CURVA DE CRECIMIENTO

BACTERIANO

J. Muñoz-Rojas
 Estrategias de recuento bacteriano

-Contando el No. UFC/ml en medios de cultivo por métodos clásicos

-Determinando la viabilidad por técnicas de microscopía

-Determinando el No. de bacterias no cultivables mediante PCR (16SrRNA)

ó FISH.
Contando el No. UFC/ml en medios de cultivo por métodos clásicos
Bacterias cultivables

Plateo de diluciones seriadas

Goteo de diluciones seriadas (drop plate)

No. mas probable

 Plateo de diluciones seriadas (1:10)

100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

[0] [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]

900 µl de solución buffer

100 µl de cada
dilución

Incubación
 Plateo de diluciones seriadas (1:10)

100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

[0] [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]

900 µl de solución buffer

[5] = 45 colonias

45 X 10 = No. de UFC/ml en la dilución 5

450 X 10 X 10 X 10 X 10 X 10 = No. UFC/ml de la suspensión original

 Goteo de diluciones seriadas (1:10)

100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

[0] [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]

900 µl de solución buffer

20 µl de cada
dilución por triplicado

[2]
[3] [2] [7]
Incubación [3]

[4]
[6]
[6]
[5] [4]
[5]
 Goteo de diluciones seriadas (1:10)

[6] 3, 4, 5

[3] [2] (3+4+5)/3 = 4 (No. promedio)

4 X 5 = 20 (No. bacterias en 100 µl)

[4]
[6] 20 X 10 = 200 (No. bacterias/ml en dil. 6)
[5]
200 X 100 X 100 X 100 = 2X108 UFC/ml de la
suspensión original.
 No. mas probable (1:10)

100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

[0] [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]

900 µl de solución buffer

100 µl de cada
dilución

Incubación

+
 No. mas probable (1:10)

100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl 100 µl

[0] [1] [2] [3] [4] [5] [6] [7]

3 3 3 3 2 1 0

[4] 321 Buscar en tablas de McCrady

Biol. Laura Abisai Pazos Rojas
 Síntesis de constituyentes
Anabólicas
celulares y metabolitos
Proceso complejo que
involucra reacciones
Desglose de
Catabólicas
constituyentes celulares
y metabolitos

Maier, Pepper, Gerba. 2000. “Enviromental Microbiology”. Academic Press. Pp 43-59

Aumento en el número de células microbianas de una población; puede medirse

como un incremento de la masa celular

Madigan, Martinko and Parker.2004. Brock Biología de los Microorganismos. PEARSON Prentince Hall. Pp 142-147
 Condiciones
Superficies
de
terrestres
laboratorio

División rápida (10 minutos) Crecimiento lento (100 años)

Limitación de Ambientes
nutrientes Heterogéneos
Las células pueden ser
aisladas pero no comparten
nutrientes o mecanismos

Estado metabólico no
permite el crecimiento
Estudio del crecimiento
Batch Culture (Cultivo
discontinuo)

El crecimiento de un organismo o
Cantidad fija
consorcio (grupo de microorganismos) es
de sustrato
evaluado usando un medio definido

Cultivo continuo

Flujo constante entre el medio y el

sustrato

Cantidad de sustrato
disponible constante
Tipo de suelo, microambientes, propiedades físicas y químicas, limitación de nutrientes,
consorcios de microorganismos, competencia
 Generación: Formación de
2 células a partir de 1
Tiempo de Generación:
Tiempo transcurrido o
requerido para que la
población se duplique. Velocidad de Crecimiento:
“Tiempo de duplicación” cambio en el número de células o
Medio de cultivo en la masa celular experimentado
Condiciones de Crecimiento por unidad de Tiempo
 Primera fase Se propone que se debe a la adaptación
observada fisiológica de las células a las condiciones del
cultivo

El crecimiento inicia después

de un periodo de tiempo. Puede implicar:
Puede durar de minutos a Inducción de mensajeros específicos RNA
varias horas (mRNA)
Síntesis de proteínas para adaptarse
División celular
 Ocurre:

