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ENZIMAS
Aminoácidos:
H
R C* COOH
Definición: NH2
Catalizadores biológicos;
Largas cadenas de pequeñas moléculas llamadas
aminoácidos.
Función:
Aumentar la velocidad de una reacción química.
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
Presencia de cofactores si No
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
E+S E+P
6
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
Descompone 5 millones
1 molécula de Catalasa de moléculas de H2O2
en 1 min; a pH = 6,8
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
Avance de reacción
9
CARACTERÍSTICAS
GENERALES
Estrutura Holoenzima
Enzimática
Proteína Cofactor
Ribozimas
Apoenzima o Puede ser:
Apoproteína • íon inorgánico
• molécula orgánica
RNA
Coenzima
Si es covalente
Grupo Prostético
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NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN
NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN
NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN
NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN
NOMENCLATURA Y
CLASIFICACIÓN
MECANISMO DE ACCIÓN
• MECANISMO GENERAL
E+S ES P+E
Sustrato se liga al
SÍTIO ACTIVO
de la enzima
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MECANISMO DE ACCIÓN
COFACTOR
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EVENTOS DEL
MECANISMO GENERAL
• FIJACIÓN DE S A E
EVENTOS DEL
MECANISMO GENERAL
• FIJACIÓN DE S A E
Koshland (1958): hipótesis: Ajuste Inducido, La
enzima no acepta simplemente al sustrato, sino que
también exige que el sustrato se distorcione a algo
cercano al estado de transición (Modelo Flexible).
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EVENTOS DEL
MECANISMO GENERAL
Catalisis Acido-base
Catalisis metálica
Catalisis covalente
Lys Lys
LigaseミAdenylate
H2N H2N
N NH2 N NH
N O N
P O
P
N O O N N O O
N H2C O H2C
O O O
O
P
+
ATP O
O O
OH O OH OH
OH P O
P
O P O
O
O O
O
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Catalisis ácido-base
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Catalisis ácido-base
RNase A:
His 12
Base General
Abstrae protón del 2’ hidroxilo.
His 119
Ácido general
Dona protón al hidroxilo 5´.
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Catalisis acido-base
25
Catalisis ácido-base
26
Catalisis ácido-base
27
Catalisis Metálica
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Cinética ENZIMÁTICA
Definición:
CINÉTICA: Estudia las velocidades de reacción
y los p/pios que permiten comprender cómo
suceden las reacciones.
¿Cuántos pasos se necesitan?
¿Qué p/pios químicos operan en cada paso?
¿Cuál es el paso más lento y, por tanto el que
limita la velocidad de la reacción total?.
CINÉTICA ENZIMÁTICA
1913
Leonor Michaelis -Enzimólogo
Maud Menten - Pediatra
K1 K2
E+S ES E+P
K-1
Mecanismo general
y ecuación de m-m
La ecuación mínima para la reacción más simple catalizada
por una enzima es:
Mecanismo general
y ecuación de m-m
Además, la velocidad de descomposición y formación de [ES] son
iguales (se supone “Estado Estacionario”):
Luego:
1/KM
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Mecanismo general
y ecuación de m-m
Reescribiendo: ; Reemplazando por [E] = [Et] – [ES]
Tenemos:
Significado de km y Vmax
Gráfico de MIchaelis-
menten (M-m)
Vmax [S]
v=
Km + [S]
v = Vmax [S]
v 1
Km
v = Vmax
2
1- [S] Km>>[S]
Vmax 3
2 2- [S] [S]>>Km
3- v = Vmax
2
Km [S]
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MÉTODOS GRÁFICOS
