PROCESOS DE LA SALUD

Profesor: Jesús Alarcón Bonilla

3er PARCIAL
5QBT2
Fecha: 6 de abril del 2018

Integrantes:
• Alvarado Rosario Jocelyn Estefany
• Dionicio Espejo Claudia Deyanira
• Fernández Huitrón José Alejandro
• Guerrero Rosas Alonso del Angel
• Guzmán Mota María Guadalupe
• Linares Soledad Daniela Lilian
VACUNA BCG
• La vacuna BCG (Bacilo de Calmette-Guérin); actualmente es utilizada en la prevención de la tuberculosis
• El bacilo fue obtenido de Mycobacterium bovis (de una ternera con mastitis en 1902)
• Es una preparación de bacterias vivas atenuadas derivadas de un cultivo de bacilos de Calmette y Guérin (Mycobacterium bovis)
• El 21 de Junio de 1921, la vacuna BCG fue utilizada por primera vez en humanos
• En 1924 fue demostrada la seguridad de la vacuna
TUBERCULOSIS
Es una infección bacteriana causada por Mycobacterium tuberculosis. La
bacteria suele atacar los pulmones, pero puede también dañar otras partes
del cuerpo. La TB se disemina a través del aire, cuando una persona con
TB pulmonar tose, estornuda o habla.
La BCG se administra estrictamente por vía intradérmica en la cara externa
superior del brazo y en la cara externa del muslo.
PRUEBAS DE CALIDAD
• MATERIALES Y MÉTODOS
El presente estudio es de tipo observacional para los ensayos de esterilidad, viabilidad, termoestabilidad, identidad y
experimental para el ensayo de reactividad cutánea en cobayos. Fueron evaluadas 45 ampollas de la Vacuna BCG
viva liofilizada del 2005 y 25 del 2006, seleccionadas por métodos no probabilísticas, ingresada al Centro Nacional de
Control de Calidad (INS) para su análisis provenientes del Ministerio de Salud del Perú durante el 2005 y 2006. En la
vacuna del 2005 se evaluó la identidad, viabilidad, estabilidad térmica, esterilidad y reactividad cutánea, mientras que
en la del 2006 se evaluó la identidad, viabilidad y esterilidad.
PRUEBAS DE CALIDAD
• Ensayo de identidad
Se realizó según las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud (1). Se sembró 0,1mL de la vacuna
directamente sin diluir y de la vacuna diluida 1/50 y 1/200 con solución salina fisiológica en tubos de vidrio con tapa
de baquelita con medio Lowesntein Jensen, y se incubó por 21 días en una estufa calibrada de 35-37°C ubicada en
un ambiente de temperatura y humedad relativa controlado. Al término de la incubación se realizó la coloración Ziehl
Nielsen. Deben observarse colonias de morfología típica de Myobacterium bovis en medio sólido y bacilos alargados
color rojizo con coloración ácido resistente o Ziehl-Nielsen.
PRUEBAS DE CALIDAD
• Ensayo de viabilidad
Se realizó por el método de determinación del número de partículas cultivables en medio
sólido.
Se observó el desarrollo de los microorganismos viables de la vacua BCG en cuatro medios de
cultivos: Lowesntein Jensen comercial y preparado por componente, Ogawa y Stondrick.
PRUEBAS DE CALIDAD
• Ensayo de Termoestabilidad
En el caso del ensayo de termoestabilidad tomando como referencia el documento de la OMS (5); se mantuvieron
28 días grupos de 03 vacunas a diferentes intervalos de temperatura: -10 a -12°C, 04-06°C, 20-25°C y 35-37°C,
al término del cual se realizó el ensayo de viabilidad (5-7, 11,12).
PRUEBAS DE CALIDAD
• Ensayo de esterilidad
Se verificó que no existen diferencias significativas en el procedimiento de las Farmacopeas Americana, Europea,
Británica y en la OMS.
Se emplearon medios de cultivo validados mediante la prueba de promoción de crecimiento
PRUEBAS DE CALIDAD
• Ensayo de Reactividad Cutánea
• En la prueba de reactividad cutánea (1-3,6,7) se emplearon 4 cobayos machos con peso corporal entre 250 a 350g,
depilados en la zona dorsal, los cuales fueron inoculados vía intradérmica con 0,1mL de la vacuna sin diluir, de la
vacuna diluida 1:10 y de la vacuna diluida 1:100. No fue posible comparar con una preparación de la vacuna BCG
de referencia internacional. Además se contó con 02 cobayos no inoculados, como controles.
• Los animales fueron observados y pesados semanalmente, durante 04 semanas, en los casos en que no se
observaron reacciones cutáneas directamente proporcionales a la dosis (1-3,6,7), la observación se prolongó
durante cuatro semanas más. Al término de los ensayos los animales fueron sacrificados para realizar una
evaluación macroscópica de los órganos internos.
CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
• Vial con la cepa liofilizada de Clostridium chauvoei • Solución estéril de alumbre de Potasio

• Medio de cultivo para la semilla de trabajo • Solución de formaldehido al 37%

• Medio de cultivo para producción • Matraces Erlenmeyer de 200, 250, 500 y 1000 mL

