BIOQUÍMICA

Clase 4

Ciclo de Krebs
Importancia Fisiológica
Vía de las pentosas. Gluconeogénesis
 Mitocondrias: organelos

 Organelos del tamaño de una

bacteria (1x2um) especializados en
mecanismos oxidativos y en
síntesis de ATP.
 Una célula eucariota puede
contener hasta 2000 mitocondrias,
aproximadamente 25% de su
volumen.
 Constan de una membrana
externa, una interna y un espacio
intermembranoso.
 La membrana interna tiene el más
alto contenido proteico que ¨La membrana externa se puede separar y
ninguna otra membrana en la asislar mediante la digitonina, shock
célula. osmótico o radiación ultrasónica seguida
de centrifugación en gradiente de
densidad.¨
Funciones metabólicas de la
mitocondria
 Partes de la mitocondria
 Membrana externa: Porosa y permeable a iones y pequeñas
moléculas.
 Membrana interna: altamente impermeable. Las moléculas
requieren de transportadores proteicos. Gracias a sus pliegues
aumenta su superficie. En la membrana hay transportadores
proteicos, deshidrogenasas FAD dependientes, y todas las enzimas
de la Fosforilación Oxidativa.
 Espacio intermembranoso contiene dos enzimas fundamentales
: la adenilatoquinasa y la nucleósido difosfato quinasa.
2 ADP    ATP  AMP
adenilatoquinasa
XTP  ADP       XDP  ATP
mucleósidodifosfatoquinasa

 Matriz: contiene muchas enzimas, como las del Ciclo de Krebs, la

pirúvico deshidrogenasa, la glutamato deshidrogenasa, y las de
la b oxidación.
Ciclo de Krebs y los
macronutrientes
CARBOHIDRATOS PROTEÍNAS GRASAS

GLUCOSA AMINOÁCIDOS ÁCIDOS GRASOS

Acetil CoA

ATP Ciclo CO2

de
Krebs
Ciclo de Krebs:energía
 El Ciclo de Krebs es un conjunto de reacciones
químicas que se efectúa en las mitocondrias, para
catabolizar los residuos de Acetil CoA producidos
en el metabolismo de carbohidratos y grasas.
 Este Ciclo libera energía que se guarda como ATP
y moléculas de CO2 que se eliminan con la
respiración.
 Esas funciones se llevan a cabo en todos los
tejidos pero con más importancia en el hígado.
 Es responsable de 2/3 de la producción calórica
del organismo.
Ciclo de Krebs: principio general
 Piruvato

Etapas del Ciclo

AcetilCoA de Krebs
 A partir de un acetil
CoA se producen dos
Citrato
Oxalacetato moléculas de CO2.
 Se generan cuatro
Isocitrato pares de hidrógenos
Malato que son captados por
3 NAD y 1 FAD.
 Además se produce
Fumarato Alfa cetoglutarato una fosforilación a
nivel del sustrato.
Succinato
Succinato CoA

GTP GDO +P
 Ciclo de Krebs: etapas 1 y 2

1.- Condensación inicial del Acetil CoA con el Oxalacetato con liberación
de energía del enlace tioester por acción de la citrato sintetasa.

AcetilCoA  Oxalacetato  H 2O  Citrato  CoA

2.- Conversión de citrato en isocitrato. Se forma transito-riamente cis

aconitato. La realiza la enzima aconitasa.

Citrato  Cis  aconitato  Isocitrato

H2O H2O
 Ciclo de Krebs: etapas 3 y 4

3.- Dehidrogenación del isocitrato, formando oxalsuccinato. Existen tres

isoenzimas: la NAD específica de las mitocondrias, y las NADP específicas de
mitocondrias y citosol. La NAD específica se acopla a la cadena respiratoria.
Isocitrato  NAD  oxalsuccinato    cetoglutarato  CO2  NADH  H
unido a la  enzima

Esta reacción requiere Mg++ y genera 3ATP por Mol de acetilo

4.- El alfa ceto glutarato pasa por una decarboxilación oxidativa seme-jante a la
del piruvato. Requiere los mismos cofactores y vitaminas tales como, difosfato
de tiamina, ác.lipoico, NAD,FAD y CoA. La enzima es la cetoglutarato
dehidrogenasa y forma Succinil CoA.

cetoglutarato  NAD  CoA  SuccinilCo A  CO2  NADH  H

Esta reacción genera 3ATP por Mol de acetilo.

Ciclo de Krebs: etapas 5 y 6

5.- La succinil CoA se convierte en succinato por acción de una

tioquinasa. En esta reacción la energía liberada por la unión con la CoA
permite la síntesis de una mol de ATP. A nivel del sustrato.

