Espectroscopía Ultravioleta - Visible

Los métodos espectroscópicos son un amplio grupo de técnicas

analíticas. La espectroscopía UV-Visible, infrarroja (IR) y de resonancia
magnética nuclear (RMN) y la espectrometría de masa (EM), son las técnicas
más importantes que se utilizan actualmente para obtener información sobre
una determinada sustancia.

La espectroscopía es un término general que trata de las distintas

interacciones de la radicación con la materia. Esa interacción nos da
información que nos puede servir para obtener datos o parámetros que
pueden contribuir para poder elucidar la estructura de un compuesto.

1
Propiedades generales de la radiación electromagnética (RE).

Muchas de las propiedades de la RE se explican con el modelo clásico

de onda sinusoidal, que utiliza parámetros como la longitud de onda (λ), la
frecuencia (), la velocidad y la amplitud (A).
Para muchos fines, la RE se representa como un campo eléctrico y
otro magnético que están en fase, con oscilaciones sinusoidales en ángulo
recto de uno respecto de otro.

2
Parámetros ondulatorios
La Amplitud, (A), es la longitud del vector eléctrico en el máximo de la
onda.
La frecuencia, (), es el número de oscilaciones del campo por seg. La
unidad habitual de  es la inversa del seg.(s-1), o hertz (Hz), que corresponde a
un ciclo por seg.
La longitud de onda, (), es la distancia lineal entre dos puntos
equidistantes de ondas sucesivas.

Las unidades usadas difieren según las regiones espectrales.

Por ej., el Angstrom, A (10-10 m) es adecuado para los rayos X y UV corta, el
nanómetro, nm (10-9 m), se usa con las radiaciones UV cercano y visible y el
micrómetro, m (10-6 m), es útil para la región infrarroja.

La RE también se puede expresar en número de onda, n = 1/  (cm)

Por ej: una RE con una = 200 nm  n = 50.000 cm-1 (50.000 ondas p/cm).
Hay una relación entre la , , n y la velocidad de la luz, c (3 .1010 cm/seg.).
=c/=nc
Por ej:
= 200 nm,  = 3 .1010 (cm/seg)/2.10-5 (cm)= 1.5 1015 seg-1 (ondas por seg.)
3
Relación entre energía y radiación
La conocida Relación de Bohr entre la energía de la RE y la  está
dada por:

E = h  = h c/ ,

en donde h es la Ctte de Planck y c es la veloc de la luz en el vacío

Por ej: la E (Kcal/mol) asociada a una RE de  = 400 nm es:

E (Kcal/mol) = 28.63 103 (kcal/mol nm)/ 400 (nm)= 71.6 kcal/mol

la E (Kcal/mol) asociada a una RE de  = 200 nm es:

E (Kcal/mol) = 28.63 103 (kcal/mol nm)/ 200 (nm)= 143.15 kcal/mol

4
El Espectro Electromagnético

5
 Métodos espectroscópicos basados en la RE

Región Long. de onda Energía Tipo de excitación

(kcal/mol)
-4 -3 7 6
Rayos cósmicos 10 – 10 nm 28 10 – 28 10 Ionización
Rayos  10-3 – 10-1 nm 28 106 – 28 104 Ionización
4 2
Rayos X 0.1 – 10 nm 28 10 – 28 10 Ionización
UV lejano (vacío) 10 – 200 nm 2.8 - 143 Electrónica
UV cercano (cuarzo) 200 – 400 nm 143 - 71 Electrónica
Visible 400 – 800 nm 71 - 36 Electrónica
Infrarrojo cercano 800 nm – 2 m 36 – 14.1 Deformación de
enlace
Infrarrojo fundamental 2 m – 16 m 14.1 – 1.8 Deformación de
enlace
Infrarrojo lejano 16 m – 300 m 1.8 – 0.95 Rotacional
-4
Microondas  1 cm 10 Transición del spin
Resonancia  500 cm 10 -6 electrónico y nuclear
magnética nuclear
(RMN)

6
Clasificación y origen del espectro

Existen dos clases de espectros: los de absorción y los de emisión.

