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HEMOGRAMA

AUTOMATIZADO
R1. RUDDY J. VASQUEZ SAENZ
PRINCIPIOS DE ANÁLISIS

6 CANALES DE CONTEO
1. IMPEDANCIA ELÉCTRICA: RBC/PLT
PRINCIPIO DE COULTER
Utiliza la propiedad de las células (leucocitos, hematíes y plaquetas)
de ser malas conductoras de la electricidad.
Uno de los reactivos usados en el contador es una solución
isotónica (NaCl 0.9%), sin partículas y conductora de la electricidad.
La sangre diluida en ese reactivo, hace que se produzca un aumento
de la resistencia eléctrica
Ante el paso de un elemento, que corta la corriente eléctrica se
genera un pulso eléctrico medido por el software del equipo. De
esta forma se obtiene:
- recuento de glóbulos rojos
- recuento de plaquetas
- recuento de glóbulos blancos, y su diferenciación en sub-
poblaciones según el tamaño del elemento (fórmula leucocitaria)
- Se visualizan gráficos de distribución de frecuencias (histogramas).
1. IMPEDANCIA ELÉCTRICA: RBC/PLT

C A
B

Células
sanguín
eas
Apertu
ra
Región
crítica
Señal Señal Señal
A B C
1. IMPEDANCIA ELÉCTRICA: RBC/PLT
CLASIFICACION DE LOS IMPULSOS ELECTRICOS GENERADOS POR RBC Y PLT.

Los pulsos se reúnen y ordenan (canalizan)


según su amplitud mediante analizadores de la
altura de pulsos.

Los datos se trazan en un grafico de


distribución de frecuencias o histograma con el
numero relativo en el eje y el tamaño en el eje
de las x

El histograma producido representa la


distribución del volumen de las células
contadas

# Pulsos = # células Intensidad pulso = tamaño células


HISTOGRAMAS
A. HISTOGRAMAS ERITROCITARIOS
La curva normal de glóbulos rojos es cónica, modal y se encuentra representada en tamaños de
80 a 100 fL, con un pico o curva secundaria modal de plana a ligeramente cóncava con muy poca
altura que llega a 200 fL.
A. HISTOGRAMAS ERITROCITARIOS
Su interpretación orienta el estudio del extendido de sangre periférica  las alteraciones del
histograma tienen una estrecha correlación con las anormalidades morfológicas de los
eritrocitos.
Tiene una relación estrecha con el VCM y el RDW  si el VCM disminuido, el cuerpo del
histograma desviado a la izquierda y cuando el VCM esté elevado, el cuerpo del histograma se
desvíe a la derecha.
De forma similar, si el RDW está elevado base más amplia en el cuerpo del histograma.
Histograma desviado a la izquierda  microcitos y en ocasiones, cuando hay una población
muy desviada a la izquierda, puede corresponder a esquistocitos (células fragmentadas) o a
macroplaquetas.
Histograma desviado a la derecha  macrocitos, de macroovalocitos o con resultados
ocasionados por crioaglutininas.
A. HISTOGRAMAS ERITROCITARIOS
A. HISTOGRAMAS ERITROCITARIOS
Debido a que las crioaglutininas inducen la aglutinación de
eritrocitos a temperaturas bajas, disminuye el RBC y Hto,
mientras que aumenta el VCM, la CMH, la CMHC y el RDW.

En el histograma de eritrocitos se observa una población


significativa desviada a la derecha, que corresponde a
eritrocitos aglutinados.

Cuando la muestra se conserva a 37°hasta que se procesa,


disminuye notablemente la crioaglutinación y desaparece la
cola del histograma de eritrocitos.
A. HISTOGRAMAS ERITROCITARIOS
A. HISTOGRAMAS ERITROCITARIOS
Arranque extenso en Y
Se presenta en trombocitosis, macrotrombocitosis o hay presencia de agregados plaquetarios
Case Presentation

Normal people, the RBC Dimorphologic RBC histogram,


histogram shape is in perfect indicating anisocytosis. From a
Gaussian distribution. rectal cancer patient

Microcytosis, the RBC Dimorphologic RBC histogram.


dominant peak moves to From a recovery of Iron-
left. From a 34-year old deficiency anemia treatment
outpatient. patient.
SERIE ROJA
Canal RBC/PLT
B. HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
Es una curva cónica sin distribución normal cuya distribución en tamaños esta entre 2 a 20 fL.
Eso quiere decir que el promedio de la población (el pico) debería encontrarse siempre al lado
izquierdo de la flecha, como se observa en el gráfico.
B. HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
Se relaciona el volumen plaquetario en femtolitros con la cantidad de células. En condiciones
normales, el histograma tiene forma de campana de Gauss y el pico más alto coincide con el
volumen plaquetario medio.

