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ENZIMAS

César Jerí Apaza


Notengo@usmp.pe
11/8/2018
Tabla de contenidos
I. Enzimas, clasificación.
II. Enzimas endocelulares y exocelulres.
III. Actividad enzimática. Especificidad.
IV. Sitio activo.
V. Isoenzimas. Proenzimas.
VI. Cinética enzimática. Efecto de la concentración del sustrato.
VII. Constante de Michaelis-Menten.
VIII. Efecto de la concentración de enzima, pH, temperatura.
IX. Inhibición y regulación del metabolismo.
X. Mecanismos de acción enzimática, efecto de los iones metálicos.
XI. Coenzimas. Regulación de la actividad enzimática.
XII. Compartamentalización celular.
XIII. Enzimología clínica
Fuentes de información
Historia
• 1700s estudios en la digestión de carne.
• 1800s conversión del almidón en azúcar por la saliva y
extractos de plantas.
• 1850s Louis Pasteur la fermentación, del azúcar hasta alcohol
es catalizado por fermentos.
• 1897 Eduard Buchner fermentación es promovida por
moléculas. Frederick W. Kuhne llamó a estas moléculas
ENZIMAS.
• 1962 Cristalización de la ureasa James Sumner.
¿Qué es una enzima?

• Es un tipo de proteína que actúa como catalizador de


reacciones químicas.
• Incrementa la velocidad de reacción sin cambiar el punto de
equilibrio.
• Como catalizador:
• Es específico para cada reacción. No necesariamente para un
solo sustrato, aunque muchas enzimas lo son.
• Tiene gran poder catalítico, transformando de 103 a 104
moléculas por segundo.
• Está sujeto a diversos mecanismos de regulación de modo tal
que no genere más producto que el necesario.
¿Qué hace un catalizador?
• Reduce la barrera de energía para una reacción por
lo que más moléculas alcanzan la energía de
transición.
• No tiene efecto sobre la posición de equilibrio
¿Como lo hace?
• Forzando la molécula a
un estado intermediario
que se parece al de
transición pero de menor
energía.
• Puede reunir dos
moléculas reactivas en la
orientación adecuada,
aumentando su
reactividad
• Orienta partes de la
molécula de forma
adecuada para alcanzar la
transición.
Modelos de actividad Enzimática

• Especificidad‼

• Modelo cerradura-llave: explica la especificidad, pero


no la catálisis. Emil Fischer
Modelos de actividad Enzimática

• Modelo de ajuste inducido: la enzima no acepta


simplemente el sustrato, sino que exige que este se
distorsione a algo cercano al estado de transición.
Cabe recordar
•Todas las enzimas son proteínas con
excepción de un pequeño grupo de
moléculas catalíticas de RNA.
•Se conocen mas de 3000 enzimas.
•Las enzimas son catalizadores biológicos
que aceleran la reacción.
•Las enzimas son altamente especificas y Rnasas
reaccionan solo con un sustrato para
formar un producto
•Las enzimas pueden acelerar acelerar la
reacción en más de 1017.
Importante
Las enzimas tienen un rango de magnitud de incrementar la reacción
de 5 a 17 ordenes de magnitud
Tipos de enzimas por acción
• Enzimas extracelulares, exocelulares o exoenzimas.-
tienen acción catalítica fuera de la célula. Ejemplo
amilasa.

• Enzimas intracelulares, endocelulares o endoenzimas.


