PRÁCTICO 1.

INTRODUCCIÓN AL ANÁLISIS HISTOLÓGICO Y

EMBRIOLÓGICO

Al finalizar el laboratorio deberá ser capaz de:

Describir las técnicas básicas aplicadas a la Histología y Embriología

ACTIVIDAD 1: Lectura (10 min).

INTRODUCCIÓN

El análisis Histológico y Embriológico ha sufrido una verdadera revolución

durante los últimos 20 años debido, en parte, debido al desarrollo de técnicas de
Biología Molecular, las cuales han permitido avanzar en la obtención de
conocimiento que ha complementado la información obtenida de estudios
clásicos.

Durante este laboratorio se presentarán y discutirán algunas de las técnicas más

frecuentemente utilizadas en estas disciplinas.
Las técnicas utilizadas en Histología se pueden clasificar de la siguiente
manera:

Técnicas Histológicas: Incluyen a técnicas que permiten visualizar a nivel de

microscopía óptica distintos constituyentes titulares, pero no discriminar el tipo
molecular específico al cual corresponden. La técnica más conocida y utilizada
es la tinción de hematoxilina-eosina (HE).

Técnicas Histoquímicas: Estas técnicas permiten distinguir componentes

tisulares en forma específica, como por ejemplo: proteínas de un tipo
específico, determinados tipos azúcares, ácidos nucleicos, entre otros.
Las técnicas Histoquímicas se dividen en:

Histoquímicas (propiamente tales): Las cuales permiten detectar elementos

como: la actividad de una enzima en un tejido y por lo tanto su localización, para
esto se utilizan sustratos específicos e inhibidores de otras enzimas que se
activan inespecíficamente. También se pueden detectar distintos tipos de lípidos
almacenados en las células, mediante colorantes liposolubles, esto permite
estudiar cuadros degenerativos asociados a la acumulación de lípidos. Se puede
discriminar entre DNA y RNA, detectar azúcares en distintos compartimentos
celulares, entre otras.

Inmunohistoquímicas: Estas técnicas aprovechan la propiedad de los

anticuerpos para unirse específicamente a una proteína. El modo de
visualización puede ocupar colorantes para microscopía de campo claro,
metales pesados para microscopía electrónica de transmisión o fluorocromos
que utilizan la propiedad de fluorescencia de algunas moléculas y por lo tanto
deben ser observados en microscopios de fluorescencia.
Técnicas de Biología Molecular: La principal técnica utilizada en Histología
es la Hibridación in situ, que se basa en la complementariedad de bases de
los ácidos nucleicos. En este caso se utiliza una sonda marcada, que se une
específicamente a una secuencia de ácidos nucleicos.

El análisis en Embriología: Las técnicas utilizadas en Embriología son muy

diversas, incluyendo a las técnicas Histológicas mencionadas anteriormente,
técnicas de biología molecular, transplantes de tejidos y células, ablación de
tejidos, manipulación genética entre otros. Junto con esto la utilización de
modelos animales y de mutantes ha sido crucial en el desarrollo de esta
disciplina.

ACTIVIDAD 2 (20 min)

Discuta con sus profesores acerca de la siguiente presentación

BIOLOGÍA MOLECULAR: FISH
La tecnología del modelo transgénico ha creado ratones ubicuos con el
promotor de la proteína fluorescente verde (GFP). Este transgénico nos
da la oportunidad de realizar transplantes heterotópicos de regiones
con capacidad morfogenética.
Biopsia de una blastómera

•Núcleo bien definido

 Sex-Determination Using FISH

18
18

DXZ1 DYZ3 D18Z1

metaphase interphase
ACTIVIDAD 3 (20 min):

Durante este laboratorio se han discutido algunas de las técnicas utilizadas

en esta disciplina. En conjunto con los compañeros de su fila, y ayudado
por sitios web usted debe responder a las siguientes preguntas.

¿Qué se entiende por basófilo?

¿Qué se entiende por acidófilo?

¿Qué características debe presentar el producto de una reacción

histoquímica?
Qué técnica (s) utilizaría en cada uno de los siguientes casos:

Conteo de núcleos en el hígado

__________________________

Detección de queratina en la epidermis

__________________________

Localización de pepsinógeno en el estómago

__________________________

Detección de glucógeno almacenado en los hepatocitos

__________________________

Detección de acetilcolinesterasa en neuronas

__________________________

Detección de glicosilasas en el aparato de Golgi

__________________________

¿Qué se entiende por fluorocromo?

Mencione dos modelos invertebrados que se utilicen en el estudio
embriológico

Mencione cuatro modelos vertebrados que se utilicen en el estudio

embriológico

¿Cuál es la importancia de la utilización de mutantes en el estudio

embriológico?

¿Qué propiedades presenta la molécula de GFP?

ACTIVIDAD 4 (50 min)

- Diríjase al siguiente sitio web:

http://anatomie01.lumc.nl/microscopy/html/caskviewer.html
-Haga click en Organ Systems.
-Compare la orientación de los preparados en las placas 057 y 115 y
establezca la orientación de los cortes.

Respuesta:
A continuación despliegue la placa 022a.

-Diríjase a las coordenadas x: 0.4216, y 0.3483

-Estime el diámetro y altura de esa célula y de las cuatro vecinas al lado derecho del
campo (la zona apical va hacia el lumen).
-Describa la forma celular, junto con la forma y posición del núcleo.
-Investigue a qué corresponden aquellas células grandes y redondeadas que
aparecen en el campo visual.

Respuestas:
A continuación despliegue la placa 022b.

-Identifique a aquellas células grandes y redondeadas que reconoció anteriormente

-Cómo explica su apariencia tan distinta.
-Desplácese a la parte más externa de la muestra y compare la orientación de las
capas y sus células (referencia x: 0.04-0.1, y: 0.4 comparado con x: 0.015-0.39, y: 0.4
), indicando las diferencias en la forma nuclear.
-Explore libremente la plataforma CASK.

Respuestas:

-***Envíe las respuestas consensuadas de su fila a juan.montiel@uoh.cl para

evaluación formativa.