FUNDAMENTO DE LA COLORACION

PAD

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA

ALUMNA: JAKELIN SURCO PEREZ

TINCION PAPANICOLAOU

 Método de coloración policrómica,que consta

de una coloración nuclear y un contraste
citoplasmático.

 Método basado en la diferenciación de los

diversos componentes de la célula, se aplica a
los diversos tipos celulares para el diagnóstico
de cambios malignos y la tipificación celular.
 Ventaja del método de
tinción de Papanicolaou

 Una buena definición de

l detalle nuclear, eviden
ciando el patrón de cro
matina
de las células.
 Un aspecto transparente
de los citoplasmas y una
diferenciación celular, que
PASOS PRINCIPALES DE LA TINCIÓN

 Fijación (realizada al momento de toma

de la muestra).
 Tinción del núcleo con la hematoxilina.
 Tinción del citoplasma con Orange G y EA.
 Aclaramiento
FIJACIÓN

 El mejor fijador consistía el alcohol-eter (en partes

iguales).
 Ahora se utiliza fijadores de revestimiento: los spray,
que contienen polietilenglicol y alcohol etílico, estos
son hidrosolubles y para ser coloreados se tiene que
retirar el fijador con alcohol de 96°(5min.), para evitar
que se contaminen.
La tinción de Papanicolaou
usa tres colorantes

 Hematoxilina.
 OG 6
 EA 50

Los pasos de la tinción están entrem

ezclados con soluciones que hidratan,
deshidratan y enjuagan las células
 TINCIÓN PAP

 COLORACION BÁSICA:
Hematoxilina de Harris

 COLORACIÓN ÁCIDA:
Orange G
Eosina
TINCIÓN

Es importante señalar que éste es un procedimiento que

tiene variaciones e incluso preferencias personales en la
coloración.
ENJUAGE

Enjuague, se realiza con agua corriente y/o agua

destilada, pero siempre hay que
verificar que el pH del agua se encuentre entre 6.5 y 7.
HIDRATACIÓN

La hidratación antes del colorante de hematoxilina puede

ser:
 Gradual usando alcohol en concentraciones
decrecientes 80‐70‐50 %
 Abrupta, sumergiendo el material celular desde altas
concentraciones de alcohol
y al agua directamente.
TINCIÓN DEL NÚCLEO

Existen dos métodos para teñir el núcleo:

 Método progresivo. Se tiñe el núcleo con l
a intensidad de color deseada.
 Método regresivo. Se sobretiñe con hemat
oxilina no acidificada, luego se remueve e
l exceso de tinción con ácido clorhídrico
diluido.
 Después de la hematoxilina, las laminillas
se lavan en agua
TINCIÓN DEL CITOPLASMA

 Orange G 6, es una tinción monocromátic

a y
 EA 50, es una tinción policroma
compuesta
COLORANTE

 Hematoxilina de Harris: tiene afinidad por la cromatina,

tiñe el núcleo.
 Orange G: Tiñe la queratina, penetra facilmente al
citoplasma.
 Eosina: Tiñe el citoplasma de las células escamosas
cianofílicas y eosinofílicas. Nucléolos y cilios.
ACLARAMIENTO

 Es el paso final de la tinción y produce tra

nsparencia celular.
 Se suele usar Xilol como
solución aclaradora.
MONTAJE

 La unión del portaobjetos mediante un

medio de montaje que cubre el áre
a bajo el cubreobjetos para:
 Obtener una muestra cubierta.
 Proteger la muestra contra el secado y
arrugamiento del material celular.
 Sellar, evitando así la oxidación de la
muestra.
 CARACTERÍSTICAS DEL MEDIO
DE MONTAJE
1. Debe ser soluble en el agente aclarante.
2.Debe tener un índice de refracción que
coincida con la muestra y el cubreobjetos,
logrando una imagen lo más transparente
posible.
3.Debe tener un pH neutro.
OBJETIVO DE CADA REACTIVO

Función general.
 Hematoxilina Tinción nuclear.
 OG 6 y EA 50 Tinción citoplasmática.
 Xilol C6H4(CH3)2 Aclaramiento.
 Alcohol absoluto CH3CH2OH Deshidratación total.
OBJETIVO DE CADA
REACTIVO
 Alcohol etílico La función principal es deshidratar,
puede ser sucesiva, gradual o abrupta según el lugar
que ocupe dentro de la tinción. La función secundaria
es el enjuague
 Agua Enjuague.
 Solución de HCL .05% Remueve el exceso de
hematoxilina.