Cuya acción catalítica se limita al interior de la célula.
¿Todas las enzimas siempre están activas?
• La enzima activa o completa es llamada holoenzima
• La Parte proteica (sin cofactor y/o coenzima):
apoenzima o apoproteina

• Un cofactor o coenzima que es muy relacionado o se


enlaza covalentemente a una proteína enzimática es
llamada grupo prostético.
Cofactores
Algunas enzimas requieren un componente químico adicional
denominado cofactores.
Coenzima
Las coenzimas actúan como portadores transitorios de grupos
funcionales específicos
CLASIFICACIÓN DE
LAS ENZIMAS
Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de transferencia de hidrógeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro

AH2 + B ⇄ A + BH2

Ared + Box ⇄ Aox + Bred


Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo químico (distinto del hidrógeno) de un
sustrato a otro

A-B + C ⇄ A + C-B
Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrólisis

A-B + H2O ⇄ AH + B-OH


Clase 4: LIASAS
Catalizan reacciones de ruptura o unión de sustratos

A-B ⇄ A + B
Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversión de isómeros

A ⇄ B

Fosfoglucosa isomerasa
EC 5.
Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unión de dos sustratos con hidrólisis simultánea
de un nucleótido trifosfato (ATP, GTP, etc.)

A + B + XTP ⇄ A-B + XDP + Pi


Especificidad y sitio activo
• Las reacciones se inician
cuando el sustrato se une al
sitio activo de la enzima.
sustrato
• El sitio activo es una enzima
porción espacial de la
enzima creada por la
coincidencia de varias
cadenas laterales de
amino-ácidos específicos.
Estos pueden no estar en
secuencia, pero los
dobleces de la proteína
enzimática los aproximan. productos
enzima
Localización enzimática
• Las enzimas ejercen su función
Na/K
Retículo ATPasa predominantemente en el
endoplasma interior celular. Mas aún lo
membrana
Glucosa 6 fosfatasa hacen en determinada
organela de la célula.
• Las enzimas que se encuentran
en el plasma o líquidos
diversos corresponden a
aquellas que se están
eliminando y muy pocas como
la LCAT (Lecitina colesterol acil
transferasa), LLP (Lipasa
lipoproteica), ejercen su
función a nivel plasmático.
Alfa
manosidasa Catalasa
Succinato deshidro-
Complejo Golgi Peroxisoma
genasa.Citocromo oxidasa
Mitocondria
Factores que modifican la reacción
enzimática

• La velocidad de una reacción mediada por


enzimas está influenciada por:

• Temperatura del medio


• El pH del medio
• Concentración de la enzima
• Concentración del sustrato
Temperatura

• No existe actividad enzimática a -273°C o


cero absoluto.
• A partir de esa temperatura los incre-
mentos provocan mayor actividad enzi-
mática. La que se expresa como coefi-

actividad
ciente de temperatura o Q10. Esto es, el
incremento de actividad por cada 10°C de
aumento de temperatura.
• En términos generales Q10 = 2, es decir que
por cada 10°C de temperatura la velocidad
se dobla.
• Existe una temperatura óptima tras la cual
los aumentos provocan desnaturalización
de la proteína enzimática y pérdida de la 0 70
actividad. temperatura
pH
• Cada enzima tiene un pH óptimo
de trabajo, el cuál es variable.
Las enzimas intra- celulares
trabajan entre 5 y 9 , las enzimas

actividad
digestivas pueden trabajar en pH
diferentes.

• Los extremos de pH afectan la


ionización de los centros activos
(-COO- (glutámico, aspártico)
NH3+ (arginina, lisina, histidina)
SH (Cisteína, metionina)).
0 14
pH

Enzima YX HH  Enzima YX  H  Enzima YX


pH ácido (inac) pH óptimo (activo) pH alcalino (inac)
Concentración de la enzima y
constante de equilibrio

• La concentración de la enzima incrementa la velocidad de la


reacción, pero no modifica la constante de equilibrio.
• Así, si la reacción se produce en ausencia de la enzima...
K1
SP
K 1
• La constante de equilibrio será:
K1 ( P)
Keq  
K  1 (S )
• Y, si la reacción se produce en presencia de la enzima...
K1
Enz  S  Enz  P
K 1
• La constante de equilibrio será:
Keq  K1
K 1  ( Enz )( P )
( Enz )( S )  (P)
(S )
Cinética química: cinética enzimática
• Las reacciones químicas son:
• De primer orden si son dependientes de la concentración de
sustrato
• De orden cero si son independientes de la concentración de
sustrato
• La cinética enzimática estudia la velocidad de las
reacciones catalizadas por enzimas, manteniendo
condiciones óptimas en la mayoría de factores: pH,
temp, tiempo, concent.de enzima, conc. de sustrato
etc.
Cinética enzimática.....
Concentración del sustrato
• Si se aumenta la concentración
del sustrato, manteniendo
constante las demás variables, la
velocidad inicial de reacción (Vi)
Vmax
aumenta hasta un valor máximo
(Vmax) el que se estabiliza.
• Se dice bajo estas condiciones que Vmax/2
la enzima está saturada con el
sustrato. Esto se produce de
acuerdo a la afinidad enzima Km. S
sustrato.

