 Cultivo de los gametos de la planta:

microsporas u óvulos (células germinales).

 Estas son haploides (1 juego de
cromosomas).
 Las plantas regeneradas son haploides.
 Las plantas regeneradas esteriles.
 No pueden llevar a cabo la meiosis.
 El número de cromosomas necesitan ser
duplicado.
 Se usan inhibidores de la mitosis: colchicina,
fluoralina.
 Las plantas recuperadas son diploides y 100%
homocigotas.
 “Fija” los rasgos, disminuyendo el tiempo de
mejoramiento.
 La mayoría de variedades de Canola son
dobles haploides.
Técnica de micropropagación in vitro, que cultiva
anteras de cultivares elite para regenerar plantas
haploides y diploides (líneas homocigotas), sin
pasar por la endogamia artificial.

 Desarrollada por Guha y Maheshwari (1964), en

petunia, hoy se ha extendido a más de 150
especies: arroz, trigo, cebada, maiz, oleginosas,
tabaco, etc.
 Las células gametofiticas (microsporas o megasporas) originan
esporofitos haploides por androgenesis y ginogenesis,
respectivamente.
 Las anteras inmaduras, son cultivadas en un medio donde se
dividen para formar callo y posteriormente regenerar plantas
haploides.
 Los haploides duplicados producen progenie homogénea y
estable .
 Lineas completamente homocigotas son producidas en la
mitad del tiempo requerido por el proceso convencional (v.g.
arroz)
 Recombinant Inbred Lines (RILs)
 Fácil de evaluar en cualquier etapa del proceso
 Lento desarrollo del mejoramiento genético por

los bajos porcentajes de regeneración.

Limitaciones técnicas:
- Renuencia a la regeneración de plántulas.
- Bajos porcentajes de plantas haploides.
A. Genotipo de las plantas donantes
 Variabilidad en la respuesta al cultivo de anteras,
entre especies y dentro de ellas; y su
heredabilidad.
 Muy evidente en cultivares de ARROZ
 La capacidad genotípica de la cebada y trigo, son
rasgos heredados respecto a la formacion de
callos y regeneracion de plantulas
B. Ecofisiologia de las plantas donantes
El fotoperiodo
Intensidad luminosa
Temperatura
Nutrición mineral
En tabaco, trigo, cebada y arroz, los granos de
polen son morfológica y funcionalmente
diferenciados.
 C. Desarrollo del polen
.
• Mejor respuesta se tiene cuando se cultiva el
polen entre la fase de microspora tardía y de
polen temprano
D. Pretratamiento de las anteras
• Temperaturas bajas o altas, con choque
osmótico o con otros estimulos – AUMENTA LA
PRODUCCION DE PLANTAS A PARTIR DE POLEN
• Anteras o paniculas de arroz a 35oC/10 - 15 min. seguido de 8 dias a
10oC - AUMENTA LA RESPUESTA AL CULTIVO DE ANTERAS

• El tratamiento de frío se relaciona con una disminución del albinismo

de cereales y la estimulación de la mitosis ecuacional de las
microsporas androgenéticas
E. Medio de Cultivo

• Medio liquido: aumenta enormemente el porcentaje de plantas

androgenéticas
• Hay correlación entre el medio de inducción de callos y la tasa de
regeneración de plántulas de ARROZ
• Mayor porcentaje de regeneración/numero de anteras plaquedas,
hubo en callos inducidos en medio liquido y menos en medio
semisólido
• La adición de extracto de papa al medio de
inducción, aumenta la producción de plantas.

• Niveles altos de sacarosa para inducción de callos y

bajos niveles para la regeneración.

