Procesamiento de tejidos

TÉCNICAS HISTOLOGICAS
• Son el conjunto de procedimientos utilizados para el estudio microscópico de
las piezas anatómicas destinadas a las observaciones histológicas.
 TÉCNICAS DE HISTOQUÍMICA

• Las técnicas histoquímicas comprenden el conjunto de

métodos empleados para la demostración de la
naturaleza química de los componentes tisulares y
celulares.
 TÉCNICAS DE HISTOQUÍMICA

• Se recurre al empleo de estas tinciones histoquímicas

cuando la pretensión es visualizar (teñir)
específicamente una sustancia determinada.

• Los métodos histoquímicos se basan, pues, en hacer

reaccionar químicamente determinados reactivos con
los componentes celulares o tisulares que queremos
demostrar para obtener un producto final que es
coloreado y puede verse con el microscopio.
 TÉCNICA CON PARAFINA

1. Obtención de la muestra
2. Fijación
3. Deshidratación
4. Aclaramiento
5. Inclusión
6. Cortes por micrótomo
7. Montaje y tinción
PASOS DE LA TECNICA:
1- Obtención del
material:

Pueden provenir de:

* biopsias quirúrgicas
* material obtenido de
necropsias
* * frotis o extendidos
 FIJACION

• La fijación mantiene la estructura celular como si las

células estuvieran vivas; a través de la insolubilización de
las proteínas para detener súbitamente la actividad vital
celular; detener los procesos de autólisis; proteger a las
células del ataque bacteriano y putrefacción

• Fundamento: coagular las proteínas del tejido para que

se endurezcan.
 Cualidades de un buen
fijador:

1) Actuar con rapidez y detener los

procesos autolíticos.
2) Buen poder de penetración.
3) Conservar lo mas fielmente la
estructura del tejido.
4) No interferir y facilitar los procesos
posteriores.
5) Endurecer el tejido y darle mayor
consistencia.
7) No producir estructuras artificiales.
 PRINCIPIOS GENERALES
• La cantidad de fijador debe ser 1:4 veces el
volumen de la muestra, excepto cuando se
usa tetróxido de osmio, que es caro.

• El recipiente debe indicar con claridad el

nombre del paciente; preferentemente con
papel engomado; además el servicio, la
naturaleza la muestra.
PRINCIPIOS GENERALES
• FIJADORES ORDINARIOS • FIJADORES METÁLICOS
• Formol • Mercurio
• Glutaraldehído • De Helly
• A base de plomo
• Líquido de Bouin
• Flemimming
 FORMALDEHIDO COMERCIAL
• Solución saturada de gas formaldehído en
agua; aproximadamente 40 por 100 de gas en
peso.

• Fija algunos lípidos complejos y no saturados,

pero no actúa sobre las grasas neutras, y los
fosfolípidos tienden a difundir lentamente en
el fijador.
 VENTAJAS DEL FORMOL
• Barato.
• Fácil de preparar.
• Su uso permite la aplicación posterior de
numerosas técnicas de tinción.
• La tinción para la grasa puede ser efectuada
fácilmente en tejidos fijados con formol.
• Penetra bastante bien en los tejidos.
 VENTAJAS DEL FORMOL
• No endurece demasiado los tejidos, ni los
hace quebradizos.
• El formol es el mejor fijador para el sistema
nervioso.
 INCONVENIENTES DEL FORMOL

• Su manejo puede provocar dermatitis.

• Sus vapores son irritantes para las fosas
nasales.
• En tejidos que contienen mucha sangre,
produce la formación de gránulos abundantes
de pigmento oscuro: hematina ácida, que es
birrefrigente.
 INCONVENIENTES DEL FORMOL

• Si se emplean soluciones no amortiguadas,

tiende a reducir la tinción basófila, y por lo
tanto no proporciona una definición nuclear
óptima.
• Fijador de rapidez intermedia: 4 a 6 horas.
• No muy bueno para fotografías.
• Por su acción polimerizante, tiende a
disminuir la positividad para PAS.
 Inconvenientes del Gutaraldehído

Comparado con el formol:

• Más caro.
• Menos estable.
• Tarda más en penetrar a los tejidos.
• Muchas dificultades para evaluar PAS.
 Ventajas de Fijadores Mercuriales

• Tiende a mejorar la tinción de los núcleos y el

tejido conjuntivo.
• La solución de Susa penetra bien en los tejidos
y con poco encogimiento.
• El líquido de Helly, es uno de los mejores para
médula ósea y bazo.
• Preserva bien detalles para fotografías.
 FIJACION EN ALCOHOL

• Desnaturaliza y precipita las proteínas.

• Es un fijador excelente para frotes húmedos o
secos; pero en concentraciones inferiores al
80% produce lisis celular.
 DESHIDRATACION

• El propósito de este proceso es eliminar el agua de los

tejidos sometiéndolos a una concentración gradual de
soluciones acuosas de un agente deshidratante.

