COPROCULTIVO -

MIELOCULTIVO

Dra. ICELA MARISSA RODRÍGUEZ HARO

L A B O R ATO R I O D E B A C T E R I O L O G Í A
D E PA R TA M E M N T O M I C R O B I O L O G Í A Y PA R A S I T O L O G Í A
FA C U LTA D D E C I E N C I A S B I O L Ó G I C A S
UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
 COPROCULTIVO

 Es el método más útil y el indicado para el aislamiento de

enteropatógenos.

 Este aislamiento no presenta mayores dificultades si se

siguen los lineamientos prescritos para cada caso.

 Familia Enterobaceriaceae.

 Esta presentación esta orientada a el aislamiento e

identificación primaria de Salmonella, bacteria que ha
demostrado ser agente etiológico de un alto porcentaje de
infecciones entéricas.
PATÓGENOS PRIMARIOS
Salmonella
 Patógenos Humanos Ambientales
Calymmatobacteium Aterococcus
Cedecea Budivicia
Citrobacter Moellerella Buttiaxella
Edwardsiella Morganella Obesumbacterium
Enterobacter Plesiomonas Phagia
Escherichia Proteus Trabulsiella
Ewingelia Providencia
Hafnia Rahnella
Klebsiella Salmonella
Kluyvera Serratia
Leciercia Shigella
Yersinia

Fitopatógenos
/Asociados a plantas Patógenos de insectos
/ Endosimbiontes
Brenneria
Dickeya Arsenophorus
Erwinia Buchnera
Pantonea Photorhabdus
Pectobacterium Sodais
Phlomobacter Wiggiesworthia
Saccharobacter Xenorhabdus
Samsonia
 Características Generales
Bacilos Gram negativos
Aerobios y anaerobios facultativos,
No esporulados,
Acapsulados (excepción: S. Typhi, Paratyphi C y algunas
cepas de S. Dublin).
Inmóviles o móviles con flagelos peritricos,
Ampliamente distribuidas: plantas, suelo, agua y en el
intestino del hombre y animales.
Características Bioquímicas

 Oxidasa negativas
 Reducen los nitratos a nitritos.
 Fermentan la glucosa con o sin producción de
gas
 No fermentan de lactosa
 Producen o no de H2S
 Catalasa positivo
 Negativas para indol, VP, fenilalanina y ureasa
 Características culturales

 Crecen en medios simples o comunes.

 Colonias: lisas (S) y rugosas (R)
 Tamaño: grandes, 4-5mm de diámetro,
redondas, convexas, brillantes (S).
 Rugosas (R): bordes festoneados, rugosas,
más planas.
 Temperatura: 37ºC
 Atmósfera: aerobia
 Caracterización serológica

Antígeno O: Antígeno somático, estable al calor, en la pared celular

Antígeno H: Antígeno flagelar, lábil al calor, en el flagelo
Antígeno Vi: Antígeno superficial de envoltura, polisacárido lábil al calor
Serotipos
 SEROGRUPOS

 Grupo B: 4 Salmonella typhimurium

S. paratyphi B

 Grupo D: 9 S. enteritidis
S. typhi

 Grupo A: 2 S. paratyphi A
 PATOGENIA
GASTROENTERITIS

 Intoxicaciones alimentarias: vómito, diarrea.

 Puerta de entrada: vía oral.
 Invasión y multiplicación (intestino delgado).
 Incubación 6-48 h.
 No complicada: Curación espontánea (3-15d).
 Estado portador: raro.
 FIEBRES ENTÉRICAS:
 Puerta de entrada: vía oral.
 Incubación: 10-14d (3d-3s).
 Fiebre y signos inespecíficos: cefalea, mialgias,
anorexia (1 semana) .
 Fiebre alta, estupor, hepatoesplenomegalia. Signos
gastrointestinales (3-4 semanas).
 Complicaciones tardías: hemorragia, perforación
intestinal.
 Estado portador.
• S. typhi (no se le conoce reservorio animal), limitada a
humanos, ocasiona la fiebre tifoidea
• Fiebre paratifoidea (limitada a humanos) ocasionada
por S. paratyphi menos severa.
 MECANISMOS DE TRASMISION

 Hombre, único huesped

 Fecal – oral
 Ciclo corto: ano – mano – boca
 Ciclo largo: contaminación por aguas servidas –
alimentos, verduras de tallo corto, etc
 PORTADORES
 Convalecientes:
 S. typhi. 50%-10% (1m-3 m).
 Otras especies: 40%-5% (1m-3 m).
 Crónicos:
 S. typhi. 3%.
 Otras especies: adultos 1%; niños
< 2 a 6%.
 Muestras para aislamiento
 Alimento, suelo, agua.
 materia fecal, ganglios mesentéricos, bilis.
 Septicemia: hígado, bazo, pulmón, corazón, hueso
largo (médula ósea).
 Aves: huevos, órganos, pollitos: saco vitelino,
cama.
 Abortos: placenta, fetos, líquido amniótico,
hisopado vaginal.
DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO
Salmonelas entéricas:
Diagnóstico Directo
 Muestra: Heces (Coprocultivo).
Sangre - Hemocultivo
Médula ósea - Mielocultivo
 Cultivo: medios selectivos, diferenciales, de
enriquecimiento.
 Identificación:
 Bioquímica (género).
 Serológica (grupo).
 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Y SEROLÓGICA DE
ENTEROBACTERIACEAE (COPROCULTIVO)
Muestra:

DC
Medio de
XLD enriquecimiento
selectivo:
HE
Caldo selenito
MacConkey

Incubar a 37ºC x 18-24 hrs

Incubar a 37ºC por

Incubar a 37ºC por
18-24 hrs
18-24 hrs
Colonias transparentes
Colonias rojas y secas
e incoloras
Medio de transporte
Cary Blair
Stuart Agar SS
Amies TSI / LIA Cultivo puro
TSI / LIA Cultivo puro
Incubar a 37ºC por
18-24 hrs
SEROLOGÍA
SEROLOGÍA
Colonias transparentes
e incoloras
Salmonella E. coli
Shigella enteropatógeno*

TSI / LIA Cultivo puro

SEROLOGÍA
Salmonella
 El coprocultivo se utiliza para búsqueda de
portadores asintomáticos.

 La muestra de heces deberá colectarse en la

segunda y tercera semana de la infección.
 OBTENCIÓN Y TRANSPORTE DE LA MUESTRA
PARA EL COPROCULTIVO

 Los EP en el lumen intestinal sufren antagonísmo de la

flora normal y al salir su viabilidad disminuye, por el
cambio de temperatura y pH.

 Para superar estos inconvenientes, es necesario utilizar

un medio de transporte que prolongue la viabilidad del
patógeno.

 El medio para obtener la muestra es CARY-BLAIR.

 Es importante obtener material fecal con moco que se

encuentra en las paredes de la ampolla rectal.
 El hisopo se introduce en el espesor del medio hasta el
fondo del tubo, en estas condiciones, el patógeno
permanece viable por varios días a Tº ambiental.
Identificar con código la muestra correspondiente
 SIEMBRA
PRIMARIA

• Los medios de cultivo recomendados para la siembra son

muchos y variados: Xilosa Lisina Desoxicolato (XLD), que
puede ser reemplazado con Eosina Azul de Metileno (EMB),
al parecer de excelentes resultados para Shigella, igualmente
el Desoxicolato Citrato (DC), Sulfito Bismuto (SB) y Mac
Conkey (Mc) para E. coli EP, ET, EH y EI.

• La superficie del medio de cultivo a usar deberá estar

completamente seca antes de proceder a la siembra.

• Se anota el código y se incuba a 35-37ºC por 18-24 horas

 MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
SELECTIVO
• El medio de enriquecimiento es necesario para SALMONELLA

• El caldo selenito permite el crecimiento de Salmonella typhi y

de otras Salmonellas

• Antes de usar el caldo selenito, es importante tener en cuenta

el color (amarillo claro y transparente), ya que el medio
oxidado (rojizo) tiene capacidad inhibitoria, por lo tanto no
debe ser usado.

• Se anota el código y se incuba a 35-37ºC por 18-24 horas

• Importante.- la prolongación de la incubación del caldo

selenito por cinco días mejora en muchos casos la
recuperación de Samonella en especial S. typhi.
 SIEMBRA A PARTIR DEL MEDIO DE
ENRIQUECIMIENTO SELECTIVO
• Los medios de cultivo que se utilizan para sembrar a partir del
caldo de enriquecimiento, son más inhibidores de la flora en
general y particularmente de la coliforme y están orientados al
aislamiento de SALMONELLA

• El más utilizado es Salmonella-Shigella (SS) agar, el cual

permite el crecimiento de Salmonella typhi y otras Salmonellas

• Se anota el código y se incuba a 35-37ºC por 18-24 horas.

• La superficie del medio SS agar deberá estar

completamente seca antes de proceder a la siembra
 PRUEBAS BIOQUÍMICAS

• Los medios que se recomiendan son Triple Azucar Hierro (TSI)

y Agar Lisina Hierro (LIA).

• Estos medio incluyen varias pruebas bioquímicas que

permiten orientar fácilmente el diagnóstico de Salmonella,
Shigella o Escherichia coli.

• Otras pruebas bioquímicas que superan los 50 deberán ser

realizadas a otros niveles, tales como, en un laboratorio de
Referencia.

