AISLAMIENTO DE

BACTERIAS ANAEROBIAS y
MICOBACTERIUM
Dra. Lizzie Becerra Gutierrez
MsC. Carlos Abanto
Dr. Juan Giles
Blgo: Max Siaden
 ANAEROBIOS
Son microorganismos que no viven ni proliferan en presencia de oxígeno

5%
 GENERALIDADES
• Pueden formar o no esporas.

• Los que no forman esporas producen infecciones

endógenas de tipo oportunistas.

• Los que forman esporas producen infecciones tanto

endógenas como exógenas
 Son exigentes para crecer, necesitan vitaminas y
cofactores.
 Las infecciones generalmente son mixtas con bacterias
aerobias.
 Incluyen a varios géneros de cocos y bacilos, grampositivos
y gramnegativos.
 Anaerobios

NO ESPORULADOS ESPORULADOS
Múltiples géneros y Género:
especies Clostridium
Variadas formas Bacilos Gram
Gram (+) – Gram (-) (+)
 Anaerobios No Esporulados
GENEROS
Gram (-) Veillonella

COCOS
Gram (+) Peptococcus
Sarcina
Peptostreptococcus

Porphyromonas Fusobacterium
Prevotella Selenomonas
Gram (-) Bacteroides Centípeda
Mitsoukella Bilophila
BACILOS Leptotrichia Helicobacter

Actinomyces
Gram (+) Propionibacterium
Bifidobacterium
flora de piel y mucosas: vaginosis, placa Eubacterium
periodontal. Lactobacilos
Mobiluncus
 Anaerobios Esporulados
Bacilos Gram (+) Género Clostridium

z Clostridium tetani  Clostridium difficile

z Clostridium botulinum  Clostridium sporogenes
z Clostridium perfringens  Clostridium tertium
z Clostridium septicum  Clostridium histolyticum
z Clostridium ramosum  Clostridium novyi
z Clostridium  Clostridium cadaveris
bifermentans  Etc.
 Factores predisponentes a la Infección por
Anaerobios

Insuficiencia vascular e irrigación Cuerpos extraños

sanguínea deficiente
Mordeduras o quemados
Necrosis, hipoxia tisular
 Edema
Traumatismos
 Infecciones previas
Cirugías
Diabeticos
Localizaciones
habituales de
infecciones por
Anaerobios
 Signos Clínicos de Infección Anaerobia

 Olor fétido del pus

 Localización de la infección cercana
a una superficie mucosa
 Presencia de necrosis, gangrena,
gas en los tejidos
 Infecciones consecutivas a mordeduras
o a heridas sucias
 Cirugías comprometedoras:
aborto séptico, infección post cirugía abdominal, etc.
 Endocarditis con hemocultivos aerobicos negativos
 Presencia de “granos” de azufre en una lesión
 No desarrollo en aerobiosis de los microorganismos
observados en el Gram.
 Coloración negra de la herida
 RECOLECCION DE LA MUESTRA

 Adecuada asepsia (evitando la

flora microbiana)
 Elegir la forma de recolección
 Aspirado (con jeringa)
 Biopsia de Tejido

Siembra en medio
reductor líquido:
thioglicolato
Transporte inmediato
al laboratorio
 TRANSPORTE

Inoculacion en frascos anaeróbicos de transporte con agente reductor o

jeringuilla con aguja insertada en un tapon de caucho esteril
 Diagnóstico Infecciones por
Anaerobios

 Procesamiento adecuado de la muestra:

Siembra en medio reductor líquido: caldo thioglicolato
Tinción de Gram de la muestra