para calcular km
1
Vmax
-1 1
Km [S]
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MÉTODOS GRÁFICOS
para calcular km
Gráfico de Eadie-Hofstee
v
vV K
max m [S]
Vmax
Inclinación = -Km
v
Vmax
Km
v
[S]
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Cinética de la
inhibición ENZIMÁTICA
INHIBIDORES
Unidos por interacciones Unidos por interacciones
no-covalentes covalentes
REVERSIBLES IRREVERSIBLES
Inhibición COMPETITIVA
Km aparente (K’M) de
la enzima. K’M>KM
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Inhibición COMPETITIVA
K1
E+S ES K2
E+P
+
I
[ E ][ I ]
KI
KI [ EI ]
Michaelis-Menten
Vmax[ S ]
v
[I ]
EI K m (1 ) [S]
KI K’
M
Lineweaver-Burk
1 1 Km [I ] 1
(1 )
v Vmax Vmax K I [S]
40
Inhibición COMPETITIVA
V’máx= Vmáx
K’M>KM
1- sin inhibidor
2- con inhibidor a una concentración [I1]
3- con inhibidor a una concentración [I2] > [I1]
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Inhibición COMPETITIVA
Ejemplos:
Intoxicación por metanol → antídoto: Etanol. Así:
No produce ceguera
Inhibición COMPETITIVA
Inhibición
no-COMPETITIVA
I no tiene semejanza
estructural con el S
[substrato] no diminuye la
inhibición
Km de la enzima NO se altera
Inhibición
no-COMPETITIVA
KS K2 [ E ][ I ] [ ES ][ I ]
E+S ES E+P KI
[ EI ] [ EIS ]
+ +
I I
KI KI
KS
EI + S EIS
Michaelis-Menten
Vmax [ S ]
v
K m (1
[I ] [I ]
) [ S ](1 )
KI KI
Lineweaver-Burk
1 Km [I ] 1 1 [I ]
(1 ) (1 )
v Vmax K I [ S ] Vmax KI
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Inhibición
no-COMPETITIVA
V’máx< Vmáx
K’M=KM
1- sin inhibidor
2- con inhibidor a una concentración [I1]
3- con inhibidor a una concentración [I2] > [I1]
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Inhibición
aCOMPETITIVA
Km y Vmax de la enzima
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Inhibición
aCOMPETITIVA
KS K2
E+S ES E+P
+
[ ES ][ I ]
I KI
[ EIS ]
KI
Vmax
[S]
EIS 1
[I ]
Ki
v
Michaelis-Menten Km
[S]
[I ]
1
KI
1 Km 1 1 [I ]
Lineweaver-Burk (1 )
v Vmax [ S ] Vmax KI
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Inhibición
aCOMPETITIVA
V’máx< Vmáx
K’M<KM
1- sin inhibidor.
2- con inhibidor a una concentración [I1]
3- con inhibidor a una concentració [I2] > [I1]
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Mecanismos de
regulación enzimática
FOSFORILACIÓN
Cinasas: Transfieren un -PO3-2 del ATP a Ser, Tre y Tir (-OH).
Fosfatasas: Eliminan el fosfato por hidrólisis del R fosforilado.
Por lo general la fosforilación activa la enzima.
El cambio de –OH por –OPO3-2, ↑ la polaridad ⇒cambia la
conformación ⇒ influye en la actividad de la Enzima.
E E
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OXIDO-REDUCCIÓN
Formación o eliminación de enlaces disulfuros –S-S- entre los
grupos R de las cisteínas.
Esto causa un cambio de conformación que influye en la
actividad de la Enzima.
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ADENILILACIÓN
Transferencia de un grupo adenilato desde un ATP
Esto causa un cambio de conformación que influye en la
actividad de la Enzima.
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• MODIFICACIÓN COVALENTE
iiiIRREVERSIBLE
ZIMÓGENOS:
Son proteínas precursoras inactivas (carecen de
iiiiSitio Activo).
Sufren modificaciones por Proteasas que los
iiiitransforman en su formas activas.
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ENZIMAS alostéricas
ENZIMAS alostéricas
Subunidad Catalítica
Subunidad Reguladora
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ENZIMAS alostéricas
isoZIMAS