SPECTROSCOPIE UV-VISIBLE

Introduction
La spectroscopie UV-Visible permet d’accéder qualitativement à des
renseignements quant à la nature des liaisons présentes au sein de
l’échantillon mais également de déterminer quantitativement la
concentration d’espèces absorbant dans ce domaine spectral. Non
destructive et rapide, cette spectroscopie est largement répandue en
travaux pratiques de chimie ainsi qu'en analyse chimique ou
biochimique. Elle est aussi largement appliquée dans presque tous les
segments de marché et les lieux de travail dans la recherche, la
production et le contrôle de qualité pour la classification et l'étude des
substances. spectroscopie UV est basé sur l'absorption de la lumière par
un échantillon. En fonction de la quantité de lumière et sa longueur
d'onde absorbée par l'échantillon, des informations précieuses peuvent
être obtenues, comme la pureté de l'échantillon.
Quelle est la spectroscopie UV ?
La spectroscopie optique est basée sur l'interaction de la lumière avec la matière. La
figure ci-dessous illustre ce qui se passe lorsque la lumière brille sur un objet:

Figure 1 et 2: La lumière non absorbée par l'objet est réfléchie et peut être vu par l'oeil

Les deux objets sont éclairés par la lumière visible ou blanc, qui est représenté par un
arc en ciel: les différentes couleurs représentent les différentes composantes de la
lumière visible. Lorsque les rayons de lumière scintillent sur un objet, ils peuvent être
absorbés par l'objet - en particulier, un ou plusieurs composants légers (par exemple
ses couleurs) sont spécifiquement absorbés.

Les couleurs qui ne sont pas absorbés par les objets sont pris en compte. Dans notre
exemple, la lumière rouge est réfléchie par la coque rouge de la tomate (Fig. 1),
tandis que la lumière verte est réfléchie par la surface verte de la courgette (Fig. 2).
Toutes les autres couleurs sont absorbées par les deux objets. La lumière réfléchie
est alors vu par les yeux: la tomate est vu en rouge tandis que les courgettes sont
vertes.
Le principe
Une transition UV-visible (souvent 180 à 750 nm) correspond
à un saut d’un électron d’une orbitale moléculaire
fondamentale occupée à une orbitale moléculaire excitée
vacante. La matière absorbe alors un photon dont l'énergie
correspond à la différence d'énergie entre ces niveaux
fondamental et excité. Toutes les transitions énergétiquement
possibles ne sont pas permises. Les transitions permises sont
celles qui provoquent une variation du moment dipolaire
électrique.
 Appareillage
Le spectrophomètre UV-Vis est un appareil muni d’une source de lumière UV-Vis et d’une
cellule photoélectrique.

Il permet de déterminer la proportion de lumière absorber par la cuvette contenant

l’échantillon par rapport à la cuvette de référence contenant le solvant (généralement l’eau).
Principe de mesure
Un spectrophotomètre UV / VIS mesure l'intensité de la lumière passant
à travers une solution d'échantillon dans une cuvette, et la compare à
l'intensité de la lumière avant qu'elle ne passe à travers l'échantillon. Les
principaux composants d'un spectrophotomètre UV / VIS sont une
source lumineuse, un porte-échantillon, un dispositif dispersif pour
séparer les différentes longueurs d'onde de la lumière (par exemple un
monochromateur), et un détecteur approprié.

Cuvette avec une d'échantillon

Source de lumière

Principe de mesure en spectroscopie UV / VIS

 VII.2 - Echantillonnage

• Composés étudiés dans divers états

physiques : gazeux
liquide
solide

L’ étude se fait en solution diluée

VII.2.1 - Solvants

Solvant doit :
- dissoudre le produit
- être transparent dans la région d’étude

Exemple : Hexane utilisable comme solvant à

des longueurs d’onde supérieures à 210 nm
 VIII.2.2 - Cellules

* Solution placée dans une cellule ou cuve

* Différentes épaisseurs
* En quartz pour le domaine UV-visible
* En verre pour le domaine visible
 Enregistrement des spectres

Absorption sélective du
rayonnement

Source monochromateur echantillon détection de lumiére

amplification

Echantillons taillés
en dioptres à faces
parallèles Enregmentistre
 APPLICATIONS DE LA
SPECTROSCOPIE UV-VISIBLE
VII.1 - Analyse qualitative
Le spectre UV ou visible ne permet pas l’identification d’un produit
mais celle du
groupement chromophore qu’il contient.
VII.2 - Analyse quantitative
L’analyse quantitative par la spectrometrie UV-visible est tres
employee grace a
l’utilisation de la loi de Beer-Lambert. Ces mesures ont des
applications dans divers
domaines :
- En laboratoire :
Suivi de la cinetique d’une reaction
Mesure des constantes de dissociation d’acides et de bases ou des
constantes
de complexation…
 Determination de la composition d’un melange (benzene dans le cyclohexane)
Etude d’isomerie cis-trans ou de tautomerie
- Police scientifique
- Expertise judiciaire
- Environnement :
Ozone dans l’air des villes
Metaux lourds dans l’eau
Mesure du phenol dans l’eau (a la bande 200-300 nm)
Matiere organique, matieres en suspension, nitrates contenus dans l'eau
- Lutte antidopage
- Agroalimentaire
- Mesure des couleurs
- Pharmacie :
Dosage du fer dans un medicament
Dosage des molecules actives dans une preparation pharmaceutique
- Parfums et cosmetiques : les cremes solaires contiennent des filtres UV ou ≪ ecrans
solaire ≫.
 Notions d’absorbance

On mesure une absorbance pour une longueur d’onde  donnée.

 Le spectre d’absorbance

KMnO4
Absorbance A

500 nm
400 nm 600 nm
longueur d’onde 

On mesure une absorbance pour une longueur d’onde  donnée.

On voit les couleurs qui ne sont pas
absorbées !
 On voit les couleurs qui ne sont pas absorbées !

Exemple :
Spectres UV-Vis de différentes substances chimiques :
Le naphtalène et l’anthracène absorbent dans l’UV et reflète toutes les radiations du visible. Ils
sont donc transparents.

Le tétracène absorbe
essentiel-lement dans le bleu,
il est donc orange.

On voit la couleur
complémentaire !

Sur le spectre, on obtient des pics là où

l’échantillon absorbe
 I - DOMAINE UV-VISIBLE
Domaine UV-visible ≈ 800 - 10 nm
 visible : 800 nm (rouge) - 400 nm (indigo)
 proche-UV : 400 nm - 200 nm
 UV-lointain : 200 nm - 10 nm