LECCIÓN 5.

CULTIVO Y CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS

1. Los requerimientos nutritivos de los microorganismos

2. Medios de cultivo: composición y preparación

3. Aislamiento de cultivos puros de microorganismos

4. Mantenimiento y conservación de microorganismos

5. Cultivos tipo y colecciones de cultivo

6. Definición del crecimiento

7. Curva de crecimiento

8. Métodos para medir el crecimiento microbiano

9. Crecimiento continuo

10. Factores que influyen en el crecimiento microbiano

 LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DE
MICROORGANISMOS

1. Los requerimientos nutritivos de los microorganismos

1.1 Macronutrientes
1.2 Oligoelementos
1.3 Factores de crecimiento
La nutrición microbiana consiste en aportar a las células los ingredientes
químicos que necesitan para la síntesis de monómeros, que son los componentes
de las macromoléculas, que a su vez construyen las estructuras celulares.

Monómeros Macromoléculas Estructuras

celulares
Monosacáridos Polisacáridos Pared celular
Glicocàlix

Aminoácidos Proteínas Membrana

Ribosomas
Flagelo
Pelos y fimbrias
Enzimas

Ácidos grasos Lípidos Membranas

Bases nitrogenadas Ácidos nucleicos Cromosoma

Ribosomas
Plásmidos
Nutrición microbiana
macronutrientes

Elemento más abundante en las macromoléculas.

C Constituye el 50% del peso seco de las células.
Muchos procariotas son heterótrofos. Necesitan algún tipo de
compuesto orgánico como fuente de carbono para hacer nuevo
material celular.

Los aminoácidos, los ácidos grasos, los ácidos orgánicos, los

azúcares, las bases nitrogenadas, los compuestos aromáticos y
un sinfín de compuestos orgánicos de otro tipo pueden ser
utilizados por las bacterias.

Algunos procariotas son autótrofos, capaces de construir

todas sus estructuras orgánicas a partir del CO2 con la energía
obtenida de la luz o de compuestos inorgánicos.
Nutrición microbiana
macronutrientes

En una bacteria típica, alrededor del 12% de su peso seco

N es N.

Forma parte de las proteínas, ácidos nucleicos y otros

constituyentes celulares.

En la naturaleza, se encuentra en forma orgánica e inorgánica.

Pero la mayor parte del N natural se encuentra en forma
inorgánica ( NH3, NO3- o N2 ).

La mayoría de las bacterias son capaces de utilizar NH3 como

única fuente de N, y otras muchas pueden utilizar NO3- .

El N2 puede ser usado como fuente de nitrógeno por algunas

bacterias, las bacterias fijadoras de nitrógeno.
Nutrición microbiana
macronutrientes

P El P se presenta en la naturaleza en forma de fosfatos orgánicos e

inorgánicos.
La célula necesita P para la síntesis de ácidos nucleicos y
fosfolípidos.

El S es un componente de los aminoácidos cis y met y se

S encuentra en algunas vitaminas, como tiamina, biotina, ácido
lipoico y Coenzima A.
La mayoría del S celular procede de fuentes inorgánicas, ya sean
sulfatos o sulfuros.

K El K es necesario para todos los organismos. Es cofactor de

muchas enzimas.

Mg El Mg funciona como estabilizador de los ribosomas, las

membranas celulares y los ácidos nucleicos. También se necesita
para la actividad de muchas enzimas.

Ca El Ca ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una

función importante en la termorresistencia de las endoesporas.

Na El Na es requerido por algunos microorganismos (halófilos),

Nutrición microbiana

Fe
El Fe es fundamental en la respiración celular.

Forma parte de los citocromos y de proteínas que contienen Fe y S implicados

en el transporte de electrones.

En condiciones anaeróbicas, el Fe se encuentra en el estado de oxidación +2 (Fe+2) y es

soluble.

En condiciones aeróbicas suele estar en el estado de oxidación +3 ( Fe+3) y forma varios

minerales insolubles.

Para obtener el Fe de tales minerales, las células producen agentes quelantes llamados
sideróforos que solubilizan el Fe y lo introducen en la célula.
Es necesario en mayores cantidades que otros metales y no se considera un elemento traza.
Nutrición microbiana
Micronutrientes (elementos traza)

Co, Cu, Mn, Mo, Ni, Se, W, V, Zn

Se requieren en muy pequeñas cantidades.

Son tan importantes para el funcionamiento celular como los macronutrientes.

Muchos son metales que actúan como cofactores de enzimas.

A menudo no es necesario añadirlos a los medios de cultivo.

Si el agua utilizada para elaborar el medio es ultrapura se añade al medio una

pequeña cantidad de una solución de metales traza.
Nutrición microbiana
Factores de crecimiento

Los factores de crecimiento son compuestos orgánicos que se necesitan en

muy pequeñas cantidades y sólo por algunas células.

Los factores de crecimiento son vitaminas, aminoácidos, purinas y

pirimidinas.
La mayoría de los microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos,
pero en algunos casos es necesario añadirlos al medio.

Las vitaminas son los factores de crecimiento que se necesitan con mayor
frecuencia, funcionan formando parte de coenzimas.

Las principales vitaminas requeridas por los microorganismos son:

tiamina (vitamina B1)
biotina,
piridoxina (vitamina B6) y
covalamina (vitamina B12)
 LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS

2. Medios de cultivo: composición y preparación

2. 1. Medios de cultivo químicamente definidos

2. 2. Medios complejos (no definidos)
2.3. Tipos de medios de cultivo
El medio de cultivo químicamente definido se prepara añadiendo cantidades precisas
de compuestos orgánicos e inorgánicos puros a un volumen conocido de agua destilada.
Se conoce su composición exacta.

