Produção do Bioaroma Acetoína por

Hanseniaspora guilliermondii
CCT3800 através de processo
fermentativo.

Roseli Aparecida de Mello Bergamo (Mestre)

Curso de Bacharelado em Biotecnologia, Universidade Tuiuti do Paraná

Jorge Luiz Ninow (Doutor)

Departamento de Engenharia Química, Universidade Federal de Santa Catarina
Universidade do Extremo Sul de Santa Catarina – UNESC
Curso de Engenharia Química
Disciplina: Engenharia Bioquímica

Acadêmicas
Fernanda Anderson Paiter
Jessica Leal Eufrasio;
Joana Gomes Meller;
Juliana Macarini.
1. Introdução

 Biotecnologia industrial: É um conjunto de

técnicas que permite gerar produtos de
interesse econômico e/ou social, a partir de
organismos vivos e/ou de seus componentes
metabólicos.
1. Introdução

 Aromas: Sintéticos X Naturais

1. Introdução

 Acetoína: É um aromatizante utilizado pelas

indústrias de alimentos, na formação de
produtos lácticos e bebidas. Produzido
geralmente por processos fermentativos,
utilizando bactérias e leveduras.
1. Introdução

 Bioprodução de aromas: Leveduras e

bactérias.

 Hanseniaspora guilliermondii
Levedura produtora de acetoína.
Processo de fermentação por
leveduras para produção de whisky.
2. Objetivo

 O presente trabalho tem como objetivo o estudo

da produção de acetoína por Hanseniaspora
guilliermondii em processos fermentativos. A
partir de testes com diferentes concentrações
iniciais de glicose como fonte de carbono;

 Modelar os dados cinéticos e fazer uma

comparação com os fornecidos pelo artigo.
3. Materiais e Métodos

 Microorganismo:Hanseniaspora guilliermondii
CCT 3800;

 Meio de cultura: O meio utilizado foi o meio YM

(Yeast Malt Extract) composto por extrato de
levedura (3,0 g.L–1); extrato de malte (3,0 g.L-1);
bactopeptona (5,0 g.L-1) e glicose (64,0 g.L-1),
pH 5,5 corrigido com ácido cítrico 0,5% e
esterilizado por 15 minutos a 121oC.
3. Materiais e Métodos
 Determinação da concentração celular foi realizada
por dois métodos:

1. Indiretamente por turbidimetria;

2. Diretamente por gravimetria.

 Determinação da concentração de glicose: Foi

determinada através do teste enzimático colorimétrico;

 Determinação da concentração de acetoína: Foi

determinada por cromatografia em fase gasosa.
3. Materiais e Métodos
 Ensaios em frascos agitados “Shakers”: Tem como
objetivo testar diferentes concentrações iniciais de
glicose como fonte de carbono para produção de
acetoína;

 Metodologia para cálculo da fermentação em frascos

agitados:

1. A partir dos perfis de crescimento celular de produção de

acetoína e consumo de glicose com o tempo, foi possível
determinar, a formação de produto e consumo de
substrato.
3. Materiais e Métodos
2. A velocidade específica na fase exponencial de
crescimento foi determinada pela equação:
3. Materiais e Métodos
3. O fator de conversão de substrato (Glicose) em células é
expresso pela equação

X0 = Concentração inicial celular (g.L-1);

X = Concentração máxima celular (g.L-1);
S0 = Concentração de glicose (g.L-1).
S = Concentração final de glicose (g.L-1);
4. Resultados e Discussão
 Experimento foi realizado mantendo-se constante a
temperatura em 30ºC, pH inicial de 5,5 velocidade de
agitação de 150rpm;

 Variou-se a concentração inicial de glicose no meio

para verificar sua influência nos parâmetros cinéticos, o
qual os resultados estão descritos na tabela 1.
Tabela 1 – Parâmetros cinéticos para a produção de acetoína em diversas concentrações de glicose.
4. Resultados e Discussão
 Na tabela 2 estão descritas as conversões de substrato
em célula e a velocidade específica de crescimento da
levedura.
Tabela 2 – Parâmetros cinéticos do crescimento celular.

