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Bibliografia:
Genes VII - Benjamin Lewin
Biologia Molecular Básica-Arnaldo Zaha
Lenhinger Principles of Biochemistry (3a. Ed.)
Replicação
do DNA
O mecanismo de
replicação está
baseado no
pareamento das
bases da dupla
hélice do DNA.
A estrutura do
DNA contém a
informação
necessária para
perpetuar sua
sequência de
bases
A replicação do DNA é semi-conservativa
Cultivo em meio
15NH
Experimento realizado
4Cl
por Meselson & Stahl
em 1958
Cultivo em meio
14NH
4Cl
Purificação do DNA
seguida de
centrifugação em
gradiente de CsCl
A replicação é
bidirecional
A replicação do cromossomo circular
Replicon: Unidade do DNA onde está ocorrendo um
evento de replicação
Replicon:
1. Origem + Término
2. Ativados apenas uma única vez em cada ciclo
celular
3. O genoma de uma célula procariótica constitue um
único replicon
4. Cada cromossomo eucariótico constitue vários
replicons e todos são ativados uma única vez no
ciclo celular ainda que não simultaneamente
A replicação é vista como um “olho” flanqueado
por DNA não replicado
O genoma bacteriano circular constitue um único replicon
A velocidade da forquillha de
replicação bacteriana é
50000pb/min
Um única origem de replicação
em E.coli (OriC, 245 pb)
Origem de Replicação em bactérias: Somente origens
completamente metiladas podem iniciar a replicação
O genoma eucariótico constitue vários replicons
Fita descontínua
Polimerases de DNA:
As enzimas que
sintetizam DNA
A síntese de DNA
ocorre pela adição de
nucleotídeos a
extremidade 3´OH da
cadeia em crescimento. O
precursor da síntese é o
desoxiribonucleosídeo
5´trifosfato
Sentido da síntese
sempre é 5’ 3’
A replicação é um
processo extremamente
fiel. As DNA-
polimerases tem atividade
revisora
Desoxiribonucleosídeo
5´trifosfato
(precursor)
Fita sendo
polimerizada
Fita molde
As DNA-polimerases sempre requerem um iniciador
previamente pareado ao molde que será copiado
Pareamento de bases incorreto
correto
Atividade revisora 3’ 5’ garante a fidelidade da replicação
Modelo da estrutura das DNA-polimerases
Propriedades das DNA-polimerases Bacterianas
Velocidade de
Polimerização(nt/seg) 16-20 40 250-1000
Fita descontínua
Fita contínua
A proteína DNA B
(helicase) é responsável
pelo movimento para
frente da forquilha
Cada core catalítico
da DNA PolIII sintetiza
uma das fitas-filhas
O primossomo afasta
uma das fitas molde
Proteínas SSB
mantem as fitas
parentais separadas
Forquilha Forquilha
sentido sentido
antihorário horário
Terminação Terminação
Duplicação dos
cromossomos
Separação dos
cromossomos e
divisão celular