Primer Orden
orden cero
Leonor Michelis y Maud Menten (1913)
Ecuación de Michaelis-Menten
• La relación entre velocidad de reacción y concentración de sustrato
se describe en la fórmula:

v Vmax[ S ]
Km [ S ]

• Bajo estas condiciones Vmax se observa cuando todos los sitios activos
están llenos de sustrato. Toda la enzima está bajo la forma de [ES] y la Km
se define como concentración de sustrato a Vmax/2
• Vmax: es un índice de la eficiencia de una enzima. Es la velocidad cuando
todos los sitios activos están saturados, y es proporcional a la concentración
de la enzima. Sus unidades son unidades de velocidad.
• Km: es una medida inversa de la afinidad de la enzima por el sustrato. Una
baja Km indica alta afinidad entre enzima y sustrato. Las unidades de Km
son unidades de concentración.
Km: expresión de afinidad

Vmax

Vmax/2

Km. Km Glucoquinasa
S
(hígado)
Hexoquinasa
(cerebro)
La aplicación de la ecuación de
Michaelis Menten se basa en...

K1 K3
E  S  ES  E  P
K2 K4

• La concentración de sustrato es tan grande con respecto a la de enzima,


que la formación de ES no altera significativamente la concentración de
sustrato.
• Al inicio de la reacción la concentración del producto es tan insignificante
que la velocidad descrita como k4 puede ser ignorada.
• La velocidad de transformación de ES en E+P(k3) es el factor limitante de la
reacción.
• La formación de ES es rápida y reversible y es igual a la velocidad de
desaparición de ES.
Reacciones de multisustrato
• Captación indistinta..Cada sustrato será
captado en su momento, generalmente uno es
preferente:

• Hexoquinasa, glucosa? Galactosa?


Reacciones de multisustrato
• Captación ordenada de sustratos… para unir un sustrato debe
unirse otro primero

• Reacciones de oxidorreducción co-catalizadas por NAD


Reacciones de multisustrato
• Mecanismo ping-pong … cuando existe una
secuencia catalítica. La enzima se modifica por
persistencia de un fragmento del primer sustrato.

• Enzimas proteolíticas
Gráfica de Lineweaver Burk
• La gráfica de Lineweaver
Burk es usada para obtener
Vmax y Km.
• Se usa la inversa de la ecua- 1/v
ción de Michaelis Menten.
1 km 1 1
 . 
v Vmax [ S ] Vmax
• Cuando 1/v se grafica frente 1/Vmax
a 1/s se obtiene una recta,
donde la pendiente es
Km/Vmax. -1/Km 1/[S]
• La intersección en el eje de
y es igual a 1/Vmax y la del
eje de x es igual a 1/Km.
Inhibidores competitivos
• Estructuras semejantes al sustrato que compiten con él por el mismo
centro activo.
• Sus efectos pueden revertirse si se incrementa la concentración del
sustrato hasta ocupar todos los centros activos.
• La Vmax no cambia, pero si el Km porque se
necesita más sustrato.
1/V

v
inhibidor

1/Vmax

-1/Km 1/[S]
[S]
Inhibidores competitivos
Inhibidores no competitivos
• Estructuras diferentes al sustrato por lo que se unen a un sitio
independiente de la enzima.
• Ambos, sustrato e inhibidor pueden unirse a la enzima al mismo
tiempo. Su efecto no puede revertirse aumentando la
concentración del sustrato.
• No tiene efecto sobre la Km pero sí sobre la Vmax.