• Mayor concentración de auxinas para la inducción de

embriones y callos.
Protocolo
• Separación y siembra de anteras en medio de cultivo (ejm. medio
líquido N6 de Chu, 1978)
• Formación de callo y posteriormente embrioides (25°C en luz u
oscuridad)
• Plántulas haploides regeneradas se someten a luz continua (3000 lux)
• Vitroplántulas de 0.3 cm, se extraen y transfieren a un medio de
enraizamiento (12 h. de luz y 6000 lux)
 RESUMEN
 Se estudió el efecto de la exposición a 4 °C (durante 7, 14 y 21 días) y
diferentes concentraciones de fitohormonas sobre la regeneración
de plantas a partir de anteras de arroz (Oryza sativa L.), cv. Japónica
H2005
 Los resultados mostraron que el tratamiento a 4 °C por 7días
estimuló la inducción de callos. Las fitohormonas fueron esenciales
para esta inducción, lográndose el mayor efecto con una
combinación de 2,4-D (1.5 mg L-1) y KIN (1 mg L-1). Se obtuvo
también mayor formación de brotes y raíces con la misma auxina y
BAP (0.5 mg L-1)
 La transferencia a un medio de cultivo sin 2,4-D, permitió obtener
37.5% de conversión a plantas haploides
Figura 2. Regeneración in vitro de plantas de arroz cv
H2005 por cultivo de anteras.
A: Anteras
Figura 2. Regeneración in vitro de plantas a partir de anteras
de arroz cv Japónica H2005
B: Inducción de callos
Figura 2. Regeneración in vitro de plantas a partir de anteras
de arroz cv Japónica H2005
C: Formación de brotes
Figura 2. Regeneración in vitro de plantas a partir de anteras
de arroz cv Japónica H2005
D: Formación de raíces
Figura 2. Regeneración in vitro de plantas a partir de anteras
de arroz cv Japónica H2005
E: Regeneración de vitroplántulas
Figura 2. Regeneración in vitro de plantas a partir de anteras
de arroz cv Japónica H2005
E: Plántula haploide de arroz
 Util para aquellas especies de ciclo de crecimiento largo
o para aquellos cultivos de ciclo corto, que se
desarrollan a una tasa de un ciclo por año.
Ejm. La homocigosis del arroz se consigue en 1.5 a 2
años, lo que normalmente se hace en 3 o 6 años
 El cultivo de anteras en tabaco es el sistema mas
avanzado para obtener haploides diploidizados
 Progreso considerable con algunos cereales: trigo,
cebada y arroz.
 El potencial de las anteras depende de la genotipo de las
células madre del polen
 Permite seleccionar eficazmente los recombinantes
deseables; asi como, obtener lineas homocigotas
 Las lineas homocigotas regeneradas fijan su genotipo y no
sufren segregación adicional
 En los haploides duplicados no hay codominancia; i.e.,el
fenotipo = genotipo y aumenta la eficiencia de la selección
 AaBbCcDDEeFF -> AABBCCDDEEFF y aabbccddeeff
 El tiempo, el espacio y los costos son muy reducidos.
 Seguirá siendo el método potencialmente mas eficaz para
obtener plantas haploides
 Debe de tenerse en cuenta dos serias limitaciones:
 Fuerte dependencia genotipica
 Escaso número de plantas regeneradas
 Técnicas moleculares dan valiosa información sobre la genética
de caracteres relacionados con el cultivo de anteras
 Deberá ser accesible a otras especies cultivadas como: yuca y
maiz
 Embriogenesis de Microsporas
A partir de Microsporas

Re-programación del desarrollo de la microspora para lograr la

formacion directa de un embrion.
Finalidad
 Genera un gran numero de plantulas esporofiticas
dihaploides que son equivalentes a las lineas
homocigoticas derivadas de retrocruza.
 Acorta el ciclo de mejoramiento por 20-40% (un
doble haploida  F6 de retrocruza)
 Expone los rasgos recesivos.
 Permite un facil tamizado de grandes poblaciones.c
¿Como?
Seleccionar yemas florales con anteras conteniendo
predominantemente microsporas en un estadio temprano de
desarrollo.

Colapsar las anteras e aislar asepticamente las microsporas.

Realizar un Cultivo en suspension de microsporas a una alta

densidad poblacional bajo condiciones determinadas, y
usualmente con un tratamiento de ‘shock termico´.
Caso: Canola (Brassica napus).
Se regeneraron Plantas Dihaploides con un alto contenido acidos oleico y linoleico
reducido y acidos α-linolenico en el aceite de la semilla. Se probaron en el campo por la
estabilidad del perfil de acidos grasos y rasgos de rendimiento.
Microsporas uninucleadas en suspension
(Brassica napus)
Embriones en estadio temprano}
(7-10 dias)
Embriones estadio Medio
(10-14 dias)
Embriones estadio tardio
(21 days)
Embriones cotiledonarios en estadio tardio
“Germinacion”

Embriones
Cotiledonarios
transferidos a
condiciones de
crecimiento con luz
y AG3.
Crecimiento de plantulas haploides en cultivo
de medio semi-solid
Plantula bien-desarrollada haploide lista para
transferencia a suelo, o para duplicacion
cromosomica
Plantas Maduras
Dihaploides