Respuesta proliferativa a anticuerpos

anti CD3 y otros.

• Consiste en cultivar los linfocitos de los
pacientes en un medio de enriquecimiento
conjuntamente con anticuerpos anti CD3 y
anti CD28 o TCR quienes van a actuar
directamente con los receptores de lo
linfocitos T activando su mecanismo de
mitosis mediante la incorporacion de timidina
triatada.
 Respuesta proliferativa a antígenos
toxoide tetánico.
• Consiste en cultivar los linfocitos de los
pacientes en un medio de enriquecimiento
conjuntamente con el Ag toxoide tetanico
quien va a actuar con sus receptores de
membrana de los linfocitos T activando su
mecanismo de mitosis mediante la
incorporacion de timidina triatada.
 Medios de cultivo
• Tc199
• Rpmi
• Mem
• Ham f10
• Dulbecco
 Anti CD3
100 ul
100 ul

37ºC 5 –
7 % CO2 48 – 72 H en humedad
Filtros de cosecha

25 ul

6H

Liquido centello
Índice de estimulación de 3 o mayor es
generalmente considerado normal
 Metodo enzimatico
adenosindeaminasa
• La adenosina deaminasa ADA, reacciona con
adenosina para producir inosina y liberar
amoniaco.
• Los iones amonio que se forman y valoran por el
método de berthelot modificada por Giusti y
Galanti , donde el amoniaco en un medio alcalino
reacciona con el fenol e hipoclorito de sodio
formando azul de indofenol, el catalizador es el
nitroprusiato de sodico. Se lee 630 nm.
 Blanco Standar Blanco Blanco Muestra Muestra
reactivo (ml) adenosina Muestra (ml) D (ml)
1: BA – (ml)
2: BR – 3: STD –(ml)4: BMx(ml)– 5: Mx – 6: Mxd
•Buffer 0.5 ----- ----- 0.5 ------ ------
fosfato
BR STD BA BM MX MXd
•Sol. ------ ------- 0.5 ------ 0.5 0.5
Adenosina
•Standard ------ 0.5 ------ ------- ------- -------

•Muestra ----- ------ ------ 0.25 0.25 0.25

Mezclar, tapar los tubos e incubar a 37°C por 1 hora
BR STD BA BM MX MXd

Reactivo de color 1 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

Reactivo color 2 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

BR STD BA BM MX MXd
Tipo de muestra Punto de corte

Liquido Pleural Positivo > 40UI/L

Liquido Pericárdico Positivo > 40UI/L

Liquido Peritoneal Positivo > 40UI/L

LCR Positivo > 9.6UI/L

 Cuantificación de inmunoglobulinas
• Inmunodifusion radial: Se colocan estándares
de concentración conocida del antígeno
(hoyos 1-4) en un gel que contiene
anticuerpos contra él, para que se formen
anillos de precipitado, cuyo diámetro depende
de la concentración del antígeno.
Inmunoglobulina: Ig G

5 ul 5 ul
std std
alto medio

Anti Ig G

5 ul 5 ul
mx std
probl. bajo
• A punto final: 48h

Alto
Alto Medio
Medio Bajo
Bajo Mues
Mx
mg/dl
mg/dl gr/dl
gr/dl gr/dl
gr/dl mg/dl
tra

IgIgGG 2350
2350 1155
1155 200
200 1050
x

diametro
Diametro 8.7
8.7 6.5
6.5 4.0
4.0 6.2
6.2
mm
(Diametro)2 76 42 16 38
(Diametro)2 76 42 16 38
mm
• A tiempo limitado: 18h

Alto
Alto Medio
Medio Bajo
Bajo MxMx
mg/dl
mg/dl gr/dl
gr/dl gr/dl
gr/dl mg/dl
mg/dl

IgIgGG 2350
2350 1155
1155 200
200 1000
x

Diametro
Diametro 7.8
7.8 6.3
6.3 3.7
3.7 6.0
6.0
mm
mm
• Nefelometría: basado en la dispersión de la luz
que genera al atravesar los complejo
insolubles Ag-Ac y se mide la luz desviada
 Blanco Calibrador Calibrador Blanco Muestra
calibrador 1 (ul) 2 (ul) muestra
(ul) (ul)
Calibrador 1/51 20 20 20 ------ -----

Anti
BC Ig G dil. C1 ----- C2500 500 BMX ----- 500MX

Buffer de blancos 500 ----- ------ 500 -----

Muestra ----- ------ ----- 20 20

incubar a 30 min +/- 5 temperatura ambiente

C2 BMX MX
BC C1

1: BC – 2: C1 – 3: C2 – 4: BMx – 5: Mx
 DISMINUIDO AUMENTADO
Ig G •Agammaglobulinemia •infeccion o inflamacion cronicas
•Leucemia •Hiperinmunizacion
•Mieloma •Mieloma multiple por IgG
Inmunoglobulinas
•preeclampsia Valores normales
•Enfermedad hepatica artritis reumatoidea
Ig M •Agamaglobulinemia •Mononucleosis infecciosa
Ig G
•Leucemia 560 a 1800 mg/dL
•Linfoma
•Mieloma •Macroglobulinemia
•Mieloma
Ig M 45 a 250 mg/dL
•Artritis reumatoidea

Ig A
Ig•Agammaglobulinemia
A 100 a 400 mg/dL
•Infecciones crónicas, que comprometen
•Deficiencia hereditaria de IgA especialmente el tracto gastrointestinal
•Mieloma •Enfermedad intestinal inflamatoria
•Gastroenteropatía por •Mieloma
pérdida de proteínas
Valoracion de la produccion in vitro de
inmglobulinas
• eleccion celulas de mieloma sin capacidad de
sintetizar hipoxantina-guanina-fosforribosil-
transferasa. (HGPRT). Aminopterina anula
posibilidad de sobrevida. hipoxantina La union
de un linf. y una C.M elegida el linf. le dara la
enzima HGPRT y las C.M que no se unieron no
sobreviviran y solo nos queedaran los
hibridoma, y este hibridoma nos daran Ac
monoclonales en el sobrenadante
Proteina A S. aureus---- mitogeno.
• Podemos usar la hemaglutinación si
producimos anticuerpos contra grupos
sanguíneos para serotipificar
• Podemos dar por hecho que es funcional si
comparamos nuestro resultado con otros
otras pruebas stadarizadas como:
• ELISA, Western Blot, IF y/o Citometría de flujo