1/V

V
inhibido
r 1/Vmax

[S] -1/Km 1/[S]


Inhibición
no competitiva
Inhibidores irreversibles
• Reaccionan covalentemente con la cadena lateral de un aminoácido de
la enzima, para formar un complejo estable permanentemente
inactivado.
• Se les llama también substratos suicidas.
• Su efecto es igual al de un inhibidor no competitivo.

Efecto Clínico de los Inhibidores


Papel Clínico de las Enzimas
• Si bien es cierto las enzimas cumplen su actividad
en el interior celular, es posible encontrarlas en
los líquidos biológicos con cierta frecuencia.
• Todas las enzimas plasmáticas, las del LCR o
Pleural se encuentran en bajos niveles de
concentración –actividad- provenientes de los
tejidos ricos en ellas y generalmente de paso a un
proceso de destrucción hepática o eliminación
renal.
• Únicamente algunas enzimas como las del
metabolismo de lípidos (LCAT, LLP) o los
factores de coagulación ejercen su actividad en el
plasma o suero.
Elevación enzimática en el
plasma...
• La actividad enzimática en el plasma y otros líquidos
biológicos se produce por:
• Necrosis: destrucción celular y vaciamiento de las
enzimas como en el infarto de miocardio, hepatitis viral.
• Permeabilidad: aumento de permeabilidad de membrana
igual a necrosis.
• Sobre producción: mayor metabolismo en un tejido
-neoplasia-.
• Menor eliminación: no se elimina normalmente
-obstrucción biliar-.
• Incremento de células inflamatorias: en líquidos como
Pleural los exudados se acompañan de aumento de
actividad enzimática.
Origen de las enzimas
en el plasma
Uso de Enzimas en el diagnóstico Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico Clínico
Uso de Enzimas en el diagnóstico Clínico
Isoenzimas
• Enzimas que realizan la misma función pero difieren en su
estructura química y propiedades cinéticas.
• Las formas isoenzimáticas distintas pueden pertenecer a distintos
tejidos revelando sus modificaciones el tejido que le dio origen.
• Generalmente son estructuras oligoméricas con varios tipos de
cadenas proteicas -dímeros o tetrámeros- .
%
Isoenzimas LDH
ac i t c á l a sa ne go r d i hs eD

• Existen cinco isoenzimas de


la deshidrogenasa láctica Isoenzima SubunidadesTejido predominante
(LDH). Cada una es un LDH1 HHHH corazón
oligómero con cuatro LDH2 HHHM corazón
LDH3 HHMM riñón, pulmón
protómeros de los tipos H y M
LDH4 HMMM hígado
y tiene un PM de 34 000. LDH5 MMMM hígado
• Los protómeros se combinan
de manera distinta y se
originan en distintos tejidos
con preferencia. normal
• El suero tiene un contenido
representativo de todos los
tejidos. infarto
Creatino fosfokinasa
Isoenzima Subunidades Tejido predominante
CK1 BB Cerebro
Ck2 MB Músculo cardiaco
CK3 MM Músculo esquelético
(+)
• Existen tres isoenzimas de la
creatino fosfokinasa. Cada CK1
CK2
una es un dímero formado por
CK3
la combina- ción de
protómeros M y B.
• Cada dímero representa a un
tejido en particular. (-)
FIN
Modelo imaginario para catalizar la ruptura de una barra de metal

Moderna noción de catálisis enzimática Michael Polanyi 1921, Haldane


1930 y elaborado finalmente por Linus Pauling 1946: La enzima debe ser
complementario al estado de transicion
Clasificación de las Enzimas
Fuentes de información
• ROBERT MURRAY, VICTOR RODWELL, DAVID BENDER AND
KATHLEEN M. BOTHAM. Harper Illustrated Biochemistry 28 th
Edition. 2009
• LEHNINGER, A. Bioquímica". 2006 Ed. Omega.