor
Desnaturaliza proteínas
Se utiliza en HPLC
Gel filtración (cromatografía de exclusión molecular)
No es una cromatografía
Múltiples aplicaciones:
Cambios de buffer
y y