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celulares y su estudio
• Los organelos
membranosos como
comportamientos
intracelulares
especializados
• Origen evolutivo de los
compartimientos
membranosos
• Fraccionamiento sub-celular
En células
eucariotas, las
membranas internas
forman
compartimientos
cerrados en los
cuales se llevan a
cabo diferentes
procesos
metabólicos
(organelos)
Algunos organelos membranosos en eucariontes
retículo núcleo lisosomas
endoplásmico
mitocondria peroxisoma
Una célula del
epitelio intestinal
endosoma
contiene el set citosol
básico de peroxisoma
lisosoma
organelos que se aparato de
pueden encontrar Golgi
mitocondria
en células
animales retículo
endoplásmico
núcleo
membrana
plasmática
ribosomas
libres
Principales funciones de los organelos membranosos
Compartimiento Función principal
ribosomas
unidos a
membrana
TRANSPORTE
POR
VESÍCULAS
La destinación correcta de proteínas depende de
péptidos señales en las proteínas
Proteína citosólica Proteína de RE con
(sin péptido señal) péptido señal removido
péptido señal de
RE unido a
proteína
citosólica
• Microscopía
• Cultivo celular
• Fraccionamiento subcelular
• Enzimas marcadoras de organelos
Muestra de diversos “animálculos” observados por
van Leeuwenhoek utilizando su microscopio simple
Fluoresceína
La técnica de la inmunofluorescencia (IF)
puede ser directa o indirecta
La IF permite observar componentes celulares específicos
Los organelos pueden ser estudiados por
separado usando centrifugación
Los tejidos y células pueden ser disgregadas
mecánicamente: HOMOGENIZACIÓN
Suspensión
de células o
tejido
LA CENTRÍFUGA
Sobrenadante
(componentes más
Homogenizado pequeños y menos
celular (antes de densos)
la centrifugación)
Pellet (componentes
más grandes y densos)
ANTES DESPUÉS
Fraccionamiento subcelular por centrifugación
diferencial
Centrifugación diferencial: BAJA velocidad
Centrifugación diferencial: MEDIA velocidad
Centrifugación diferencial: ALTA velocidad
Centrifugación diferencial: MUY ALTA velocidad
Aquellos componentes que sedimentan juntos
pueden ser separados a través de una
centrifugación en gradientes de densidad
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN
CENTRIFUGACIÓN FRACCIONAMIENTO
muestra
componente de
gradiente de sedimentación lenta
densidad de componente de
sacarosa sedimentación rápida
Recolección de fracciones y
análisis usando enzimas
marcadoras de organelos
Cada componente celular se equilibrará (no seguirá
sedimentando) cuando alcance una posición en la
gradiente que calze con su densidad
EQUILIBRIO DE
SEDIMENTACIÓN
• La fracción rica en
mitocondrias
se separó por
centrifugación en
una gradiente de
sacarosa
Los organelos se
separaron en función
de su densidad
Citocromo
oxidasa
(mitocondrias)
Cada fracción se
analiza respecto a la
actividad de enzimas Uricasa
(peroxisomas)
marcadoras de
organelos (típicas de
un organelo)
Fosfatasa
ácida
(lisosomas)
Conceptos esenciales
• En eucariontes, las membranas internas forman
organelos membranosos
• Los organelos membranosos tienen diferentes
origenes evolutivos
• Los organelos membranosos tienen que
multiplicarse antes de la división celular para ser
entregados a las células hijas
• Los organelos crecen gracias a que sus proteínas
son transportadas desde el citosol al organelo
Conceptos esenciales
• La destinación correcta de proteínas depende de
péptidos señales
• Componentes celulares específicos se pueden
estudiar usando microscopía e
inmunofluorescencia
• Los organelos pueden ser aislados para su estudio
mediante fraccionamiento subcelular
• Cada organelo se puede detectar en las fracciones
midiendo la actividad relativa de enzimas
marcadoras