• La diferenciación bioquímica comprende los siguientes pasos:

• SELECCIÓN DE COLONIAS
• INOCULACIÓN DE LOS MEDIOS TSI y LIA
• LECTURA, SIMBOLIZACION E INTERPRETACIÓN DEL TSI y LIA
 Incubar a 37ºC durante 24 -48hrs

K/A K/A A/A+, - A/A+, - K/A-, + A/A+, +

R/A R/A+ K/A+ K/A K/A
A. Anaerogénicos
K/A - + K/K - S. typhi

B. Aerogénicos
K/A ++ ++++ K/K - Salmonella sp.
A/A ++ ++++ K/A - Citrobacter sp.
K/A ++ ++++ R/A - Proteus mirabilis
A/A ++ ++++ R/A - Proteus vulgaris

A. Anaerogénicos
K/A - - K/K - Shigella

B. Aerogénicos
A/A ++ - K/K + E. coli
A/A ++++ - K/K - Klebsiella
A/A +++ - K/K - Enterobacter
K/A + - K/A - S. paratyphi A
 PRUEBAS SEROLOGICAS
• El trabajo de identificación serológica debe enfocarse
teniendo en cuenta dos necesidades: CLINICA (inmediato)
y EPIDEMIOLOGICA (mediato).

• La necesidad clínica se resuelve por el laboratorio clínico u

hospitalario y la epidemiológica por el laboratorio central de
Referencia.

• Comprende los siguientes pasos:

• PREPARACIÓN DE LA LAMINA
• PREPARACIÓN DE LA SUSPENCIÓN BACTERIANA
• REACCIÓN DE AGLUTINACIÓN
• Para mejor uso de los sueros inmunes, se debe
seguir el siguiente esquema:

• Salmonella typhi:
K/A- , + K/K - Polivalente D – Vi

• OTRAS SALMONELLAS:
K/A ++ , ++++ K/K - Polivalente B, C1, C2, D, E

• Bioserotipo PARATYPHI A:
K/A + , - K/A - Polivalente A
 MIELOCULTIVO
Es el cultivo del aspirado de médula ósea.
Se considera como el mejor método para el aislamiento
de Salmonella en los pacientes con fiebre tifoidea y
paratifoidea.
Aunque el procedimiento produce una molestia
transitoria, en general es bien tolerado y los cultivos son
más rápidamente positivos.
Se recomienda sea practicado por personal con
experiencia.
Pueden ser positivos aún cuando los hemocultivos sean
negativos.
A.- MATERIAL NECESARIO: Jeringa y aguja estéril,
algodón, alcohol, u otro antiséptico, xylocaína, tubo
de vidrio o frasco pequeño estéril de cierre
hermético.
B.- TÉCNICA: El especialista seleccionará el sitio
anatómico de punción (esternón, cresta ilíaca).
C.- NÚMERO DE MUESTRAS Y/O VOLUMEN: Es
suficiente con una muestra de aproximadamente 1
mL.
D.-TRANSPORTE: Se enviará inmediatamente al
laboratorio, de no ser posible se puede mantener en
heladera, hasta 2-4 hs.
E.- OBSERVACIONES:
• No se deben utilizar medios de transporte.
• No se deben conservar a temperatura ambiente o en
estufa.
• No se colocarán en formol u otras sustancias utilizadas
habitualmente para estudio anatomopatológico ni se
agregará suero fisiológico.
 Fiebre Tifoidea

Diagnóstico:
 Hemocultivo 50 – 70% ( 1 semana)
 Mielocultivo 90 – 98% ( 1 semana)
 Coprocultivo 85% ( 3 semana)
 Urocultivo 3 - 5% primeros 3 días
 Medios Diagnósticos
Porcentaje de cultivos positivos en relación al tipo de
muestra y al tiempo de obtención de la misma

Cultivos 1ª semana 2ª semana 3ª semana 4ª semana

Hemocultivo 50 – 70 20 - 27 0–7 0
Mielocultivo 90 90 90 81
Coprocultivo 12 – 15 45 – 60a 25 – 60a 27
Urocultivo 3–5 0 0 0
Biopsia piel 0 90 90 0
a- niños
 El aislamiento de S. typhi a partir de tejido de
médula ósea (mielocultivo) tiene una sensibilidad
del 80% al 95% y una especificidad del 100%, se
considera el estándar de oro para el diagnóstico
de fiebre tifoidea.

 Es recomendable realizar un mielocultivo en

aquellos casos en los que existe alta sospecha
clínica de fiebre tifoidea con reportes de
hemocultivos negativos.
 La confirmación de los casos se realiza mediante
el aislamiento de Salmonella typhi o S. paratyphi
en los hemocultivos o en otros sitios estériles
como MIELOCULTIVO.

 Los estudios serológicos basados en anticuerpos

aglutinantes (prueba de Widal) son de baja
sensibilidad y por lo general tiene poca utilidad
diagnóstica, por lo que no debe utilizarse para la
confirmación diagnóstica de los casos.
 AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN BIOQUÍMICA Y SEROLÓGICA DE
Salmonella typhi (MIELOCULTIVO)

LECTURA
Turbidez o película (Fase líquida)
Manto o colonias (Fase sólida)

Agar SS
Obtención de muestra En Medio Bifásico TSB/TSA
punción de médula ósea Inclinar 10 minutos Incubar a 37ºC por
incubar a 37ºC hasta 18-24 hrs
los 7 días
Observar cada 24 Colonias transparentes
horas e incoloras

TSI / LIA Cultivo puro

SEROLOGÍA

Salmonella