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CURSO:
BIOTECNOLOGIA
DOCENTE:
M.Sc. JHON GARCIA LOPEZ
INTEGRANTES:
S
E
C
L
O
N
A
TIPOS DE CLONACION:
SEGÚN EL METODO
• Partición (fisión) de
Embriones Tempranos:
Analogía con la
gemelación natural. Los
individuos son muy
semejantes entre sí, pero
diferentes a sus padres.
Es preferible emplear la
expresión gemelación
artificial, y no debe
considerarse como
clonación en sentido
estricto.
• Paraclonación:
Transferencia de
núcleos procedentes
de células fetales en
cultivo a óvulos no
fecundados
enucleados y a
veces, a zigotos
enucleados. El
"progenitor" de los
clones es el embrión
o feto.
• Clonación Verdadera:
Transferencia de núcleos
de células de individuos
ya nacidos a óvulos o
zigotos enucleados. Se
originan individuos casi
idénticos entre sí (salvo
mutaciones somáticas) y
muy parecidos al donante
(del que se diferencian en
mutaciones somáticas y
en el genoma
mitocondrial, que procede
del óvulo receptor).
TIPOS DE CLONACION:
SEGÚN EL OBJETIVO
La clonación reproductiva está dirigida al nacimiento de individuos
completos genéticamente idénticos. Implica la implantación del embrión
clonado en el útero de una madre, el desarrollo del mismo y el nacimiento
de un individuo. Se obtiene un individuo genéticamente idéntico, sin
necesidad de relaciones sexuales.
La clonación terapéutica Está
limitada a la fase celular y
tiene como principal finalidad
la obtención de las
denominadas células madres.
Las células madre son células
capaces de reproducirse
indefinidamente y que,
estimuladas adecuadamente,
pueden evolucionar y
diferenciarse hacia cualquier
tipo de tejido, ya sea piel,
tejido nervioso o muscular.
Estos tejidos se podrían
utilizar para tratar a pacientes
con una gran variedad de
enfermedades sin problemas
de rechazo. La clonación
terapéutica es pues desde el
primer momento instrumental,
como un medio para generar
células madre, mientras que
la clonación reproductiva tiene
como finalidad la reproducción
humana por medios
asexuales.
• Normalmente, la información
genética se transmite por
mecanismos de reproducción sexual
transmisión genética vertical.
_ Palmiter y col., obtuvieron ratones transgénicos gigantes al inyectar en el pronúcleo de un cigoto el gen
de la rata que codifica para la hormona del crecimiento. Incluso, se obtuvieron también ratones
transgénicos gigantes cuando el transgen introducido era el gen humano que codifica para la
hormona de crecimiento.
Durante el ciclo vital de una célula – con sus dos
estadios (Interfase y división) –, la duplicación del
ADN se lleva a cabo durante el período S (sintético)
de la interfase.
El período que precede al S es el G1 ( gap,
brecha), y el que le sucede, G2. EI ciclo de división
celular sigue, los siguientes pasos:
- G1, S, G2, mitosis, y recomienza en G1.
- Hay informes sobre anomalías en este sentido, por ejemplo, un acortamiento significativo de los
telómeros, lo que parece un indicio de la edad celular. Los telómeros restauran su longitud normal
en la línea germinal, que por definición no tuvo lugar en la producción con este tipo de técnica. Es
posible que los efectos fisiológicos en el acortamiento de la edad de los animales clonados se
reflejen tras varias generaciones. Sin embargo, otros informes sobre las terneras clónicas
parecen indicar que ocurre lo contrario, un rejuvenecimiento según ciertos parámetros
moleculares.
• La clonación consiste
en crear individuos
iguales genéticamente.
Pero no tienen por qué
ser iguales
fenotípicamente ya que
el ambiente influye
mucho.
DIVISIÓN ARTIFICIAL DE EMBRIONES:
• En el estadío de mórula
se puede dividir el
embrión en 2 embriones:
• 1_ Disociación de
blastómeros a separar en
una célula cuando el
embrión es joven (2,4 u 8
células).
• 2_ Bisección embrionaria
de mórula o blastocisto.
- DISOCIACIÓN DE BLASTÓMERAS:
La zona pelúcida natural se
disgrega con pronasa y se
• Podemos separar células totipotenciales (antes de colocan los embriones en
la activación del genoma) y tendremos individuos Ca para separar los
clónicos. blastómeros.
Los embriones se
impregnan en 1% de
• Primero hay que eliminar la membrana pelúcida. alginato y se transfieren a
• Después retirar la célula a un medio en el que no medio con Cl2Ca, que
haya ni Ca., ni proteína ni Mg., la célula se separa: induce la polimerización.
Cada mitad o trozo
desgajado del embrión es
-Embrión de 4 células para la obtención de 4
"absorbido mediante una
individuos. pipeta y se lo introduce en
-Embrión de 8 células donde las blastómeras ya una zona pelúcida de otro
tienen una historia y el reloj biológico no se óvulo, o en una cubierta
reprograma. Los blastocistos que se formen serán artificial (zona pelúcida
pequeños y dificulta más la implantación (pero si artificial), y se implanta.
son totipotenciales). El resultado son individuos
idénticos entre sí (salvo
mutaciones somáticas),
• Si se hace una división del embrión de 8 células,
pero no "idénticos" a sus
funciona mejor hacer 2 embriones de 4 células o 4 padres sino "combinación"
embriones de 2 células. de sus cromosomas. Serían
equivalentes a gemelos
• Para la transferencia de los embriones se vuelve a monocigóticos.
colocar la zona pelúcida.
Hall y Stillman, (U.