Cuando los átomos o moléculas se someten a una RE intensa pueden
absorber energía pasando a un estado excitado. Para retornar a su estado
normal ellos pueden emitir radiación en forma de luz. Las moléculas excitadas
producen espectros de bandas denominados fluorescencia y
fosforescencia.
Espectro de absorción
Cuando una RE continua pasa a través de un material transparente
que puede contener alguna sustancia, una porción de la radiación puede ser
absorbida y la radiación residual dará un espectro de absorción. Durante el
proceso de absorción los átomos o moléculas pasan de un estado de baja
energía (estado fundamental) a uno de mayor energía (estado excitado).
La absorción o emisión de RE se presenta solo en múltiplos enteros
de una cantidad única de E llamada quantum, el cual es característico para
cada especie.
Tanto en los espectros de absorción como de emisión se cumple la
relación de Borh:

h  = Ee - Ef
7
 En una molécula, la absorción de energía puede producir 3 tipos de
transiciones:
a) transiciones electrónicas “salto” del electrón hacia un nivel superior de E

b) transiciones vibracionales ”estiramientos y deformaciones” de enlaces

c) transiciones rotacionales “cambios” en los modos normales de rotación.

Las transiciones electrónicas son las que necesitan de mayor cantidad

de E, mientras que las de menor E son las rotacionales.
La E total de la molécula estará dada por:

E(t) = E (e) + E (vib) + E (rot)

El espectro rotacional, está asociado con cambios que se presentan en
los est. rotacionales sin modificar los estados vibracionales y electrónicos. El E
entre los est. rotacionales es una cantidad pequeña, 1.8 - 1 10-4 Kcal-mol ( IR
lejano).
El espectro vibracional, está asociado con transiciones en los estados
vibracionales acompañados muchas veces por cambios en los est rotacionales.
Estos se presentan en la zona del IR fundamental. Son de utilidad para determinar
la presencia de grupos funcionales en las moléculas orgánicas.
8
 El espectro electrónico involucra la transición o “salto” de un electrón
desde su Ef a niveles electrónicos más elevados que representan los estados
excitados 1º, 2º, etc.. En cada nivel electrónico existe un estado vibracional
fundamental y varios excitados con sus respectivo estado rotacional
fundamental y varios excitados.
Para producir cambios en los niveles electrónicos hay que irradiar con
RE de la zona del UV-Visible

9
Región UV-Visible

UV vacío UV cuarzo Visible

100 nm 200 nm 400 nm 800 nm

Espectros de absorción:
Los datos espectrales de absorción pueden presentarse como una
gráfica de Abs. o log del coeficiente de extinción en función de . La conocida
ley de Lambert y Beer establecen que la fracción de luz incidente que es
absorbida por una muestra es proporcional al nº de moléculas encontradas en
su camino

A = log P0 / Pt =  b c
Donde: A = absorbancia, P0= intensidad de RE incidente, Pt= intensidad de RE
transmitida,  = coeficiente de extinción molar, b = paso óptico, c = conc. molar

10
 4 Espectro de Bixina en EtOH

3
456
Ab. HOOC
434 482
2

Bixina
COOCH3
1

0
200 300 400 500 600
Long. de onda

Los datos espectrales se presentan también en forma abreviada como:

 maxEtOH = 456 nm ( = 25.500)
La intensidad de Abs. de una transición electrónica a cualquier  está
determinada por el . La Abs max. de una banda corresponde a la transición mas
probable.
Así una transición con valores de  entre 101 – 102 se dicen que son
transiciones prohibidas y las que tienen valore de  entre 103 – 106 se dicen que
son transiciones permitidas

11
Instrumentación
Espectrofotómetro de simple haz

12
Espectrofotómetro de doble haz

13
Espectrofotómetro de Arreglo de Diodos

14
Celdas y solventes
Para el registro de los espectros se usan por lo gral dos celdas, una
como testigo (solvente) y otra para la muestra. En esta forma se compensa la
absorción por el solvente y las pérdidas por dispersión y reflexión.
Para trabajar en la zona del UV se deben utilizar celdas de cuarzo,
mientras que para trabajar en la zona del visible se pueden utilizar celdas de
vidrio.