Medio definido para Escherichia coli

K2HPO4 7g
KH2PO4 2g
(NH4)2SO4 1g
MgSO4 0,1 g
CaCl2 0,02 g
Glucosa 4-10 g
Elementos traza 2-10 g
(Fe, Co, Mn, Zn,
Cu, Ni, Mo)
Agua destilada 1000 ml
pH7
Medio definido para Leuconostoc mesenteroides

- K2HPO4 0,6 g
- KH2PO4 0,6 g
- NH4Cl 3g
- MgSO4 0,1 g
- CaCl2 0,02 g
- Glucosa 25 g
- Acetáto sódico 20 g

- Aminoácidos (ala, arg, asn asp,cis, glu, gln, gly, his, iso,
leu, lis, met, phe, pro, ser, thr, trp, tyr, val).
100-200 g de cada uno

- Purinas y pirimidinas (adenina, guanina, uracilo, xantina).

10 mg de cada una

-Vitaminas (biotina, folato, ácido nicotínico, piridoxal,

piridoxamina, piridoxina, riboflavina, tiamina, pantotenato,
ácido p-aminobenzoico)
0,01-1 mg de cada una

Elementos traza 2-10 g

(Fe, Co, Mn, Zn,
Cu, Ni, Mo)

Agua destilada 1000 ml

pH7
Para elaborar el medio complejo se utilizan hidrolizados de proteínas y otras
sustancias muy nutritivas pero no definidas químicamente que se pesan y se añaden a un
volumen conocido de agua.
No se conoce la composición exacta del medio complejo.

Medio complejo
para Escherichia coli
y Leuconostoc mesenteroides

Glucosa 15 g
Extracto de levadura 5 g
Peptona 5g
KH2PO4 2g
Agua destilada 1000 ml
pH7
 Tipos de medios de cultivo
Medios sólidos y líquidos
Los medios sólidos se preparan como los medios líquidos y se les añade agar (1.5%) como agente gelificante.
El agar es un polímero sulfatado compuesto por D-galactosa, 3,6-anhidro-L-galactosa y ácido glucurónico.
El agar se funde a 80-90ºC y se puede enfriar hasta una temperatura de 40 a 42 ºC sin endurecerse.
La mayoría de los microorganismos no pueden degradarlo.
El agar se funde durante el proceso de esterilización, el medio fundido se vierte sobre placas Petri y se deja solidificar
antes de su uso.
Los medios sólidos inmovilizan a las células, permitiéndolas crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias.

Medios generales
Los medios generales mantienen el crecimiento de muchos microorganismos. Ej., el caldo y agar nutritivo

Medios enriquecidos
Medios generales a los que se añaden nutrientes especiales para mantener el crecimiento de microorganismos
heterótrofos exigentes. Ej., el agar sangre

Medios selectivos
Favorecen el crecimiento de microorganismos particulares. Ej.,agar Levine (eosina-azul de metileno) y Agar
MacConkey se emplean para detectar enterobacterias. Contienen colorantes y sales biliares que inhiben el
crecimiento de las bacterias Gram positivas.
Otros medios selectivos contienen nutrientes que pueden utilizar algunas bacterias de forma específica. Ej., el agar
celulosa se usa para aislar bacterias que digieren la celulosa.

Medios diferenciales
Medios que diferencian entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten una identificación tentativa de los
microorganismos según sus características biológicas.
El agar MacConkey es tanto selectivo como diferencial. Como contiene lactosa y colorante rojo neutro, las colonias
fermentadoras de lactosa (Escherichia coli) aparecen de color rosa o rojo y se distinguen fácilmente de las colonias no
fermentadoras.
 LECCIÓN 5. CULTIVO Y CRECIMIENTO DE
MICROORGANISMOS

3. Aislamiento de cultivos puros de microorganismos

3.1 Transferencia aséptica

3.2 Siembra en placa por extensión; en estrías; y en
profundidad
3.3 Morfología y crecimiento de las colonias
 Transferencia aséptica

Consiste en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante la

manipulación de los cultivos y de los medios de cultivo estériles.
Es uno de los primeros métodos que tiene que dominar un microbiólogo.

a.Se calienta el asa de siembra hasta incandescencia y se deja enfriar

b. El tubo se destapa
c. Se pasa el extremo del tubo por la llama
d. Se extrae la muestra con el asa esterilizada
e. Se vuelve a flamear la boca del tubo y la muestra se deposita en un medio estéril
f. Se vuelve a tapar el tubo y se calienta el asa de nuevo al final
 Obtención de cultivos puros

2. Siembra en estrías

Se esteriliza el asa y
luego se toma una Crecimiento de colonias confluentes
muestra del tubo al comienzo de la siembra por estría

Colonias aisladas
al final
de la siembra por
estría

1. Dilución y siembra por

extensión en superficie

Se realiza una siembra

por estría en una placa de
agar con medio estéril.
Después de una estría inicail 3. Dilución y siembra
Se hacen estrías en ángulo
en profundidad
 Morfología y crecimiento de las colonias

Las colonias son masas visibles de células que se forman por división de una o varias células.
El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbiólogo identificar las bacterias porque las
especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto característico.
El tamaño, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo.
La morfología de la colonia de una bacteria puede variar según el medio en que crezca la bacteria.
Colonias de bacterias

Serratia marcescens
Cultivada en Agar
MaConkey

Pseudomonas aeruginosa
Cultivada en
Agar Tripticasa-soja

Shigella flexneri
Cultivada en
Agar MacConkey

Colonias de Bacillus subtilis que han crecido en

medios con pocos nutrientes