 Siembra inmediata en medios enriquecidos con hemina y

vitamina K
 Incubación en anaerobiosis por tiempo prolongado
(mínimo 48 hrs hasta 10 dias)
 Identificación:
 Aspecto de la colonia
 Pruebas bioquímicas
 Morfología a la Tinción de Gram
 Cultivo de anaerobios: Atmósfera
• Métodos para generar atmósfera anaerobia:
– Mezcla de gases: Se utiliza una mezcla compuesta por 5-10%
H2, 5-10% CO2 y 80 a 90% de N2,
– Generadores comerciales: Hay diferentes sistemas
comerciales:
• Con catalizador (Gas Pack, BBL; Anaerobic Gas generator,
Oxoid): BH4Na y ácido cítrico y una tableta de HCO3Na para
generar H2 y CO2
• Sin catalizador: mezcla de reactivos que fijan el O2 y generan
CO2.
** Activados con agua: Anaerocult, Merck; Britania.
** Activan al contacto con el aire: Anaerogen, Oxoid; Key
Scientific, Mitsubishi; Genbox, Biomerieux
Sistemas de incubación:
a) Jarras anaerobias
b) Cámara anaerobia
c) Bolsas anaerobias
 Muestras NO aptas para cultivo
anaerobios
• Heces o materiales que estén
contaminados con contenido intestinal
(excepción C. difficile)
• Hisopados de piel, vaginales, heridas
• Orinas tomadas por micción espontánea
• Esputos, secreciones nasofaringeas o
materiales tomados por broncoscopía sin
protección.
 Muestras aptas para cultivo
anaerobios
• Líquidos normalmente estériles: LCR,
pleural, peritoneal, etc.
• Muestras tomadas por punción a través de
piel sana (Heridas, hematomas,
colecciones, punción suprapúbica, etc.)
• Muestras de endometrio, pulmón, etc.,
tomadas por biopsia o cepillos recubiertos.
• Biopsias (de sitios sin flora habitual)
 TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN

Tinción Alcohol Acido Resistente

Procedimiento

1. Realizar frotis de esputo

2. Fijar
3. Cubrir con Fucsina Básica Fenicada
4. Calentar hasta emisión de vapores
5. Dejar enfriar
6. Lavar con agua
7. Decolorar con alcohol acido
8. Cubrir con Azul de Metileno (1´)
9. Observar en imersiónº
 Escala semicuantitativa para los extendidos examinados por tinción Ziehl-
Neelsen

Resultado del examen microscópico Informe

No se encuentran BAAR en 100 No se observan bacilos ácido-

campos observados alcohol resistentes

Se observan de 1 a 9 BAAR en 100 Nº exacto de bacilos en 100

campos observados campos

Se observan entre 10 y 99 BAAR en Positivo (+)

100 campos observados

Se observan de 1 a 10 BAAR en 50 Positivo (++)

campos observados

Se observan más de 10 BAAR en 20 Positivo (+++)

campos observados
Éxito en el
examen
 Género Actinomyces

Especies:
 A. israelii
 A. viscosus
 A. naeslundii
 A. meyeri
 A. odontolyticus
 A. pyogenes
 A. georgiae
Actinomyces israelii
Cultivo en Agar Sangre
Clostridium tetani
Colonia en Agar Sangre
Clostridium perfringens
Tinción de Gram: Bacilos Gram (+)
Clostridium perfringens
Cultivo en Agar Sangre
Clostridium perfringens
Colonia en Agar Sangre
Clostridium botulinum
Bacilo Gram (+)
Clostridium botulinum
Clostridium difficile
Clostridium difficile
Colonia en Agar Sangre
Cocos Gramnegativos Anaerobios

Género Veillonella

V. parvula
Cocos Grampositivos Anaerobios

Género Peptostreptococcus

P. anaerobius
P. magnus
P. micros
P. asaccharolyticus
 Bacterias Anaerobias
aisladas con mayor frecuencia en
infecciones

z Grupo Bacteroides fragilis: B. fragilis

z Prevotella
z Porphyromonas
z Fusobacterium nucleatum
z Clostridium perfringens
z Clostridium ramosum
 Bacteroides fragilis
Colonia en Agar Sangre
Prevotella melaninogenica
Colonia en Agar Sangre
Fusobacterium nucleatum
Fusobacterium nucleatum
Colonia en Agar Sangre