6.- El succinato es metabolizado por una deshidrogenasa, unida a la superficie

interna de la membrana mitocondrial. En la única deshidrogenasa que
transfiere hidrógeno al FAD sin pasar por el NAD. Genera fumarato.

Esta reacción sólo genera 2 ATP en la cadena respiratoria.

 Ciclo de Krebs: etapas 7 y 8

7.- La fumarasa cataliza la incorporación de una mol de agua para

formar malato.Se elimina la doble ligadura anterior.

8.- El malato es convertido a oxalacetato por una deshidrogenasa en

presencia de NAD.

malato  NAD  oxalacetato  NADH  H

Esta reacción genera 3ATP por mol de acetilo, en la cadena respi-ratoria y
proporciona el oxalacetato necesario para reiniciar el ciclo con una molécula
más de acetil CoA.
 Ciclo de Krebs : balance calórico

 Se producen tres moléculas de Generación de ATP por Ciclo

NADH y una de FADH2 por cada
molécula de acetil CoA.
 En la membrana mitocondrial Enzim a ATP
interna se recibe estos equiva-
lentes reductores por la cadena Deshidrogenasa isocít rica 3
respiratoria.
 Cada paso por la cadena genera Deshidrogenasa del cet oglut arat o 3
3 ATP a partir del NAD pero a
partir de FAD sólo 2. Succinat o t ioquinasa 1
 Un enlace de alta energía se
genera a nivel del sustrato. Deshidrogenasa del succinat o 2
 En total se forman 12 ATP por
ciclo de Krebs. Malat o deshidrogenasa 3
 www.wiley.com/legacy/college/
boyer/0470003790/animations/t
ca/tca.htm
Tot al 12
Vitaminas en el Ciclo de Krebs

 Riboflavina como FAD :  cetoglutarato

deshidrogenasa y succinato deshidrogenasa.
 Niacina como NAD: isocitrato cetoglutarato
deshidrogenasa y malato deshidrogenasa
hidrogenasa.
 Tiamina como difosfato de tiamina: para de-
carboxilación y cetoglutarato deshidrogenasa.
 Ácido pantoténico como Coenzima A.
Control del ciclo de Krebs

 Principal función del ciclo de Krebs : producción de ATP.

 Una dieta promedio genera 2000 a 3000 kcal por día.
 Si ello provee un 50% de generación de ATP, se debe pro-
ducir aproximadamente 120 moles de ATP o 65 kg del mismo.
 Como el organismo sólo tiene 3 a 4 g de nucleótidos (ATP
ADP,AMP ) cada molécula debe ser refosforilada miles de
veces al día.
 Si una célula no usa el ATP no habrá ADP disponible, luego
el NADH no podrá ser reoxidado y la relación NADH/NAD se
elevará y esto detendrá al ciclo de Krebs.
Acción de la relación NADH/NAD sobre
el ciclo de Krebs
El incremento de NADH inhibe a la:
 cetoglutarato deshidogenasa
 citrato sintetasa
 isocitrato sintetasa
 piruvato deshidrogenasa.
Estas enzimas también se inhiben por el
producto.
Aprovechamiento de los NADH
en la cadena respiratoria
 El NADH producido en el citosol por efecto de la
glicólisis (gliceradehido 3P deshidrogenasa) no
puede atravesar la membrana mitocondrial.
 En condiciones anaeróbicas se aprovecha en la
transformación de piruvato a lactato.
 En condiciones aeróbicas se aprovecha por la
cadena respiratoria.
 El ingreso a la mitocondria está regido por un
mecanismo llamado de lanzadera de equivalentes
reductores.
Lanzadera del glicerofosfato

NAD Glicerol 3P Glicerol 3P FAD

Glicerol 3P Glicerol 3P
deshidrogenasa deshidrogenasa

FADH
NADH Dihidroxiacetona P Dihidroxiacetona P
Lanzadera del malato (1)
 El proceso de transaminación en el citosol genera
gran cantidad de oxalacetato que se transforma en
una vía de ingreso para más NADH.
 Sin embargo la membrana mitocondrial es
impermeable al oxalacetato por lo que el transporte
lo hace bajo la forma de malato. Es este el que lleva
los equivalentes reductores al interior.
 Dos transaminasas transforman al oxalacetato en
cetoglutarato para permitir su paso de membrana.
Lanzadera del malato (2)

NAD Malato Malato NAD

Malato deshidrogenasa Malato deshidrogenasa

oxalacetato oxalacetato NADH

NADH
Transaminasa Transaminasa

Alfa KG Alfa KG

Glutamato Aspártico Aspártico Glutamato

H H
 Vía de las Pentosas
Metabolismo de Fructosa
Metabolismo de Galactosa
Gluconeogénesis
 Vía de la pentosa fosfato

 No es una vía esencialmente energética.

