Transcripción del Material

Genético

Biología Molecular
Facultad de Ciencias Químicas
Prof .MSc. Celso Mora

Biología Molecular 2019

 Expresión Genética

 Proceso de decodificación (expresión) de un gen hasta

llegar a la síntesis de una cadena polipeptídica.

 Gen >>>>transcripción>>>>>traducción>>>> Cadena polipeptídica

 ADN >>>>> ARNm >>>>> Polipéptido

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 Ácido Ribonucleico (ARN)

 Funcionales  Informativo

 ARN-r  ARN-m

 ARN-t

 ARN-np

Bases frecuentes: Adenina, Guanina, Citosina, Uridina

Bases poco frecuentes: Pseudouridina, Metilguanosina,

Dimetilguanosina, Metilinosina

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 Transcripción

Para que la información genética almacenada en el DNA

sea utilizada por los organismos se requiere que sean
sintetizadas cadenas de RNA complementarias al DNA
por medio de un proceso conocido como transcripción
(de “scribere”=escribir y “trans”= pasar de uno a otro, en
este caso de una escritura a otra).
Fase de la expresión genética que produce copias del
mensaje codificado en el ADN en forma de ARN.

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Características Generales

1. Complementariedad

2. Dirección

3. Asimetría

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 1. Complementariedad
 Existen experimentos que demuestran que la proporción
(A+U)/G+C) del ARN es similar a la proporción (A+T)/(G+C) del
ADN.
Prueba de hibridación:
ADN se desnaturaliza y se mezcla con el ARN que se sintetiza en su
presencia, cuando se lleva a cabo la renaturalización (mediante un
enfriamiento lento), se producen híbridos ADN-ARN. Las moléculas híbridas
ADN-ARN se pueden distinguir mediante centrifugación en gradiente de CsCl
ya que presentan una densidad diferente a la de las dobles hélices ADN-ADN.

Conclusión:
La aparición de moléculas híbridas ADN-ARN solo es posible si
existen segmentos largos de complementarios, por tanto estos
resultados indican que el transcrito es complementario del ADN
parental.

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 2. Dirección

 Las ARN polimerasas sintetizan ARN siempre en

dirección 5'P→3'OH, es decir el ARN producto de la
transcripción crece solamente en esta dirección.

 La dirección en la que las ADN polimerasas

sintetizan ADN es también la misma 5'P→3'OH.

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 3. Asimetría

Hebra molde Hebra no molde

Hebra menos (-) Hebra más (+)

Hebra no codificante Hebra codificante

Hebra sin sentido Hebra con sentido

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 Esquema del proceso
Hebra no-molde, codificante, con sentido, informativa, cadena (+)

Hebra molde, no codificante, antisentido, no informativa, cadena (-)

INICIO >>> ELONGACIÓN >>> TERMINACIÓN

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Eucariotas vs Procariotas

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 Inicio
 Etapa crítica del proceso
 Formación del complejo de iniciación (Burbuja de
transcripción).
Gen:
Región estructural, información codificante.
Región reguladora, que permite iniciar el proceso de
expresión genética.

Un gen es el conjunto de secuencias de ADN

(estructurales y reguladoras) necesarias para
codificar un producto génico

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 Concepto de Gen

Definición clásica, no molecular

Unidad elemental de la herencia, la región física y
funcional que controla una característica hereditaria
completa, la portadora de la información genética de
una generación a la siguiente, la que gobierna, en
definitiva, las características de un rasgo particular.

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 Concepto de Gen

 Definición molecular
- Visión original:
Relacionados con los avances producidos con el
tiempo.
- Hipótesis Un gen-una enzima
- Hipótesis Un gen-una proteína
- Hipótesis Un gen-un polipéptido

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 Concepto de Gen

Definición básica considerada como válida y

aceptada:
 Un gen es aquella región del genoma que
contiene la información necesaria para sintetizar
una molécula de polipéptido.

Visión actual:
Un gen es el conjunto de secuencias de ADN de
todo tipo, estructurales (intrones y exones) y
reguladoras, necesarias para codificar un
producto génico: ARN maduro de cualquier tipo o
una proteína funcional.
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 Situaciones particulares

 Dos genes pueden ser solapantes, es decir,

comparten una misma región de ADN:
- Cada uno codificado en una hebra distinta.
- O codificados en la misma hebra, debido a la
existencia de tres marcos de lectura.

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 Situaciones particulares

 Algunos genes dan lugar a varios productos, por

ejemplo:
- gen de los ARNr, se transcribe en ARN
precursor que por maduración se fragmenta dando
varios ARNr funcionales.
- ADN mitocondrial, cuyos 3 transcritos primarios
maduran para dar cada uno varios ARN funcionales.
- Muchos genes procarióticos se transcriben a un
ARNm único que da lugar por traducción a varias
proteínas (ARNm policistrónico).

