LA MANIPULACION DE LA

INFORMACION GENETICA
En las ultimas décadas, la capacidad de manipular el genoma de
organismos tanto procariontes como eucariontes alcanzo niveles
antes inimaginables

LA TECNOLOGIA DEL ADN

RECOMBINANTE
Al revelar los métodos mediante los cuales las células procesan,
añaden, eliminan y transfieren información genética.
Se desarrollaron técnicas de ingeniería genética que permitieron
analizar y manipular el ADN
 TECNICAS PARA MANIPULAR ADN
HERRAMIENTAS MOLECULARES CLONACION
ADN, ENZIMAS HIBRIDACION
VECTORES,HOSPEDADORES SECUENCIA DE ADN
PCR

Expresión de
genes

APLICACIONES EN BIOTECNOLOGÍA MODERNA

 Estudios de regulación genética y Expresión de

proteínas recombinada
 REINOS Animales y plantas transgénicos
LAS HERRAMIENTAS DEL OFICIO
UNA BATERIA DE ENZIMAS
Todos los organismos tienen enzimas que copian,
corrigen, cortan, degradan, pegan y modifican las
moléculas de ADN.
Las enzimas permiten realizar funciones esenciales, como
replicar, reparar y expresar la información genética
 Las Herramientas del oficio
Enzimas de restricción
• Son un tipo particular de endonucleasas, tienen como función proteger a
las bacterias del DNA extraño.
• La característica esencial de las enzimas de restricción es que escinden el DNA
solo en secuencias de nucleótidos específicas, secuencias de reconocimiento.
Enzimas que agregan nucleótidos: las polimerasas
• Son las herramientas que permiten sintetizar in vitro nuevas moléculas de DNA y
RNA, rellenar secuencias faltantes en el DNA de doble cadena o agregar
nucleótidos en el extremo de ácidos nucleicos.
La transcriptasa inversa
• Es una DNA polimerasa viral que depende del RNA, esta herramienta permite sintetizar
DNA de cadena doble usando como molde cualquier molécula de RNA obtenida de
una célula. Las moléculas de DNA sintetizadas por la transcriptasa inversa a partir de
una molécula de RNA se conoce como DNA complementario o c DNA.
Otras enzimas
• Las DNA ligasas como la obtenida de las bacterias infectadas por el fago T
ENZIMAS FUNCION
Desoxirribonucleasas Exonucleosas Catalizan la hidrolisis desde
uno de los extremos (5” o 3” )
hacia el centro de las
moléculas.

Distintas exonucleosas,
degradan ADN de simple o
doble cadena
Endonucleosas Catalizan la escisión de
uniones fosfodiester
ADN ligasas Catalizan la formación de uniones
fosfodiester en moleculas de ADN
de doble cadena.
Polinucleotido cinasas Catalizan la acción de un grupo
fosfato de un ATP al extremo 5” de
ADN o ARN
Fosfatasas alcalinas Catalizan la eliminación de un
grupo fosfato del extremo 5” de
ADN o ARN
Metilasas Catalizan el agregado de grupos
metilo a moléculas de ADN de
 ENZIMAS DE RESTRICCION

Existe un grupo de enzimas, las nucleasas,

especializadas en cortar las uniones
fosfodiester.
 Se denominan DNA-SAS Y RNA-SAS según
corten uniones entre nucleótidos entre
moléculas de ADN o ARN
 Las DNA-SAS se clasifican en exonucleosas y
endonucleosas
Un tipo particular de endonucleosas son
enzimas de restricción:
a. Escinden el ADN en secuencias de
nucleótidos específicos: 4 y 8 pares de bases.
b. Estas enzimas no producen cortes rectos en
ambas cadenas de la molécula de AND
 ENZIMAS QUE AGREGAN NUCLEOTIDOS:
LAS POLIMERASAS
ENZIMAS FUNCION

DNA polimerasa Cataliza la adición de desoxirribonucleotidos por los

general en dirección 5’ a 3’. Utiliza como molde una
cadena de ADN
LA TRANSCRIPTASA INVERSA
 Método para para obtener
fragmentos específicos de DNA se
basa en la utilización de retrovirus
que tienen RNA como material
genético.
 El RNA genómico actúa primero
como molde para la síntesis de la
cadena complementaria del DNA y
es catalizada por la transcriptasa
inversa; luego sintetiza una segunda
cadena, complementaria a la
primera cadena de DNA
 El resultado es una molécula de
DNA de cadena doble que se
inserta en el genoma de la célula
hospedadora, que se conoce como
DNA complementario o cDNA.
 OTRAS ENZIMAS
ENZIMA FUNCION
DNA ligasa Cataliza la formación de uniones fosfodiester en
moléculas de DNA de doble cadena.
 Para modificar DNA, nucleótidos,
moléculas de DNA: oligonucleótidos.