1) Un nutriente esencial del medio se usa y llega a

ser un factor limitante del crecimiento

2) Se acumulan en el medio algunos productos de deshecho hasta

niveles inhibitorios que hacen que cese el crecimiento exponencial
Cuatro Factores:

pH
Temperatura

Disponibilidad de Agua Oxígeno

Temperaturas Cardinales:

Crecimiento mas
rápido

Por encima de
Por debajo de esta no es posible
esta no es posible el crecimiento
el crecimiento
 altas
temperaturas
temperaturas óptimas muy
óptimas
elevadas

temperaturas
óptimas
moderadas

temperaturas
óptimas bajas
 Psicrófilo
s
Se encuentran en ambientes
Organismo que tiene:
permanentemente fríos
Temperatura óptima: 150C
Regiones polares
Temperatura máxima: debajo de 200C
Mueren rápidamente si se
Temperatura mínima: 00C
exponen a temperatura ambiente

Psicotolerantes
Amplia distribución:
Organismos que crecen a 00C pero
Suelos, Aguas de climas
tienen temperaturas óptimas de
templados, carne, leche, sidra,
20-400C
vegetales, fruta en refrigeración
 No causa la muerte celular, evita
el crecimiento microbiano

Proceso no homogéneo
Líquidos solubles en
agua:
Glicerol
Dimetilsulfóxido
A bajas temperaturas existen (DMSO)
depósitos microscópicos de agua
no congelada

Concentración 10%
Penetran en las células protegiendo
los efectos de la deshidratación,
evitan la formación de cristales de
hielo
Crecimiento Rápido
 Thermus aquaticus

Taq Polimerasa

PCR (Polymerase Chain

Reaction)
 Acidez y alcalinidad Cada microorganismo tiene un rango de pH
dentro del que se puede desarrollar.

pH óptimo de desarrollo
Acidófilos: microorganismos que viven a
suele ser un valor muy
valores de pH por debajo de 2.
bien definido para cada
En general los hongos tienden a tolerar valores
microorganismo.
de pH más ácidos que las eubacterias.

Alcalófilos: microorganismos que viven a

valores de pH superiores a 10.

Neutrófilos: microorganismos que viven a

valores de pH cercano a la neutralidad (pH 6.0 a
8.0).

INDEPENDIENTE DEL pH DEL AMBIENTE, EL INTERIOR DE LA CÉLULA DEBE ESTAR

CERCANO A UN VALOR 7.
AEROBIOS. Microorganismos que viven en ambientes con tensiones
normales de oxígeno (21 % de O2).

MICROARÓFILOS. Microorganismos que viven en presencia de

niveles de oxígeno que están bajo la concentración presente en el aire
(<21 %).

ANAEROBIOS FACULTATIVOS. Microorganismos que pueden vivir

en ausencia de oxígeno o en su presencia.

ANAEROBIOS. Microorganismos incapaces de crecer en presencia de

O2.
 Crecimiento de aerobios, anaerobios facultativos, microaerófilos, y
anaerobios aerotolerantes

Medio de cultivo semisólido con tioglicolato (evita transporte de O), colorante redox
(resazurina, rosa al oxidarse)
El oxígeno penetra a una
corta distancia del tubo,
los aerobios estrictos
crecen solo en la
superficie

Los anaerobios crecen en la parte

inferior (ausencia de Oxígeno)
Microorganismos aerobios
facultativos crecen tanto en
presencia como en ausencia
de Oxígeno

Microerófilos crecen
apartándose de la zona mas
óxica
Microorganismos anaerobios
aerotolerantes (poco crecimiento
en la superficie)
 Generación: Formación de
2 células a partir de 1
Tiempo de Generación:
Tiempo transcurrido o
requerido para que la
población se duplique. Velocidad de Crecimiento:
“Tiempo de duplicación” cambio en el número de células o
Medio de cultivo en la masa celular experimentado
Condiciones de Crecimiento por unidad de Tiempo
 Predicción del número de células en la
fase exponencial

