UNIVERSIDAD DE CUENCA

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

ESCUELA DE TECNOLOGIA MÉDICA
LABORATORIO CLINICO

INMUNOHISTOQUIMICA

Dr. Alfredo Campoverde

 Tinciones

Relaciones Electrostaticas

Enlaces coordinados, mordientes y quelantes

 Una sustancia mordiente es, en general, aquella que sirve para unir un colorante a un
sustrato. Reactivo que aumenta la reactividad del tejido estableciendo una interacción tejido-
colorante. Reactivos mordientes. Son los reactivos o sustancias que preparan al tejido para la
coloración.
 Un enlace covalente coordinado o dativo se forma cuando dos átomos
están enlazados entre sí (comparten un par de electrones), pero sólo
uno de estos átomos es el que aporta el par de electrones enlazantes.
Este tipo de enlace se presenta cuando un átomo no metálico comparte
un par de electrones con otros átomos.

Los complejos de tipo quelato son

bastante comunes en las interacciones
entre iones metálicos y colorantes. Los
cationes más frecuentemente usados en
las tinciones histológicas son los de
aluminio, hierro y cromo.
 Enlaces covalentes
Algunos colorantes tienen grupos auxocromos de tipo
reactivo capaces de formar enlaces covalentes con
grupos hidroxilo o amino del sustrato, se usaran para
el marcado de macromoléculas que se usarán en
inmunohistoquímica o hibridación in situ. La
fluoresceína, uno de los marcadores fluorescentes
más utilizados para marcar proteínas.
Otros mecanismos fisicoquímicos

 Puentes de hidrógeno
 Interacciones hidrófobas en la disolución
diferencial
Coloraciones de lípidos

Los colorantes se suelen disolver

en disolventes orgánicos
moderadamente polares (p. ej.,
etanol al 70%).

El Sudán negro y otros colorantes hidrófobos para teñir lípidos

presentan una mayor capacidad de disolución en las grasas
que en el disolvente moderadamente polar en el que se
preparan.
 El colorante forma
agregados metálicos
insolubles
Impregnaciones

que quedan
creada en el
retenidos en el
proceso de la
tejido gracias a la
fijación.
malla molecular
 Metacromasia

depende no solo del colorante

Los iones del colorante unidos
sino también de las
al sustrato cambian la longitud
propiedades de las estructuras Los sustratos que se tiñen de
de onda de absorción de luz y,
celulares que tiñe. (El azul de modo metacromático se llaman
por tanto, el color observado
metileno tiñen las células cromotrópicos.
del objeto teñido es distinto al
cebadas del tejido conjuntivo
del colorante libre.
de color púrpura.)

Los colorantes metacromáticos Algunas requieren un tipo de

son catiónicos y tienen fijación especial (los fijadores
afinidad por estructuras alcohólicos la favorecen). La
ácidas, especialmente las metacromasia es incompatible
sulfatadas. con los fijadores oxidantes.
 Nomenclatura de los colorantes

 La Society of Dyers and Colourists

(Reino Unido) publica desde hace
años un catálogo oficial con una
nomenclatura estandarizada de
colorantes y otros compuestos
coloreados útiles.
 TIPOS DE COLORANTES
SEGÚN EL GRUPO AUXOCROMO

• Presentes en el azul de metileno o en la fucsina básica, estos colorantes tienen tendencia a unirse a las
estructuras ácidas, los grupos auxocromos básicos son aminas. Carga positiva tiñen núcleos y carbohidratos
Básicos o ácidos.
catiónicos

• Carga neta negativa, grupos sulfónicos o carboxílicos o en hidroxilos de los fenoles. Eosina, fucsina ácida. Se
Ácidos o usan para teñir citoplasma y colágeno.
amónicos

• Colorantes hidrófobos para teñir lípidos o algunos colorantes coordinados con mordiente, sales compuestas
entre un colorante aniónico y otro catiónico, como el que se forma entre el colorante azur como catión y la
Colorantes eosina como anión.
sin carga • Este compuesto se utiliza disuelto en alcohol en la tinción de Romanovski, y en la coloración de Giemsa.
SEGÚN LA ESTRUCTURA QUÍMICA Y EL
GRUPO CROMÓFORO

Cromóforos: Son todos aquellos compuestos que tienen electrones

resonando a determinada frecuencia y por eso absorben y luz al
unirse refuerzan la absorción de radiación.
 COLORANTES NITRADOS O NITROSADOS
Son nitro- (-N02) o nitrosoderivados (-N=0)
de anillos aromáticos como el benceno.
Uno de los más utilizados es el ácido
pícrico de color amarillo que se usa
también como fijador, soluble en agua,
alcohol y otros hidrocarburos aromáticos.

 COLORANTES AZOICOS
 Se llama colorante a la sustancia capaz de absorber determinadas
longitudes de onda de espectro visible. Los colorantes son sustancias que
se fijan en otras sustancias y las dotan de color de manera estable ante
factores físicos/químicos como por ejemplo: la luz, lavados, agentes
oxidantes, etc.
 Contienen el cromóforo -N=N- uniendo anillos adyacentes derivados del
benceno o del naftaleno. Pueden ser monoazoicos (Orange G, ponceau
de xilidina), diazoicos (Sudán negro, rojo Congo) o, más raramente,
tetrazoicos (rojo sirio F3B). Pueden ser aniónicos o catiónicos, formar
complejos metálicos o tener carácter de lipocromo (se disuelve en
lípidos).
 Derivados de la antraquinona

La antraquinona o 9,10-dioxoantraceno es un
compuesto orgánico aromático, se obtienen a partir
de la oxidación del antra- ceno para constituir
anillos quinónicos. Rojo alizarina, reactivo
histoquímico para el calcio.

Las antraquinonas constituyen el grupo más

numeroso de las quinonas naturales y son la
base y fuente de una importante cantidad de
colorantes.

Las antraquinonas naturales se encuentran libre y al

estado de combinaciones glicosidicas. Pueden hallarse en
la corteza y la raíz de los diversos generos y especies de
las familias: Rubiáceas, Poligonáceas, Leguminosas y
Verbenáceas; en los líquenes, hongos y en los insectos
tintóreos de la familia de los Cóccidos.