Si el VMP está elevado por la presencia de macroplaquetas, el


histograma se desvía a la derecha.
UTILIDAD CLÍNICA De forma similar, cuando las plaquetas reticuladas o el
porcentaje de plaquetas de tamaño grande están elevados, se
puede observar una desviación a la derecha del histograma y es
posible que al final del histograma la línea no toque el eje X.

Cuando hay trombocitopenia severa también se afecta el


histograma, ya que en ocasiones la campana no es tan
pronunciada.
B. HISTOGRAMA DE PLAQUETAS

PLT * MPV
PCT =
10000
MPV PDW
B. HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
Un gráfico que siga la línea roja debe interpretarse como posible agregación plaquetaria o con
un aumento en el número de plaquetas grandes, fragmentos celulares (membranas de glóbulos
rojos)
Un gráfico que siga la línea verde debe interpretarse como interferencia producida por
microcitosis marcada, glóbulos rojos de menos de 30 fl.(recordar que tanto plaquetas como
glóbulos rojos se miden por impedancia en una misma cámara y de manera simultánea.)
Porcentaje de plaquetas de tamaño grande
(P – LCR)
Se refiere a la proporción de plaquetas que tienen un volumen superior a 12 Fl.
El valor de referencia para el porcentaje de plaquetas de tamaño grande es de 17,5% a 42,3% en
mujeres y de 18,5% a 42,3% en hombres

1. De utilidad en la diferenciación de la etiología de la


trombocitopenia (medular o periférica):
- En casos de trombocitopenia por defectos en la producción,
como la anemia aplásica, el P-LCR está disminuido,
UTILIDAD CLÍNICA - Trombocitopenias por destrucción periférica, como la
trombocitopenia inmune, el P-LCR está elevado.

2. En el caso de las trombocitosis, el P-LCR es más bajo en las


trombocitosis de origen reactivo, mientras que es más alto en las
trombocitosis de origen neoplásico, como los síndromes
mieloproliferativos.
PLT series
P-LCC/P-LCR

S2 representa el número de plaquetas grandes, y S1+S2 representa el recuento


total de plaquetas

P-LCC = PLT * P-LCR


P-LCC y P-LCR estan relacionados.
P-LCC Platelets-Large Cells Count (recuento de celulas grandes)
P-LCR Platelets-Large Cells Ratio (relacion de celulas grandes)

P-LCC = PLT * P-LCR


PLAQUETAS
PLT - RBC interferencia
Analisis PLT
C. HISTOGRAMA LEUCOCITARIO
Los glóbulos bancos se agrupan en tres curvas claramente definidas y estas configuran la
arquitectura normal
- curva de linfocitos cóncava 50 – 100 Fl
- Curva de mononucleares plana a cóncava 100 – 150 fL
- Curva de granulocitos cóncava 150 - 380 fL.
2. COLORIMETRÍA: HGB
Se mide por el método de la cianometahemoglobina (solución de Drabkin)
En los autoanalizadores de hematología de última generación la cianometahemoglobina se ha
reemplazado por lauril sulfato de sodio, que no es tóxico.
La muestra del canal HGB actúa como la
sustancia que absorbe luz después de ser
tratada con el reactivo y, por consiguiente se
puede medir la concentración de HGB
midiendo la absorbancia.

PRINCIPIO DE LAMBERT – BEER:


Cuando un rayo de luz monocromática atraviesa
una solución que absorbe luz no dispersante y
bien proporcionada, la absorbancia A es
proporcional al producto de la densidad L por la
concentración C.