 A análise das curvas de crescimento representadas

nas Figuras 1,2,3 e 4, permitem verificar que a fase de
adaptação (lag) foi pequena.
4. Resultados e Discussão
 O Início do crescimento microbiano deu-se após 4
horas de fermentação para todas as concentrações;

Figura 1 – Cinética do crescimento de Hanseniaspora guillermondii em frascos agitados, evolução da

concentração celular, glicose e acetoína à concentração de 40g/L.
4. Resultados e Discussão

Figura 2 – Cinética do crescimento de Hanseniaspora guillermondii em frascos agitados, evolução da

concentração celular, glicose e acetoína à concentração de 50g/L.
4. Resultados e Discussão

Figura 3 – Cinética do crescimento de Hanseniaspora guillermondii em frascos agitados, evolução da

concentração celular, glicose e acetoína à concentração de 60g/L.
4. Resultados e Discussão

Figura 4 – Cinética do crescimento de Hanseniaspora guillermondii em frascos agitados, evolução da

concentração celular, glicose e acetoína à concentração de 70g/L.
4. Resultados e Discussão
 Com base nos resultados obtidos nas Figuras 1,2,3 e
4, verifica-se que ocorre uma queda acentuada na
produção de acetoína, conforme o substrato foi
consumido;

 Provavelmente a acetoína esta sendo reduzida a 2,3

butanodiol ou algum outro metabólico com diacetil;

 Com elevadas concentrações a levedura tende a

converter a acetoína em subprodutos, por isso se faz
necessário baixa faixa de concentração, controle do pH
e aeração.
4. Resultados e Discussão
 Na tabela 3 estão representados os fatores de
conversão de substrato em célula(gX/gS) descritos no
artigo e os calculados pela equipe.

Tabela 3 – Parâmetros cinéticos do crescimento celular.

4. Resultados e Discussão
 Na Tabela 4, estão representados os fatores de
conversão de glicose em produto(gP/gS) descritos
no artigo e os calculados pela equipe.

Tabela 4 – Fator de conversão de glicose em produto (P) para diferentes concentrações iniciais de glicose
obtidos no artigo e os calculados.
4. Resultados e Discussão
 Na Figura 6, esta representado a curva obtida via
Curving Fitting Tool Box no MATLAB, para
determinação do µmax (0,399 h¯¹) e o Ks (12,38
g.L¯¹).

Figura 6 – Dados obtidos no Curving Fitting ToolBox.

4. Resultados e Discussão
 Na Figura 7, esta representado a modelagem dos
dados cinéticos de crescimento microbiano obtidos
no artigo via MATLAB.

Figura 7 – Modelagem constantes cinéticas do artigo.

4. Resultados e Discussão
 Na Figura 8, esta representado a modelagem dos
dados cinéticos de crescimento microbiano obtidos a
partir dos resultados do Curving Fitting ToolBox no
MATLAB.

Figura 8 – Modelagem constantes cinéticas obtidas na ODE.

4. Resultados e Discussão
 Modelagem Reator CSTR:

Fase de crescimento: Fase Exponencial, logo o µmáx =µx;

Balanço de massa para células:

5. Conclusões
 Conclui-se que a concentração inicial de glicose que
apresentou o melhor fator de conversão de substrato
em produto, foi a fermentação onde a concentração
inicial de glicose foi de 40g/L;

 Comparando os resultados obtidos para os fatores

de conversão de substrato em produto (Yp/s) foram
bem próximos aos resultados mostrados no artigo;
5. Conclusões
 Comparando a modelagem dos dados do artigo com
os dados obtidos via Curving Fitting ToolBox,
conclui-se que ambos tem o mesmo comportamento
quanto ao X, S e P (g/L);

 O volume para um CSTR com alimentação de 2,5

L/h e com velocidade de crescimento específica de
0,59(h-¹) é de 4,25L.
6. Referências
LEHNINGER, Albert Lester; NELSON, David, L.; COX,
Michael M. . Lehninger princípios de bioquímica. 4.ed São
Paulo: Sarvier, 2006. 1202 p.

SCHMIDELL, Willibaldo, LIMA, Urgel de Almeida,

AQUARONE, Eugênio, BORZANI, Walter. Biotecnologia
industrial. São Paulo: Edgard Blücher, 2001. 4 v.

SHULER, Michael L.; KARGI, Fikret. Bioprocess

engineering: basic concepts. 2nd ed New Jersey: Prentice
Hall, c2002. 553 p.