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 Situaciones particulares
 Misma secuencia de ADN que da lugar
alternativamente a dos productos génicos, por
diferente procesamiento postranscripcional o
postraduccional.

 Genes que codifican para polipéptidos distintos,

siendo éstos subunidades de una proteína (ej: a-
globina y b-globina)

 Inmunoglobulinas. Un gen único sufre

reorganizaciones internas en su secuencia antes de
la transcripción.

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 Nomenclatura

 Los genes se nombran generalmente con tres letras

minúsculas y en cursiva. La proteína codificada por él
recibe a veces el mismo nombre pero comenzando
con una letra mayúscula y sin cursiva. En ocasiones
se emplean las tres letras en mayúscula (ej.: gen
APC).

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 Iniciación
 Una sola hebra del DNA se transcribe.

 Es necesaria la presencia de secuencias promotoras, que permiten

reconocer donde se iniciará el proceso.

 Secuencias promotoras, muy conservadas en procariotas y eucariotas.

 Formación de la holoenzima (ARNpol).

 Las secuencias del DNA que estimulan el proceso, pero se hallan alejados
se denominan potenciadores o intensificadores o enhancers.

 Los intensificadores unen proteínas activadoras: cambio estructural espacial

del DNA, lo que permite una interacción con otros factores o la propia
RNApol. La interacción facilita el proceso, permite reclutar a la RNApol para
formar el complejo de iniciación.

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 ARN-polimerasa

 Un núcleo o core formado por cinco polipéptidos (α2 ß ß'ω).

 Las dos unidades α idénticas, se unen al ADN de forma inespecífica

para catalizar la síntesis de ARN.

 La subunidad β' participa en la unión del ADN, la subunidad β

contiene parte del centro activo.

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ARN polimerasa (núcleo)

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ARN polimerasa (holoenzima)

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 Promotores
 Existen unas secuencias de ADN específicas y necesarias para que la
holoenzima reconozca el lugar de comienzo de la transcripción,
dichas secuencias específicas se denominan secuencias promotoras.

 Pribnow (1975) aisló y secuenció las regiones de ADN que quedaban

protegidas por la ARN polimerasa.

 Pribnow observó una secuencia de unos 7 pares de bases que se

encontraban 10 bases antes de la primera que se transcribe y que
aparecía en la mayoría de los fragmentos protegidos por la ARN
polimerasa. Esta secuencia se la denominó Caja de Pribnow y es:
5' TATAAT 3'.

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¿Cómo se inicia el proceso?
+1 = Inicio

Desnaturalización local del ADN >>> Burbuja de

transcripción o complejo abierto

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 Factores sigma

Son una serie de proteínas que tienen como

fin guiar a la ARNpol al promotor adecuado.

Al unirse al núcleo permite que la holoenzima

pueda reconocer una secuencia situada al
inicio del operón (promotor) disociándose del
resto de la enzima una vez iniciada la
transcripción.

Cada factor sigma se une a un promotor con

una secuencia consenso determinada.

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 Factores σ de E. coli

El σ70 se requiere para la transcripción de los genes involucrados en las

funciones fundamentales de la célula durante el crecimiento exponencial.
El σ32 participa en la respuesta al shock de calor.
El σ24, en la asimilación de nitrógeno.
El σ28 en la síntesis del flagelo.
El σ38 en la expresión de genes de fase estacionaria.

Pseudomonas : > 15
Streptomyces: > 30

“Factores anti-sigma, en algunos casos se unen al factor sigma y

previenen así su unión a los promotores.”

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¿Qué tenemos hasta ahora?
~ 17+/- 1 nucleótidos 6 nucleótidos

Reconocidos por σ70

Promotores fuertes: cuando más se aproximan a las
secuencias consenso.
Unión de la ARNpol ~ cubre -50 hasta +20.
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 Iniciación en Eucariotas

 Se requiere la unión al ADN de proteínas llamadas

factores de inicio de la transcripción o factores de

transcripción (TFs).

 A partir de cada promotor sólo se transcribe un gen.

 Utiliza promotores con secuencia TATA (TATA-box)

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TITULO : La Proteína IE63 del Virus Varicela
Zoster Inhibe la Maquinaria de Transcripción
Basal por medio de la Desorganización del
Complejo de Pre-Iniciación

AUTOR : Piette J, Di Valentin E, Bontems S y colaboradores.

 Los autores concluyen señalando que el presente estudio

demuestra que la IE63 es un inhibidor efectivo de la
transcripción en los promotores que presenten secuencia de
TATA-box, la eficacia de esta inhibición depende la presencia de
esta secuencia y de sus características. La inhibición se lleva a
cabo por la desorganización y el impedimento del ensamblaje
del complejo de pre-iniciación mediante el secuestro de uno o
varios factores generales de la transcripción.