A= K X C X L
MEDICION DE WBC
TECNOLOGIA DE ANALISIS SF CUBE:
INCLUYE:
- DIFERENCIAL WBC
- RETICULOCITOS
- NRBC
En donde después de la reacción con reactivos patentados se someten a un análisis de 3D,
utilizando la información de la dispersión de la luz láser en 2 ángulos y señales de
fluorescencia.
El diagrama de dispersión 3D permite identificar y diferenciar mejor las poblaciones de células
sanguíneas, sobre todo detectar células anómalas.
5 Diff.
TECNOLOGÍA SF CUBO
Colorante fluorescente
INFORMACION ADN/ARN
Reticulocitos inmaduros
Canal WBC DIFF
Canal WBC DIFF
Canal WBC DIFF
Baso/WBC Channel
Baso/WBC Channel
Baso/WBC Channel
Canal NRBC
Canal NRBC
Canal NRBC
Canal RET
Canal RET
Canal RET
Principios de Análisis – Canal RET
Tecnología Avanzada
WBC 5-diff technology
WBC Tecnología
Citometría de Flujo
Celulas inyectadas en una
cámara de flujo que esta localizado
en el paso óptico de una fuente de
luz, usualmente un laser.
La cámara de flujo contiene un
líquido que fluye rapidamente : el
fluido envolvente que lleva la
muestra a alta velocidad por el paso
de luz.
Las células mantienen su
orientación y posición en el fluido
debido a que obedecen las
característricas del flujo laminar y
atraviesan en fila de uno el paso
óptico.
WBC Tecnología
La dispersión de Luz ocurre Dispersión de Luz Laser
cuando la partícula reflacta la luz
que incide sobre ella, esto
depende de las características
físicas de la partícula.

-Forward scatter (FS): Tamaño


-Side scatter (SS): Complejidad

1 - 5°
6 - 20°
Dispersión de Laser de Ángulo Múltiple

Dispersión de ángulo
mayor (MAS)8~20
5
Granularidad (Complex)

3 4
Dispersión de ángulo
Menor (LAS)2~5
Volumen
1 Muestra
2 Laser
3 Lentes

1
Teoría de Mie
En células diferentes de diferente tamaño (Monoc. y Linf.)
El ángulo bajo las diferencia por tamaño

Laser

LAS
Teoría de Mie
En células diferentes pero del mismo tamaño (granulocitos)
Ángulo mayor refleja la complejidad celular

Laser

MAS
WBC Tecnología
Tinción Química

EOS

Otros
WBC

RBC

Cámara de diferencial
WBC technology
Chemical dye

BASO

other
WBC

RBC

BASO Channel
BASO scattergram
WBC/Baso

WBC BAS%

BAS # se puede calcular según BAS%


El resultado total del WBC se cuenta en el canal BASO
5 part result
Finally…

NEU% LYM% MON% EOS% BAS%


* WBC = BAS#

*
NEU# LYM# MON# EOS#
DISPERSOGRAMA

Neu

Mon

Lymph

Ghost

FS : Frontal Scatter / Dispersión Frontal / Información sobre el


Tamaño celular
SS : Side Scatter / Dispersión Lateral / Información sobre
Complejidad Celular
DIFF

Grande

Neutro es complejo y
grande

Mono es más grande


que el Linfo

Estructura interna del


Linfo es mas simple que la
del EOS.

Pequeño

Estructura simple Estructura compleja


BASO

Grande

Baso mantiene su
mismo tamaño

Lymph
Neutro
Eos
Mono
Disminuyen
grandemente
Pequeño

Estructura simple Estructura compleja


Muestras Anormales: Banderas
Left Shift
LIC

Mon

ALY

Lym ALY

NRbc
Ghost
Dispersograma de una muestra ANORMAL

Leucopoenia Eosinophilia

Lymphocytosis Neutrophilia Monocytosis


Dispersograma de una muestra ANORMAL

ATL LIC

Left shift Lyse resistant


Dispersograma Anormal

Mov Izq.

LIC
Dispersograma Anormal

ALY
GRÁFICOS DE ANÁLISIS

2
histogramas

DIFF BASO RET NRBC PLT-O RET-EXT

6 Dispersogramas
3 Dispersogramas
3D