 Tiene dos funciones importantes: generar NADPH
para la síntesis de ácidos grasos y de esteroles.
Además provee ribosa para síntesis de nucleótidos.
 Genera tres moléculas de CO2 y 3 pentosas las
cuales producen dos hexosas y una triosa. Dos
triosas pueden regenerar una hexosa que se
metaboliza por la vía glicolítica.
 Es una vía citosólica , usa NADP como receptor de
H y tiene dos fases: oxidativa y no oxidativa
Vía de pentosas : metabolismo
 Vía de las pentosas:
características

 La vía es activa en hígado,

tejido adiposo, suprarrenal,
tiroides, eritrocitos, testículos y
glándulas mamarias durante la
lactancia.
 Su actividad es baja en el
músculo..
 En todos los tejidos se necesita
ribosa, luego el músculo puede
producirla por vía inversa de la
pentosas a partir de fructosa 6P.
 El NADPH permite reducir el
glutation. Este último remueve el
H 2O 2 de los eritrocitos
aumentando su vida.
Fructosa

 Las dietas abundantes en sacarosa incrementan los

niveles de fructosa.
 La sacarosa se metaboliza más rápidamente que la
glucosa por no requerir a la fosfofructoquinasa de control.
 Favorece entonces la síntesis de ác. grasos y estimula la
secreción de insulina.
 La fructoquinasa es independiente del ayuno y la insulina
por lo que la fructosa si se aprovecha en la diabetes.
 La afinidad (Km) de la fructoquinasa hepática es alta, es
decir tiene una Km baja.
Fructosa : metabolismo
 Galactosa : metabolismo

 Proviene de la
hidrólisis de la
lactosa. El hígado la
convierte en glucosa
 No es esencial, la
glucosa se
transforma en
galactosa
 Gluconeogénesis

 Es la síntesis de glucosa a partir de grasas o

proteínas.
 Por principio, gluconeogénesis y glicólisis son vías
opuestas en el metabolísmo.
 Existen en la glicólisis tres etapas que por su
desnivel energético deben sobrepasarse mediante
procedimientos alternos.
 La gluconeogénesis usa cuatro reacciones diferentes
para sobrepasar esas tres etapas.
 Glicólisis y gluconeogénesis

 Hígado y riñón tienen todas

las enzimas de la
gluconeogénesis, pero 80%
se realiza en el hígado.
 La 1ra. etapa se realiza en
la mitocondria,
transformando piruvato en
oxalacetato.
 Las siguientes en el citosol
y la última en el retículo
endoplasma
 Para una mol de glucosa se
requiere 4 ATP y 2 GTP y
NADH
 Enzimas de la gluconeogénesis

 Piruvato carboxilasa, enzima que transporta al grupo

carboxilo, mediada por la biotina
Piruvato  HCO3  ATP  Oxalacetato  ADP  Pi
Biotina

 Fosfoenolpiruvato carboxiquinasa: fuera de la mitocondria

trans-forma al oxalacetato en fosfoenolpirúvico. Requiere
de GTP.
Oxalacetato + GTP Þ Fosfoenolpiruvato + GDP + CO2

Fructosa difosfatasa: enzima citosólica

Fructosa1,6PP  H 2O  F 6P  Pi

 Glucosa 6 fosfatasa

 Esta reacción sobrepasa la catalizada por la hexoquinasa o la

glucoquinasa.
 La enzima está localizada en el retículo endoplasma y tiene
cinco subunidades.

G6P Citosol
Pro.Regula
T1 con Ca++ T2 T3
G6Fos.asa

Luz del retículo

G6P Glucosa+Pi endoplasma
 De dónde provienen los precursores
de la gluconeogénesis?

 Del tejido adiposo, el glicerol

Glucosa
(Glicerol fosfato-DHAP-glu-
aminoá cosa) de los triglicéridos.
PEP cidos
 Del tejido muscular y los he-
matíes, el ácido láctico (áci-
do láctico-piruvato-glucosa).
Oxalacetato Alfa cetoglutarato
 De la proteína muscular, la
amino alanina que se transamina a
ácidos
piruvato.
Fumarato  Otros aminoácidos, llamados
Succinil
glucogenéticos.
CoA aminoá
cidos