15
 Los solventes más utilizados en la zona del UV-Visible son: agua,
metanol, etanol, isopropanol, acetonitrilo, cloroformo, dioxano, hexano,
heptano, etc.
El punto de corte de estos solvente se encuentran en el intervalo de 210
a 240 nm.
Las pequeñas variaciones de temperatura del laboratorio no afectan
sensiblemente a los espectros y el termostato solo es necesario para estudios
cinéticos

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Cromóforos y transiciones
Se conoce que las sustancias coloreadas deben su color a la
presencia de uno o varios enlaces no saturados
Se denominan cromóforos ( “chroma” color, “phoros” llevar) a los
grupos que tienen uno o varios en laces no saturados permitiendo de esta
manera una serie de transiciones electrónicas. Ej:
O
C C C O N
O

CH N

N N

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 Los auxocromos ( “auxanien” aumentar) son grupos que no tiene color
por sí mismo pero que son capaces de incrementar el color cuando hay presentes
grupos cromofóricos. Los más frecuentes son:

OH O R NH2 NR2
Transiciones electrónicas
Las transiciones electrónicas son las responsables de la absorción de
RE por parte de las moléculas orgánicas.
Las moléculas orgánicas saturadas (alcanos), no presentan ninguna
absorción entre los 200 a 800 nm. porque presentan uniones tipo (los
electrones en este tipo de uniones se encuentran fuertemente unidos a los
átomos) y por lo tanto se necesita una elevada E para producir la transición

Diagrama de E del orbital

* molecular para el Ef, Ee (s)
y Ee (t) para la transición
h * del
135 nm
H3C CH3

18
Ef Ee (s) Ee (t)
Orbitales enlazantes y antienlazantes

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 Consideremos ahora moléculas tales como alcoholes, halogenuros de
alquilo, aminas, etc. Algunos compuestos representativos son:

.. .. . ..
CH3 CH2 OH
..
CH3 CH2 Cl .. . CH3 CH2 NH2
Etanol Cloruro de etilo Etil amina
Todas estas moléculas tienen en común, además de los enlaces ,
pares de e- no enlazantes, denominados e- tipo “n”. Estos pueden sufrir una
transición denominada :
n  *
Valore de max. y  para compuestos y que presentan
transiciones n *
Compuestos  max (nm) 
Alcoholes  185 100-200
Eteres  185 100-200
Aminas, tioles y 215 - 230 300 - 900
tioéteres
Cloruro de etilo 172 100
Bromuro de etilo 204 200
Ioduro de etilo 258 370 20
 En compuestos con enlaces insaturados (olefinas) aparecen las
transiciones   *. Las transiciones   * de mono-olefinas se producen
entre 170 - 200 nm. Por ej:

CH2 CH2 max = 180 nm

Etileno

Consideremos ahora el caso de una diolefina conjugada como el

butadieno.
CH2 CH CH CH2

4*

3*

h
217 nm
2

1
Ef Ee 21
22
 CH2 CH CH2 CH CH2 CH2 CH CH CH CH CH2
1, 4 butadieno 1,3,5 hexatrieno

max = 190 nm max = 250 nm

De lo anterior deducimos que a medida que se extiende la conjugación el

 máximo se irá desplazando hacia longitudes de onda mayores (menor E) o sea al
visible

   

23
 El -caroteno, presenta un max. = 456 nm, o sea absorbe en el
visible ya que posee 11 dobles enlaces conjugados
Consideremos ahora un cromóforo no saturado que contiene un
heteroátomo. El más importante es el grupo carbonilo (C = O) y como ejemplo
analizaremos el formaldehído que tiene los siguientes tipos de enlaces y
electrones
*
2 enlaces  C- H
.. .
O. 1 enlace  C - O *  max.= 285 nm
H C 1 enlace  C - O
H (   20)
2 pares de electrones n
n


24
 Las transiciones   * de las mono y poliolefinas poseen una elevada
absortividad molar ( entre 103 y 105) y por lo tanto son transiciones permitidas.
Las transiciones n  * ocurren a una menor E pero poseen bajos
valores de absortividad molar ( < 102) y por lo tanto son prohibidas. Los valores
de  pueden ser utilizados para diferenciar entre ambos tipos de transiciones.
Las transiciones electrónicas en sistemas carbonílicos ,  insaturados
pueden describirse en forma aproximada al butadieno. Como por ej:

O O
CH2 CH C H CH2 CH C CH3
Acroleina Metil, vinil cetona

maxEtOH = 220 nm (   5000)    *

maxEtOH = 330 nm (   200)  n  *

25
 Resumiendo y en forma general podemos considerar como las mas
importantes las siguientes transiciones electrónicas y las energías involucradas en
cada una
*
*

n


Esto no significa que todas las transiciones   *, n  *, etc,
necesiten cada una exactamente la misma E ya que los valores individuales
presentan ciertos desplazamientos con respecto al valor base y dependen de los
grupos sustituyentes que rodean a los enlaces. También el max se ve influenciado
por el estado físico de la muestra (gaseoso o solución ) y el tipo de solvente
empleado

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Efecto del solvente
El efecto del solvente está directamente relacionado al grado de
interacción soluto - solvente. Solutos no polares pueden interactuar con
solventes no polares a través de fuerzas de London. Solutos polares interactúan
con solventes no polares a través de interacciones dipolo - dipolo inducido y con
solventes polares a través de interacciones dipolo-dipolo y pte H.
A mayor interacción se pierde en los espectros parte de la estructura fina,
como consecuencia sería preferible el uso de solventes no polares tales como:
hexano, heptano, ciclohexano, etc.. Al mismo tiempo los solventes mas
convenientes (agua, etanol, etc) son los menos deseables debido a que tienden a
borrar la estructura fina del espectro

27
 Los efectos deben ser en el orden de la capacidad de los solventes de
formar puente H,
H2O, > MeOH > EtOH > CHCl3 > Hexano

Por ej: la acetona presenta max agua = 265 nm y una max.hexano = 280 nm (n  *)
Hay un corrimiento a <  cuando se incrementa la polaridad del solvente en este caso
O
(CH3)2 C CH C CH3
Oxido de mesitilo
Transición Hexano Cloroformo Etanol Agua 
  * 230 nm 238 nm 240 nm 244 nm  11.000
n  * 327 nm 315 nm 309 nm 305 nm  50

Las transiciones   * se corren siempre a >   corrimiento

batocrómico (rojo) cuando se incrementa la polaridad del solvente

Las transiciones n * se corren siempre a <   corrimiento hipsocrómico

(azul) cuando se incrementa la polaridad del solvente
28
y tabla 8-4 pag 179
oner fig 4.1 filmina org II

29
Características de absorción de los compuestos aromáticos
Compuesto Banda E2 Banda B
 (nm)   (nm) 
Benceno C6H6 204 7900 256 200
Tolueno C6H5CH3 207 7000 261 300
m-xileno C6H4(CH3)2 --- ----- 263 300
Clorobenceno C6H5Cl 210 7600 265 240
Fenol C6H5OH 211 6200 270 1450
Ion fenolato C6H5O- 235 9400 287 2600
Anilina C6H5NH2 230 8600 280 1430
Ion anilinio C6H5NH3+ 203 7500 254 160
Tiofenol C6H5SH 236 10000 269 700
Naftaleno C10H8 286 9300 312 289
Estireno C6H5C=CH2 244 12000 282 450

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Aplicaciones de las medidas de absorción
Análisis cualitativo: La espectroscopía UV-Visible tiene una aplicación algo
limitada para el análisis cualitativo ya que el nº de máximos de absorción es
relativamente pequeños. Por lo tanto, una identificación inequívoca es a menudo
posible. Sin embargo puede ser útil para identificar grupos funcionales que actúan
como cromóforos. Por ejemplo:

- Una banda de absorción débil alrededor de los 260 nm que muestre una
estructura fina constituye una evidencia de un anillo aromático

- Una banda débil a los 280 a 290 nm, que se desplaza hacia el azul, indica
firmemente las presencia de un grupo carbonilo

-La confirmación de la presencia de una amina aromática o de un fenol puede

obtenerse comparando los efectos del pH en los espectros

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 Análisis cuantitativo
La espectroscopía de absorción es una de las herramientas más útiles
y ampliamente utilizada en el análisis cuantitativo. Las características más
importantes incluyen:

1- Amplia aplicabilidad tanto a sistemas orgánicos como inorgánicos

2- Sensibilidades del orden de 10-4 a 10-7 M

3- De moderada a alta selectividad

4- Buena precisión (normalmente se encuentran incertidumbres relativas de 1 a 3 %)

5- Buena y adecuada adquisición de datos

6- No destructivo de la muestra

Campo de aplicación
Las aplicaciones son numerosas y abarcan casi todos los campos en que
se demanda información química cuantitativa.

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