• Solución estéril de dextrosa al 50% • Pipetas estériles de 1, 5, 10 mL

• Estufa a 37°C
• Solución estéril de L - cisteína al 7.5%
• Embudos Buchner
• Solución salina al 0.85% (estéril)
• Gasa-algodón-papel de envoltura-cordón o cáñamo
• Solución estéril de hidróxido de sodio 1N

• Solución estéril de hidróxido de sodio 10N

• Solución estéril de hidróxido de sodio 40N

CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
• Clostridium chauvoei
• Es un bacilo Gram positivo de 3 a 8 micras de longitud por 0.5 a 1.0 micras de ancho, sus
extremos son redondeados, puede aparecer aislado o en pares y ocasionalmente formando
cadenas cortas, es anaerobio, esporulado, con esporas alargadas, terminales o subterminales
más grandes que el bacilo, es móvil merced a flagelos peritrícos, puede ser rápidamente
reconocido por su pleomorfismo que no es muy común en los otros clostridia, su toxina es
causante del carbón sintomático, cepa con buena capacidad de producción de toxina.
CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
• Diagrama para la producción de vacuna de BCG

Obtención de la semilla de trabajo

Inoculación al medio de producción

Inactivación del cultivo

Clarificación

Adición de adyuvante

Envasado

Marbetado
CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
Obtención de la semilla de trabajo:
• Preparar botellas de 500 mL con 300 mL del medio anaeróbico.

• Adicionar a cada botella 6 mL de solución estéril de dextrosa al 50% y 2 mL de

solución estéril de L- cisteína al 7.5%.

• Ajustar el pH a 7.0 utilizando la solución estéril de hidróxido de sodio 10N.

• Inocular cada botella con 2.0 mL del cultivo del microorganismo que contiene
aproximadamente 1.35x109 col/mL.

• Incubar las botellas a 37°C durante 16 horas.

CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
Inoculación del medio de producción:
• Preparar botellas de 500 mL con 300 mL del medio de producción.

• Adicionar a cada botella 6 mL de solución estéril de dextrosa al 50% y 2 mL de solución estéril de L-

cisteína al 7.5%.

• Ajustar el pH a 7.0 con solución estéril de hidróxido de sodio 10N.

• Inocular cada botella con 60 mL de la semilla de trabajo.

• Incubar a 37°C durante 11 a 1 horas.

CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
El cultivo debe ser inactivado antes de que la esporulación se inicie, para lo cual
es necesario que:
• Mantener el pH a 7.0 ± 0.1 utilizando solución estéril de hidróxido de sodio 10N, este ajuste debe efectuarse cada 60 minutos las 5 primeras
horas y cada 30 minutos las restantes.
• En cuanto el cultivo no presente cambios de pH entre una determinación y otra, y la D.O se mantenga constante durante 30 minutos, los cultivos
deben inactivarse adicionando a cada botella 1.5 mL de formol al 37% (5 mL de formol por cada litro de cultivo).
• Los cultivos se dejan en reposo a temperatura ambiente durante 7 días.
• Los cultivos se consideran satisfactorios cuando no se presenta crecimiento y el formol residual es menor de 0.5%.
CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
Clarificación
El producto es pasado ahora a través
de un embudo Buchner preparado con
gasa y esterilizado. Esta etapa tiene
como finalidad remover los trozos de
carne del cultivo inactivado.
Adición de adyuvante:
Se adicionarán 100 mL de la solución
de alumbre de potasio por cada litro de
bacterina, así como 5 mL de la solución
de hidróxido de sodio al 40%, también
por cada litro de bacterina.
CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
Envasado:
Se efectúa en frascos de vidrio color
ámbar. La capacidad del envase
dependerá del número de dosis que se
desee envasar. Una dosis corresponde
a 5 mL de cultivo total bacteriano.
Marbetado:
Una vez que el producto ha pasado
las pruebas de calidad, se procede
a etiquetarlo, asegurándose de
que la etiqueta sea clara y
contenga todas las
recomendaciones del producto
CONDICIONES DE BIOCONVERSIÓN
La etiqueta debe llevar los siguientes datos:
• Nombre del producto

• Nombre y dirección del laboratorio productor

• Fecha de caducidad (para este producto son 18 meses a partir de la fecha de elaboración)

• Número de dosis

• Volumen por dosis

• Número de lote

• Recomendaciones varias: agítese antes de usarse, manténgase en refrigeración a 4°C

• NOTA: De cada lote de producto deben guardarse muestras de retención para fines de
referencia.
APLICACIONES
• El efecto de las vacunas BCG en la transmisión de M. tuberculosis es, por consiguiente, limitado.
• La vacuna BCG protege a los niños contra las formas meníngea y diseminada de la tuberculosis,
protege a los lactantes y niños contra la meningitis tuberculosa.
• Se ha comprobado la eficacia de la vacuna BCG en el control de la lepra y proteja también contra la
úlcera de Buruli, el uso del BCG en el tratamiento del cáncer de vejiga.