TÉCNICA

HISTOLÓGICA
INTEGRANTES:

MACHAHUAY GAMBOA, SARA

MANCHEGO ALFARO, ANTHONY
MALDONADO SIGUAS, STHEFANNY

DR. JOSÉ JIMENÉZ APARCANA

CONCEPTO:
 Son procedimientos especiales a
los que se somete el material en
estudio para realizar el examen
microscópico. Este examen
puede ser de dos tipos: El
Mediato y el Inmediato.

 Examen Mediato: se realiza en

cortes de órganos de un animal
muerto recientemente, o frotises
de sus células.

A. Para Los frotises.

B. Para Los cortes histológicos.
 Examen Inmediato: Se realiza en el animal o las células en
vivo de la siguiente manera.

A. Examen al estado fresco sin recurrir a reactivos

modificatorios.
B. Examen en coloración Intravital.
C. Examen en coloración Supravital.

Líquidos fisiológicos más

usados:

• Líquido de Ringer, para animales

invertebrados.
• Líquido de Locke, para animales
vertebrados.
• Líquido de Tyrone, para animales
vertebrados.
FIJADORES FÍSICOS Y
QUÍMICOS
Condiciones de un buen  Fijadores físicos: como el
Fijador calor, el frio y la desecación;
son poco usados. Son
i. Matar rápidamente las células. frecuentes en los cortes por
congelación, siendo la ventaja
ii. Conservar los detalles
estructurales. que el procedimiento es rápido
y la desventaja que la fijación
iii. No dificultar su corte y termina temperatura ambiente.
coloración.

iv. Impedir la aparición de

estructuras artificiales.
 Fijadores químicos: son
sustancias químicas que
v. Matar bacterias y gérmenes. sustituyen al agua en los
tejidos, producen enlaces
vi. Inactivar las enzimas que
estropean el tejido.
cruzados, otros oxidan,
reducen o precipitan en granulo
vii. Poseer alto poder de fino las sustancias orgánicas.
penetración.
 FIJADORES QUÍMICOS
 Principales fijadores
Químicos Simples Principales fijadores
Químicos Compuestos

i. Formol al 10% i. Alcohol Éter.

ii. Alcohol etílico ii. Liquido de Flemming.
iii. Liquido de Zencker.
iii. Alcohol metílico
iv. Liquido de Muller.
iv. Ácido Acético al 3 a 5%
v. Liquido de Helley.
v. Ácido Pierico vi. Liquido de Heidenhaing.
vi. Ácido Crómico 0.5 a 2% vii. Liquido de Boúin.

vii. Bicromato de Potasio 1 a 2% viii. Liquido de Boúin

Alcohólico.
viii. Bicloruro de Mercurio al 6%

ix. Tetraóxido de Osmio 1 a 2%

ELECCIÓN DE FIJADOR

 Para estudios citológicos, usar

acido Osmico o Flemming, el
Zecker fija mejor el citoplasma;
el acido Osmico mas el acido
Crómico fijan mejor el núcleo.
Pero el fijador de elección es la
mezcla Alcohol Éter.
 Para estudios citoquímicos,
elegir el alcohol absoluto o los
fijadores físicos.
 Para estudios citológicos en
general, usar el formol o
mesclas fijadoras que no se
opongan a la posterior
coloración.
OBTENCIÓN DE LA PIEZA
Muerto el animal o persona; o
sacado el trozo de tejido por biopsia,
rápidamente debe ser sometidos a la
acción del fijador escogido.
Si hay que fijar animales completos,
se debe inyectar el fijador por vía
vascular.
Si es un Órgano hueco, se lava su
contenido con solución fisiológica y
llenarlo con el fijador; ligar en ambos
cabos y sumergirlo en el fijador.
Si el órgano es de consistencia
gelatinosa(difícil de cortar), se fijara
todo el órgano y luego de unas horas
se cortara la parte deseada.
TAMAÑO DE LAS PIEZAS
 Dependerá del poder de
penetración de cada
fijador.

 En general piezas deben

ser pequeñas, entre 1cm
o 0.5cm de grosor.

 El volumen del fijador a

usarse debe ser de unas
30 o 40 veces superior al
tejido a fijarse, teniendo
en cuenta que éste no
debe de asentarse en el
fondo del recipiente.
DURACIÓN DE LA FIJACIÓN

 Depende del poder de

penetración, el volumen de
la pieza y la temperatura.

 El formol fija en 6 horas, el

Flemming de 6 a 24h.,el
Bouin de 1 a 3 días y el
Zencker de 12 a 24h.

