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Aproximadamente 2 millones de
personas están expuestas a la
malaria con un estimado de 250
millones de casos clínicos y
alrededor de 800.000 muertes al
año
Cuatro especies de Plasmodium
se sabe que causan la malaria
en humanos: P. falciparum, P.
vivax, P. malariae y P. ovale.
Las presentaciones clínicas
de la malaria son a
menudo inespecíficas y, en
consecuencia muchas
enfermedades febriles de
etiología desconocida se
uchas regiones endémicas atribuyen a la malaria (que
con malaria tienen informe de resulta en el diagnóstico
infecciones mixtas de estas presuntivo y tratamiento)
especies y la prevalencia de
infecciones mixtas varía según
la región geográfica.
Los instrumentos existentes Desde hace más de un siglo,
para el diagnóstico de la la microscopía se ha
malaria incluyen microscopía, mantenido como el estándar
pruebas de diagnóstico para la detección de la
rápido (PDR) y herramientas malaria y la determinación
moleculares de especies en áreas
endémicas.
Y no prueba de sensibilidad
de la prueba para P. vivax y
P. malariae.
Además de los tradicionales
herramientas moleculares
basados en PCR y PCR en
tiempo real han demostrado
Sin embargo, varios factores
recientemente ser una
impiden el uso de este
alternativa sólida para el
método en las regiones
diagnóstico de la malaria.
endémicas de malaria,
incluido el costo, la falta de
infraestructura y falta de
apoyo técnico debido a
problemas de
infraestructura.
Los tres métodos descritos
anteriormente basadas en la PCR étodos:
son buenas alternativas a la
microscopía y PDR. Anidada
Sin embargo, nadie ha evaluado
que estos métodos de PCR Semi-anidada
tradicional es mejor en la detección
de infecciones mixtas por Un sólo tubo múltiple
Plasmodium.
Por lo que se han comparado en
este artículo los dos métodos con
el método multiplex anidada
utilizando cantidades conocidas
del laboratorio de ADN derivados
Plasmodium solo y mixtos cócteles
que contienen las cuatro especies
de ADN.
#
$&
ADN extraído de :
Cultivos P. Falciparum
(3D7)
Derivados de monos P.
vivax (SV4)
P. malariae (Uganda)
P. ovale (Nigeria)
Para las cuatro especies: cl # total de glóbulos rojos
por micro litro se determino
Frotis delgados
para cada especie usando un
Tinciones DzCoulter counterdz
Conteo
7 repeticiones
Cocteles mixtos: 2µl de cada especie
en dif. concentraciones
Cocteles mixtos:
Bajos niveles de infección
Variaciones en niveles
Predominancia de
parásitos
Cantidad similar de
parásitos es rara.
#
u
1. Nested PCR
2. Semi-nested multiplex
3. One tube multiplex
&
Diferencia de
sensibilidad
¾ especies
enos especificidad
Al menos detecta 2
especies
simultáneamente
Detecta correctamente
P. falciparum en una
mezcla, pero no a
P. malariae y P. Vivax.
Confiabilidad: enos de 50% de las pruebas
realizadas.
Identificación de P. Ovale si la
concentración del DNA era
igual o mayor que 10 p/ul.
(
1 p/µl. De P. Ovale en mezclas usando: el semi-
nested PCR, y el multiplex PCR.
1ro: 22/42
2do: 7/42
A de las concentraciones esperadas para P. Vivax
9/42
Valoración : 7 replicaciones
º
Reactivos + plásticos
consumidos (muestra)