Columna cromatográfica

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 Tipos de columnas

• Columnas empacadas

• Columnas capilares
• WCOT (wall coated open tubular)
• PLOT (porous layer open tubular)
• SCOT (support coated open tubular)
Columnas empacadas

Estas columnas están fabricadas de vidrio, acero inoxidable, cobre u

otros tubos adecuados. El acero inoxidable es el tubo más común
utilizado con diámetros internos de 1-4 mm. La columna está llena de
partículas finamente divididas que está recubierta con fase
estacionaria. Sin embargo, los tubos de vidrio también se usan para
separaciones a gran escala.

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Columna empacada

Columna empacada

Vidrio o acero inox.

Material sólido
Fase estacionaria
para soporte
(camada fina)

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 Partículas sólidas
empacadas dentro
de la columna

Packed
Capillary

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6
Columna capilar

Columna capilar
Resina de
poliamida
Tubo de Sílica Fase
fundida estacionaria

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8
Tipos de Columna Capilar
Film de polímero revestido Partículas sólidas porosas
en la pared interna de la revestidas en la pared
columna interna da columna

Wall Porous
Coated Layer
Open Open
Tubular Tubular

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Ventajas de columnas capilares comparadas con las
columnas empacadas
1. Resolución más alta
2. Cortos tiempos de análisis
3. Mayor sensibilidad

Desventajas de columnas capilares comparadas con

las columnas empacadas.
1. Capacidad de muestra pequeña
2. Necesita una mayor experiencia

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Fase Estacionaria
• Cromatografía Gas-Líquido (~90%)
• Polisiloxano

R= CH3 methyl
R R
CH2CH2CH2CN cyanopropyl
O Si O Si O
R R CH2CH2CF3 trifluoropropyl

phenyl

• Polietileno glicol
HO CH2 CH2 O H
n

• Cromatografía Gas-Sólido (~10%)

• Materiales sólidos absorbentes, por ej., partícula molecular, alumina, etc.
• Uso: hidrocarbonatos muy volátiles (ej. CH4), gases inorgánicos (ej. N2, CO2)
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Tipo de fase estacionaria
(dimetil polisiloxano)

CH3

Si O

CH3
100%

Nombre de la fase estacionaria： 100% Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Apolar
Propiedad de Separación ： Elusión en orden del punto de ebullición
Uso ： Petróleo, solventes, compuestos con alto punto
de ebullición
Rango de temperatura ： - 60℃ ～ 360℃ （430℃ posible)
Nombre comercial ： *** - 1

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 Tipo de fase estacionaria
(difenil metill）

CH3
Si O Si O

CH3

Nombre de la fase estacionaria ： 35 % Difenil - 65 % Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Polaridad media
Propiedad de Separación ： Compuestos aromáticos son retenidos en el grupo fenil
Uso ： Aromas, ambiental, compuestos aromáticos
Rango de temperatura ： - 60℃ ～ 340℃
Nombre comercial ： *** - 5, *** - 35, *** - 50, (*** - 17)

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 Tipo de fase estacionaria （Cianopropilfenil）

C N
(CH2)3 CH3
Si O Si O

CH3

Nombre de la Fase estacionaria ： 50 % Cianopropilfenil --50 %Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Polaridad media para fuerte
Propiedad de Separación ： Eficaz en la separación de compuestos nitrogenados e
isomeros, etc.
Uso ： Pesticidas, PCB, Compuestos nitrogenados
(mejor evitar su uso con FTD)
Rango de temperatura ： - 20℃ ～ 280℃
Nombre comercial ： *** - 1301, *** - 1701, *** - 225

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 Tipos de fase estacionaria（Trifluoropropil）

CF3
(CH2)2 CH3
Si O Si O
CH3 CH3

Nombre de la Fase estacionaria：35 % Trifluoropropil -- 65 % Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Polaridad media a fuerte
Propiedad de Separación ： Los compuestos halogenados son retenidos
Uso ： Compuestos halogenados, compuestos polares,
solventes
Rango de temperatura ： - 20℃ ～ 340℃
Nombre comercial ： *** - 200, *** -210

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Tipo de fase estacionaria
（Polietileno Glicol）

H H
C C O

H H

Nombre de la fase estacionaria: Polietileno glicol 100%

Polaridad ： Fuertemente polar
Propiedad de separación ： Retención de compuestos polares y fuertes
Uso ： Compuestos polares, solvente, aromas éster metílico de
ácidos grasos.
Rango de temperatura ： 40℃ ～ 250℃
Nombre comercial ： DB- WAX

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Selección de la Fase Estacionaria
• Escoja la fase líquida que más se asemeja en polaridad a los
compuestos de interés del análisis.
Compuestos apolares-columna apolar.
Compuestos polares-columnas con polaridad fuerte.

• Escoja la fase líquida de acuerdo con el propósito del análisis.

Cuando la diferencia de los puntos de ebullición de los compuestos es grande.
－Columna apolar.
Cuando la diferencia de los puntos de ebullición de compuestos no es grande como isómeros.
- Columna con polaridad fuerte.

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Dimensiones de Columna Capilar para
Aplicaciones en GC
Longitud
• Normalmente 30 ~ 60 m

Diámetro interno
• Normalmente 0.25 mm (narrow-bore), 0.32 mm (semi wide-bore) o 0.53 mm
(wide-bore)

Espesor de la fase estacionaria

• Normalmente 0.1 ~ 3 micrones

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Relación del diámetro y longitud de la columna con
la resolución.

Decrease tube diameter Increase Column Length

Increase resolution Increase resolution
Relación de la fase estacionaria con la resulcion

Increase Stationary Phase Thickness

Increase resolution of early eluting compounds

Además, aumente el
factor de capacidad y
reduzca los picos de cola

Pero también disminuye la

estabilidad de la fase
estacionaria
Retention Index

2.) Describing Column Performance

 Can manipulate or adjust retention time by changing polarity of stationary
phase

 Can use these retention time differences to classify or rate column

performance
- Compare relative retention times between compounds and how they
change between columns
 Can be used to identify unknowns
Retention Index

3.) Describing Column Performance

 Retention index based on the difference in the number of carbons (N, n) for
linear alkane and corresponding retention times (tr’(unknown), tr’(N),tr’(N)):
 log t'r ( unknown )  log t'r ( n ) 
I  100  n  ( N  n ) 
 log t'r ( N )  log t'r ( n ) 

 Provides a means to compare the performance of different columns

Increase in Polarity
Temperature and Pressure Programming

1.) Improving Column Efficiency

 Temperature programming:
- Temperature is raised
during the separation
(gradient)

- increases solute vapor

pressure and decrease
retention time

Temperature gradient improves

resolution while also decreasing
retention time
Temperature and Pressure Programming

1.) Improving Column Efficiency

 Pressure Programming:
- Increase pressure  increases flow of mobile phase (carrier gas)
- Increase flow  decrease retention time

Van Deemter curves indicate

that column efficiency is
related to flow rate

 Pressure is rapidly reduced at the end of the run

- Time is not wasted waiting for the column to cool
- Useful for analytes that decompose at high temperatures
Contaminación de la columna.

Además, los residuos pueden interactuar con

solutos activos dando como resultado problemas
de adsorción máximos (evidentes como cola pico o
pérdida de tamaño de pico). Los solutos activos
son aquellos que contienen un grupo hidroxilo (-
OH) o amina (-NH) y algunos tioles (-SH) y
aldehídos