SECUENCIACIÓN ADN

MÉTODO SANGER
• Se basa en el empleo de didesoxinucleótidos trifosfato (ddNTPs)
como terminadores de la cadena de ADN
• Para llevarla a cabo se necesitan:
• El ADN que se quiere descodificar en forma monocatenaria
• La enzima ADN-polimerasa
• Un cebador o primer
• Los cuatro dinucleótidos (dATP, dCTP, dGTP y dTTP)
• Nucleótidos didesoxi (ddATP, ddCTP, ddGTP y ddTTP)
ENLACE FOSFODIÉSTER DEL ADN
SECUENCIACIÓN POR TERMINADOR
FLUORESCENTE
• Se caracteriza porque se marcan cada uno de los cuatro
didesoxinucleótidos que terminan la cadena con un colorante
fluorescente diferente, con fluorescencias a diferentes longitudes de
onda.
• Se puede llevar a cabo en una sola reacción, en lugar de en cuatro
reacciones.
SECUENCIADOR HELICOS HIGH SPEED
SECUENCIADOR DE PACIFIC BIOSCIENCIES
SECUENCIADOR DE OXFORD NANOPORE
• La empresa Oxford Nanopore está desarrollando unos chips que contienen
muchas proteínas con nanoporos de α-hemolisina; una exonucleasa se
acopla con el nanoporo. Esta enzima es responsable de capturar las hebras
de DNA, capturando secuencialmente bases individuales de la hebra, y
dirigiendo las bases a la apertura del nanoporo. Un sensor de cyclodextrina
se une covalentemente a la superficie interior del nanoporo. Esto actúa
como el sitio de unión para las bases del DNA que pasan por el poro.
Mientras que la exonucleasa dirige bases individuales de DNA en serie por
el nanoporo, cada base se une en el sitio de unión. Durante la fase de
unión, el paso por el nanoporo se interrumpe, creando una señal
característica para cada tipo de base. Estas señales se distinguen
fácilmente. El rastro de corriente eléctrica proporciona una grabación de la
secuencia de bases pasando a través del nanoporo.
SECUENCIADOR OXFORD NANOPORE

• MinION utiliza la tecnología de secuenciación mediante nanoporos,

mediante la cual se analiza el ADN de forma directa al empujarlo a
través de un poro suspendido en una membrana. Los nucleótidos o
letras que componen el ADN se diferencian debido a los cambios de
corriente eléctrica que se producen durante su paso por la
membrana. La energía necesaria para su funcionamiento se extrae de
un puerto USB del ordenador al que está conectado y además
dispone de su propio programa de análisis. El sistema está diseñado
para detectar muestras complejas como sangre o plasma y se puede
adaptar para secuenciar ADN, ARN, detectar proteínas y otras
técnicas basadas en la detección por nanoporos.