George • Estos embriones estarían en el oviducto y sin zona
Washington), dieron
a conocer un pelúcida se puede provocar:
experimento de · Gestaciones ectópicas en el oviducto.
clonación
(gemelación artificial · Respuesta inmunitaria en el oviducto por parte de la
o inducida) por madre (no en el útero y no haría falta la zona pelúcida).
separación de
blastómeros de 17 · Necesaria para la compactación de la mórula.
embriones humanos • Estas zonas pelúcidas vienen de donantes.
de 2, 4 y 8
células, (obteniendo - Los factores que afectan son:
una media de unos 3 • Pérdida de zona pelúcida.
embriones nuevos
por cada embrión
original). Los
embriones utilizados
• Pérdida de contacto entre las blastómeras y puede ser
eran genéticamente perjudicial.
anormales
(poliploides:
fecundados con más • Al no reprogramarse el tamaño reducido del blastocisto
de un por el bajo número de células.
espermatozoide.)
Congreso de la
Sociedad • Actualmente es una forma poco utilizada porque estos
Americana de
Fertilidad. Montreal, embriones se encuentran en el oviducto y seria
Canadá, Octubre, 13 necesaria la intervención quirúrgica.
de 1993
- BISECCIÓN EMBRIONARIA:
• Puede ser de mórula o blastocisto.
• En el blastocisto tenemos que cortar por la mitad de la masa celular
interna. Cada medio embrión se llama hemiembrión.
• Sólo hace falta un medio sin proteína (los embriones se enganchan en el
fondo de la placa). Se añade sacarosa para hacer un medio hiperosmótico
así el embrión pierde agua, se colapsa y es más fácil cortar. Se corta con
una cuchilla.
• Las posibilidades del éxito dependen de:
- Transferencia del embrión entero 60% de gestación.
- Transferencia de hemiembrión 45-50% de gestación. Pero si se suman
los dos, como mínimo conseguiremos un embrión. Por lo tanto, podemos
mejorar la tasa de gestación. Además, en la especie bovina, al ser los dos
individuos del mismo sexo, no hay free-martinismo.
• Lo que también se puede hacer es:
• -Implantar un embrión.
• -Congelar el otro embrión y para esperar el valor biológico del otro
hemiembrión, se puede hacer el sexaje con células que quedan libres en el
medio a la hora de la bisección o sexaje por PCR.
• Cuando se congelan los hemiembriones, se disminuye la tasa de gestación
al 20%.
• Como la mórula y el blastocisto ya están en el útero, no se requiere la zona
pelúcida.
• Este método es el más usado.
- TRANSFERENCIA DE NÚCLEOS:
- Se usa:
• Karyoplast o núcleo
donante. Consiste en transferir el
• Cytoplast o citoplasma material del núcleo
receptor. (incluyendo el
nuclear
- Se pensaba que sólo se ADNnuclear) de una
podía hacer: célula del individuo
• Karyoplast o debía ser originante
una célula totipotente. Esta Consiste en extraer
• Cytoplast u oocito de transferencia
metafase II. ADNmitocondrial de
selectiva una célula proveniente
- Ya se había conseguido puede ser
en los años ’80, la de una donante fértil
obtención del para introducirla en el
citoplásmica
Karyoplast: gameto de una mujer
• Puede ser sólo un con problemas de
núcleo. fertilidad por problemas
• Toda una célula pero mitocondriales, a fin de
que tenga poco que pueda concebir.
citoplasma.
- La enucleación del cytoplast:
• El Cytoplast debe tener mucho
citoplasma, se suele usar
microscopía de fluorescencia
para eliminar la placa
metafásica para enuclear. Hay
especies en las que se ve
bien.
• Se inyecta el Karyoplast en el
espacio perivitelino.
• Se produce una descarga
eléctrica que provoca fusión
de las membranas y activación
partenogénica del Cytoplast.
• La descarga eléctrica simula la
entrada del espermatozoide.
• La activación del Cytoplast
también permite la
reprogramación del Karyoplast
o pérdida de la memoria.
• Actúa como célula embrionaria
una célula.
• La causa de la reprogramación son factores que se encuentran en el
citoplasma de los ovocitos en metafase II y, actualmente, son
desconocidos. La utilización de ovocitos en otras fases disminuye el
porcentaje de reprogramación.
- Obtención de los Karyoplast:
• A partir de blastómeras de embriones preimplantacionales (2, 4, 6, 8 células
y mórulas).
• A partir de blastocistos o células de la masa celular interna. Además, las
podemos ir cultivando y que se vayan multiplicando. Son las Stem Cells.
Son células genéticamente iguales.
• A partir de la líneas de células somáticas de feto (células ya diferenciadas).
Estas células también se pueden cultivar de forma indefinida.
• A partir de células somáticas de animales adultos (oveja Dolly - glándula
mamaria).
• También se puede hacer de células a partir de biopsia de cualquier tejido y
cultivo de células.
• Hace poco se ha demostrado que se pueden reutilizar los embriones
clonados otra vez como Karyoplast, esto permite hacer ciclos indefinidos de
un mismo individuo clonado.
• DOLLY
Se ha visto que debe haber una misma actividad nuclear entre el
Karyoplast y el Cytoplast. El oocito en metafase II tiene un estado letárgico
y pasa a quiescente.
• Las células del Karyoplast debían estar en la fase G0 o quiescente. Es fácil
de conseguir disminuir del 10% del suero habitual al 5% y no tendrá
nutrientes y se detendrá su actividad.
1. Ovocito haploide
2. Eliminación del
núcleo (radiación o
medios mecánicos)
3. Núcleo eliminado,
el/ los ovocito/s
está/n listo/s para
ser transferido/s.