 Se recomienda que para

sustancias muy autolíticas
fijar en bajas temperaturas.
LAVADO Y CONSERVACIÓN
DE LAS PIEZAS
 Luego de la fijación, se
procede con el lavado con
agua para quitar el fijador y
no interfiera con las
posterior coloración.
 Para formol de lava de 1 a 2
horas, para Ácido Ósmico y
bicromatos 24 horas, si
contiene Ácido Pícrico el
fijador, no se debe lavar.
 Luego de lavada de las
piezas histológicas, deben
proceder a una batería de
inclusión para la formación
del bloque en parafina.
 1) Deshidratación
El tejido contiene agua
que impide que penetre la
Parafina.
Se saca el agua con el
alcohol etílico absoluto.
Mediante una batería de
alcoholes de
concentración creciente(1-
6h).
5) Montaje
Obtenido el corte, se
extiende en agua
calentada a 40°C.
Luego con una lamina
porta objetos(impregnada
con una capa de albumina
de Mayer) se recoge el
corte y se coloca en una
estufa a 40-45°C durante
15 a 20min.
2) Impregnación por un
disolvente de la
Parafina
Como la parafina no se
disuelve en alcohol, es
necesario sacarlo del tejido y
reemplazarlo por xilol.
Consiguiendo una cierta
transparencia de la pieza de
estudio. 3) Inclusión de la
Parafina
Se usa parafina que se
funde a 52-55°C(1-3h) para
que penetre.
Luego se precede a la
4) Cortes Histológicos
formación del bloque,
llamadas “Leuckart” el
Se tiene que obtener cortes tejido estará orientado al
muy finos, de 5 micras de
fondo del bloque y se
espesor. espera a que se solidifique
la parafina.
Para ello se utilizara los
Microtomos, que porta
cuchillas filosas. Para
facilitar el corte, se enfría
con hielo los bloques.
 COLORACIÓN
La coloración más usada es la de hematoxilina eosina, para lo cual se debe
seguir los siguientes pasos:
 Desparafinización: la parafina del corte debe ser eliminada por ello se
emplea xilol (toluol o benzol).
 Hidratación: cuando los cortes están deshidratados, se hidrata para que
actué el colorante.
 Coloración por la hematoxilina: Este colorante es básico y tiñe de
preferencia el núcleo que es basófilo, de un color rojizo en un tiempo de 5
a 15 min.
 Coloración con eosina: colorea el citoplasma empleando solución
acuosa de eosina al 1% durante ½ a un 1 min.
 Deshidratación: para que el tejido pueda ser guardado es necesario
quitar el agua al tejido, por lo cual se somete a la acción de baterías de
alcoholes de 70, 80, 90 y 100°, aplicando ½ min y otro ½ min en un frasco
de alcohol absoluto.
 Aclaración o diafanización: es necesario eliminar el alcohol con dos
baños consecutivos de xilol que a la vez hace mas transparente al tejido.
 Montaje: sobre una laminilla se deposita una gota de bálsamo de Canadá
que ademas de actuar como sustancia adherente.
 TEORÍAS DE LA
COLORACIÓN
Teoría química:
El colorante se une a
Teoría física: el
la sustancia
colorante se adhiere
coloreada y se
por absorción.
combina íntimamente
con ella y forma sales
insolubles.

Teoría físico- química: la

coloración depende de una
precipitación de colides ácidos,
frente a colorantes básicos y de
la coloración por impregnación,
según la dispersión de los
líquidos colorantes y de la
densidad de las estructuras
colorantes.
 CLASIFICACIÓN DE LOS
COLORANTES
 Colorantes naturales extraídos:
1. Animales como el carmín
2. Vegetal como la hematoxilina, la orceina, azafrán,
pimentón, etc.

 Colorantes artificiales o sintéticos: son productos

derivados de la destilación de la hulla y se les conoce
como colorantes de anilina.
1. Ácidos: su base es incolora y el acido coloreado.
2. Básicos: poseen la base coloreada y el acido
incoloro.
3. Neutros: son sales cuya base y acido son colorables.
4. Indiferentes: no forman sales, tienen un poder
disolvente superior al liquido en el que van
disueltos, o sea sin insolubles al agua y soluble al
alcohol y mas aun en grasas.
 TIPOS DE COLORACIÓN
 Ortocromática: los tejidos adquieren un color
igual al de la solución colorante empleada.

 Metacromática: cuando el tejido se tiñe de

color diferente al colorante empleado,
virándolo.
 MÉTODOS DE COLORACIÓN
 Directa: cuando existe afinidad entre el objeto y la solución colorante.
 Indirecta: necesita de mordientes para que el colorante coloree(laca).
 Coloración progresiva: cuando se hace actuar el colorante hasta
que llegue a su punto optimo.
 Coloraciones regresiva: cuando se realiza una sobre coloración,
luego el exceso se elimina mediante diferenciadores.
 Coloración electiva:

1. Coloración simple
2. Coloración combinada
 Coloración panóptica: es una coloración combinada realizada por
colorantes neutros.
 Coloración pancrómica: cuando en un solo baño se mezclan los
colorantes neutros y se tiñe el objeto.
 Coloración en masa: cuando se colorea la pieza en conjunto antes
de cortarla.
 Coloración en cortes: colorea cada corte por separado
 CORTES POR CONGELACIÓN

 Los cortes realizados en un

criostato (todo el proceso
se realiza en una cámara a
-20°C), o en un micrótomo
de congelación.

 Se recogen directamente
en un portaobjetos.
 CITOQUÍMICA MICROSCÓPICA
 Con esta técnica se busca producir algún color
o contraste especial en la célula.
Ejm:
 Método de feulgen.
 La desoxirribonucleasa(enzima)
 Las fosfatasas(enzimas)
 Las mitocondrias
 Ciertos colorantes especiales como el verde de
metilo mas pironina, tiñen el DNA y RNA de
rojo.
 La microespectrografía.
GRACIAS
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