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 Elongación
 El factor sigma se disocia de la holoenzima, quedando disponible para
asociarse a otra ARNpol.

 La ARNpol libre del factor σ o core continúa adhiriendo nucleótidos a

la cadena de ARN naciente.

 Separación de las hebras que se encuentran por delante de la

ARNpol.

 Reenrollamiento de la doble hélice por detrás.

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 Iniciación - Elongación

La velocidad de transcripción en E. coli a 37º C es de 2500

ribonucleótidos por minuto (aproximadamente 42 ribonucleótidos
por segundo).
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 Terminación

 El complejo de transcripción responde a señales

específicas para terminar con el proceso.
- Mecanismos:
 Independiente de rho: asociada a una secuencia,
normalmente ricas en G y C repetidas pero invertidas
para asociarse entre ellas. (palíndromos). Actúa como
secuencia de terminación una región palindrómica en el
ARN ; que forma una horquilla seguida de varios
residuos de uridina.

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 Terminación

 Dependiente de rho: cuando no existe la señal

conservada para formar la horquilla de terminación
entonces el factor rho actúa para terminar la
transcripción.
La proteína rho es hexamérica (275kDa) con
actividades DNA/RNA-helicasa y ATPasa
dependiente de RNA.
Rho se une al RNA y empieza a desplazarse en
sentido 3’, hasta alcanzar el complejo de elongación,
provocando la desnaturalización del híbrido,
liberando el RNA e interrumpiendo la transcripción.

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Terminación intrínseca
Secuencia rica en GC
(Sitios de pausa)
Región palindrómica
Apareamiento del ARN
Desestabilización del
híbrido ARN:ADN
Uniones débiles (poliU en
el ARN)

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Zonas palindrómicas

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Terminación rho dependiente

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 Antiterminación

 Proceso en el cual mediante la acción de ciertos

factores se impide la terminación de la transcripción,
por tanto la ARNpol sigue con el proceso incluso
encontrándose con sitios de terminación.

Los factores más conocidos son las proteínas nusA, nusB, nusG
de E.coli

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 Mecanismo complejo de
acción (aún sin
dilucidación completa)
NusA (solo) estimula la
terminación
Actúan en conjunto,
NusA asociado a otros
factores impide la
terminación
Impiden la correcta
formación de la horquilla
Inhiben la acción de rho

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 Problema 1
 Se dispone de una secuencia de ARNm del Mycobacterium

tuberculosis; a partir del mismo: qué cadena peptídica será

sintetizada?

5'-CCUCAUAUGCGCCAUUAUAAGUGACACACA-3'

Met – Arg – His – Tyr - Lis

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 Problema 2
Se tiene una secuencia de ADN procariótico (3´ >>> 5´), a partir de la misma:
a. Escriba la secuencia complementaria
b. Ubicar las secuencias consenso
c. Ubicar el punto +1 de transcripción y a partir del mismo el ARNm

3´ATCGCCAACTGTACTATCTTCGTGAGATGATATAAGAGTTATCCAGGTACG

5´TAGCGGTTGACATGAT…………………………CTATATTCTCAATAGGTCCA……
AGGUCC…3´

Región -35

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 Errores en la transcripción

 La frecuencia de error en síntesis de ARN, derivada de la

transcripción es de 1 base errónea / 104 transcritos. Esta

cantidad de errores es tolerable debido a los siguientes factores:

 Repetida transcripción de muchos genes.

 Sinónimos del código genético.

 “En muchos casos” la substitución de un aminoácido es inocua.

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 ARN polimerasa
(susceptibilidad a antibióticos)

 La rifampicina: inhibe la transcripción en procariotes al inhibir a la RNA pol

uniendose a la subunidad beta. (pertenece al grupo de Rifamicinas)

 La alfaamanitina: inhibe a la RNA pol II a concentraciones bajas , a la RNA

pol III a concentraciones altas, y la RNA pol I es resistente.

 La actinomicina D: se intercala entre las bases G-C (en procariotas y

eucariotas), utilizado com antineoplásico.

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 Inhibidores de la transcripción
(Luque, 19.6)

 Antibióticos de tipo I: inactivación de modo directo de

la ARNpol. Rifamicinas, Estreptolidigina, α-Amanitina.

 Antibióticos de tipo II: inactivación de forma indirecta,

unión al ADN. Actinomicina D, Acridina, Bromuro de etidio.

 Antibióticos de tipo III: inhibición indirecta, unión a

ADN girasa. Novobiocina, Cumermicina A, Ácido nalidixico.

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Hasta la próxima clase

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