• Se incrementa las concentraciones del alcohol hasta

llegar a alcohol 100%.

• Si se utiliza al 100% desde el inicio produce una rápida

salida del agua que deforma los tejidos.
DESHIDRATACIÓN
 ACLARACION

• Luego de eliminada el agua, la muestra queda con

alcohol, en él tampoco se disuelve la parafina.

• Por lo anterior surge la necesidad de buscar un solvente

común de la cera de parafina y del alcohol.
 ACLARACIÓN

• Solvente: XILOL.

• Con la aclaración entonces, se somete a la acción

del xilol la muestra y queda eliminado el alcohol,
y en su reemplazo el solvente, xilol.
 PRE INCLUSIÓN

• La parafinan es una sólida a temperatura

ambiente y tiene un punto de fusión a 55-50
grados centígrados.

• Se requiere que la parafina penetre a todos

los intersticios intra o extracelulares para darle
consistencia al tejido.
 INCLUSIÓN

• Consiste en mantener al tejido en el centro de

un bloque sólido de parafina; se deja
solidificar.
 SECCIÓN
• Al enfriarse la parafina, se endurece y con ella se
endurece el fragmento orgánico de la muestra
constituyendo un “bloque” compacto de parafina
que se presta para ser cortado.
 ADHESIÓN

• Las tiras de cortes de parafina con el tejido

incluido se depositan sobre la superficie de
agua caliente en un baño de flotación para
eliminar los pliegues y extender el tejido;
luego se separa cada corte y se levantan con
un portaobjeto
 TINCIONES
• Se trata de reacciones químicas o fenómeno de
absorción.
• Para el ojo humano, las longitudes de onda del
espectro visible van de 400 a 750 nanómetros.
 TINCIONES
• La mayoría de los colorantes empleados en
histología actúan como ácidos o bases
 TINCIONES
COLORANTES ÁCIDOS
• Ejemplo la eosina, colorante cargado en forma negativa, se
une a componentes celulares cargados positivamente.
• Estos componentes cargados positivamente se denominan
acidófilos, porque tienen afinidad por los colorantes ácidos.
• Por ejemplo, estos colorantes se unen a grupos aminos de las
proteínas.
• Estas proteínas pueden pertenecer al citoesqueleto de la
célula o hallarse en la matriz extracelular.
• Debido al elevado contenido de proteínas del citoplasma la
eosina es un excelente colorante citoplasmático.
 TINCIONES
COLORANTES BÁSICOS
• Ejemplo el azul de metileno, colorante cargado positivamente,
se une a componentes celulares cargados negativamente.
• Estos componentes cargados negativamente se denominan
basófilos, porque tienen afinidad por los colorantes básicos.
• Por ejemplo, estos colorantes se unen al núcleo y ciertas
regiones del citoplasma.
• Como caso particular, la hematoxilina no tiene carga, para
teñir un tejido se la une a un mordiente (fijador de colores)
que junto a la hematoxilina forman una laca.
• La laca es básica y por lo tanto se une a cargas negativas.
BIOPSIA DE PIEL SIN COLORANTES
BIOPSIA DE PIEL
CON EOSINA
 BIOPSIA DE PIEL
CON HEMATOXILINA - EOSINA
 TINCIONES ESPECIALES
• Tinción para amiloide: rojo congo.
• Tinción para glucógeno: PAS.
• Tinción para colágeno: Masson
• Tinción para cápsula de bacterias y hongos:
azul alciano y PAS.
• Gomori con metenamina-nitrato de plata:
glucógeno, mucina, membranas básales,
reticulina y elastina.
 GIEMSA
• La técnica de Giemsa está formada por varios colorantes: los
tintes neutros utilizados combinan el azul de metileno como
tinte básico y la eosina como tinte ácido, lo que da una amplia
gama de colores.

• Las células cebadas toman un color rojo.

WARTHIN-STARRY
 TINCIÓN Y MONTAJE

• Se trata de reacciones químicas o fenómeno

de absorción.

• Para el ojo humano, las longitudes de onda del

espectro visible van de 400 a 750 nanómetros.
 Toma de la Muestra
• En citología las células son obtenidas
raspando las mucosas mediante la
denominada triple toma de Wied, que
consiste en depositar sobre un portaobjetos
muestras obtenidas del fondo de saco vaginal
posterior, porción del ectocérvix y endocérvix.
Fijación de la Muestra
 Tinción de Papanicolaou

• Hidratación
• Tinción nuclear
• Deshidratación
• Tinción del Citoplasma
• Aclaramiento
 Características

• Es una tinción policromática.

• La coloración nuclear con hematoxilina
• Coloración citoplasmática con Orange y EA.