No Células final (x) = 2nX0

n= NÚMERO DE GENERACIONES

n= tiempo de crecimiento/t de generación

 Como calcular t de generación

dX/dt = µX

X= Crecimiento total
µ= Tasa de crecimiento específico

dX/X = µdt

Integrando:

∫dX/X = ∫ µdt
∫dX/X = ∫ µdt

InX – In X0 = µt
∫dX/X = ∫ µdt

InX – In X0 = µt
∫dX/X = ∫ µdt

InX – In X0 = µt

Reareglando

In (X/ X0) = µt

(X/ X0) = eµt

 (X/ X0) = eµt

Si consideramos que durante una

duplicación X=2X0
Entonces:

(2X0/ X0) = eµt

2= eµt
Tiempo No. UFC/ml
0 22000
1.2 22000
2.2 22000
3.2 22000
4.2 150000
5.2 15000000
6.2 81000000
7.2 320000000
8.2 550000000
9.2 800000000
10.2 1000000000
11.2 1700000000
12.2 2100000000
13.2 2300000000
17.2 2500000000
32.2 6300000000
60.2 3800000000
84.2 1900000000
 2D Graph 7

7e+9

6e+9

5e+9

4e+9
Y Data

3e+9

2e+9

1e+9

0 20 40 60 80 100

X Data
Col 1 vs Col 2
 LOG
0 22000 2.20E+04 4.34E+00
1.2 22000 2.20E+04 4.34E+00
2.2 22000 2.20E+04 4.34E+00
3.2 22000 2.20E+04 4.34E+00
4.2 150000 1.50E+05 5.18E+00
5.2 15000000 1.50E+07 7.18E+00
6.2 81000000 8.10E+07 7.91E+00
7.2 320000000 3.20E+08 8.51E+00
8.2 550000000 5.50E+08 8.74E+00
9.2 800000000 8.00E+08 8.90E+00
10.2 1000000000 1.00E+09 9.00E+00
11.2 1700000000 1.70E+09 9.23E+00
12.2 2100000000 2.10E+09 9.32E+00
13.2 2300000000 2.30E+09 9.36E+00
17.2 2500000000 2.50E+09 9.40E+00
32.2 6300000000 6.30E+09 9.80E+00
60.2 3800000000 3.80E+09 9.58E+00
84.2 1900000000 1.90E+09 9.28E+00
 2D Graph 8

11

10

8
Y Data

4
0 20 40 60 80 100

X Data
Col 1 vs Col 2
 2D Graph 3

10

8
Y Data

4
2 4 6 8 10 12 14

X Data
Col 1 vs Col 2
 2D Graph 3

10

8
Y Data

4
2 4 6 8 10 12 14

X Data
Col 1 vs Col 2
 2D Graph 5

10

8
Y Data

4
4 5 6 7 8 9

X Data
Col 1 vs Col 2
x column vs y column
Parameter Value StdErr CV(%) Dependencies
y0 2.258e+0 1.200e+0 5.315e+1 0.9505440
a 8.458e-1 1.887e-1 2.231e+1 0.9505440

Y=y0 + aX

Y= Log No UFC/ml
X= Tiempo de crecimiento

Y= 2.258 + 0.8458 X
 Para X= 4.2 horas
Y= 5.8098
X0=6.45X105 UFC/ml

Para X= 8.2 horas

Y= 9.1930
Xf=1.55X109 UFC/ml

Y= 2.258 + 0.8458 X
 InX – In X0 = µt

Entonces:

In 1.55X109 – In 6.45X105 = µ (8.2-4.2)

Por tanto:

µ = 1.9461
µ = 1.9461 2= eµt

In2 = µt

Así:

t = In2/µ

t = 0.3561
n= tiempo de crecimiento/t de generación

n = 4 h / 0.3561 h

n = 11.23