Materias primas
Sirven para
“amplificar una
Vector
secuencia de
DNA”
 LAS MATERIAS PRIMAS
Para modificar moléculas de DNA es
necesario:
1. Manipulación in vitro de material
genético: los oligonucleótidos sintéticos
estos genera hasta 50 nucleótidos
2. para amplificar una secuencia de DNA,
esta pueda insertarse en un vector
3. la secuencia de DNA de interés se
mantiene y se replica en las células
hospedadoras que reciben y procesan la
información genética introducida.
CELULAS: que se utilizan como
hospedadoras, Mas utilizada es la bacteria
E. coli, Bacillus subtlis, Saccharomyces
cerevisiae
Vectores para procariontes
VECTORES PARA EUCARIONTES

Los organismos eucariontes, como levaduras,

hongos, plantas o mamíferos o sus células en cultivo,
procesan material genético de una manera diferente
de las bacterias.

Pero las células eucariontes requieren otro tipo de

vectores que contengan las señales de origen de
replicación, regulación, selección y marcadores que
ellas puedan reconocer, se pueden utilizar los
plásmidos que aprovechan todas las ventajas de
organismos eucariontes y procariontes.
Para trabajar con plantas se utiliza los vectores que
provienen del virus del mosaico de tabaco o del
plásmido SHUTTLE y por ultimo, para trabajar con
células de mamíferos se utilizan los vectores
derivados del DNA viral.
Localización de fragmentos específicos de DNA

HIBRIDACION: localización de
fragmentos específicos de
DNA

Un fragmento de DNA o
de RNAm previamente
debe localizarse don
relativa facilidad con
técnicas como:

Hibridación de La transferencia Hibridación in

ácidos nucleicos de SOUTHERN situ
 1. Aprovecha las
propiedades de
apareamiento de las bases
de DNA y del RNA

2. Mediante el uso de esta propiedad

se pueden localizar secuencias de DNA
con sondas moleculares las cuales son
fragmentos cortos de cadena simple

3. Para localizar y aislar por ejemplo

entre varias colonias de bacterias a la
portadora de DNA, se puede realizar
una replica de las colonias.
 La reacción de la cadena polimerasa (PCR)

Es un método cuyo objetivo es: a partir de

una muestra de ADN, obtener millones de
copias idénticas, en pocas horas y sin
necesidad de usar células vivas.

Permite:
a. Detectar mutaciones asociadas con enfermedades
hereditarias y algunos tipos de cáncer
b. Monitorizar tratamientos asociados a estas enfermedades
c. Ayuda en la medicina forense.
 LA REACCIÓN
EN CADENA DE
LA POLIMERASA
AMPLIFICA EL
ADN IN VITRO

• PERMITE AMPLIFICAR Y
ANALIZAR MUESTRAS
MINÚSCULAS DE ADN DE
UNA DIVERSIDAD DE
FUENTES.

• ANALIZAR EL ADN
MITOCONDRIAL OBTENIDO
DE LOS HUESOS DEL
NEANDERTAL
Un ejemplo:
Los métodos de diagnostico inmunológicos basados en la detección de antígenos en
muestras provenientes de pacientes infectados, mediante el método de PCR, se podido
llegar al diagnostico temprano de estas infecciones provocadas por el VIH, papiloma
virus y Mycobacterium Tuberculosis

Por otra parte permite:

1. Obtener verdaderas huellas digitales moleculares que han abierto el camino ha estudios de
identidad y filiación en humanos y otras especies.
2. Mediante la técnica de PCR en tiempo real, se puede cuantificar con precisión la cantidad de
partida de la secuencia inicial, es útil en el seguimiento a respuestas de infecciones.
 LAS TÉCNICAS
Y LAS HERRAMIENTAS
EN ACCIÓN
Las bibliotecas genómicas
Para clonar una secuencia
determinada recurrimos a
una biblioteca genómica o
genoteca, que es una
colección de fragmentos de
ADN genómicos clonados en
vectores que totalizan el
genoma del organismo.
 Para construir estas bibliotecas:

1. El genoma se 2. El vector y los 3. Los fragmentos

corta en fragmentos plásmidos se tratan se unen a las
aislados mediante el con enzimas que los vectores por medios
uso de enzimas de cortan en un sitio de acción de ADN
restricción único, dejando sus ligasa, que sella las
adecuadas. extremos pegajosos. uniones.
El Resultado es una mezcla de vectores: algunos no habrán recibido ningún
fragmento de ADN y otros tendrán en fragmento inserto.

A continuación los vectores con su ADN son introducidos en bacterias para que
se repliquen.
 Vectores de expresión poseen
secuencias que dirigen la
transcripción y traducción del
gen que portan
EXPRESION DE

Esas secuencias incluyen

promotores y terminadores de la
transcripción, regiones de unión a
GENES

ribosomas para los mRNA

También incluyen un codón de

iniciación y de terminación.
Los genes que poseen intrones
solo pueden ser expresados en
células eucariontes capaces de
procesar el mRNA antes de su
traducción
La elección del hospedador es también
dada dependiendo del producto que se
quiere expresar. (Ciertos genes solo se
expresan en determinadas tipos de celulas)
Por ejemplo:
Algunos péptidos requieren la adición de
moléculas de hidrato de carbono para
activarse y esta función solo la llevan a cabo
células eucariontes.