INTEGRANTES:

- Michue corsino, Luz

- Orihuela Iparraguirre, Gerardo
- Francia Vega, Danny
- Durand Galarreta, Briguitt
- Espinoza Medrano, Kiara
Microorganismos utilizado en biotecnología

Aislamiento de microorganismos

Procedimientos de screening

Mejoramiento de cepas

Producción a pequeña escala

Producción a gran escala. Fermentadores

MICROORGANISMOS UTILIZADOS EN BIOTECNOLOGIA

Biotecnología de Organismos

. Se puede trabajar con organismos intactos y sus células.

. Se utilizan organismos que NO tienen modificaciones introducidas por
ingeniería genética. Se analizan y utilizan las variaciones genética naturales.
. Se optimizan las condiciones de producción y crecimiento.

Biotecnología Molecular

. Se cambia la información genética del organismo

Se puede alterar la estructura o partes de la células
Involucra técnicas de ingeniería genética
Da como resultado organismos recombinantes
CARACTERISITCAS VENTAJOSAS DE LOS MICROORGANISMOS
USADOS EN BIOPROCESOS

 Degradación de polímeros heterogéneos hasta azucares

simples.
 Fermentación simultanea de una mezcla de azucares.
 Tolerancia a la concentración creciente del producto
final y a las condiciones del proceso de fermentación.
 TIPOS DE PRODUCTOS MICROBIANOS

. Metabolitos primarios
 Producidos durante la fase de crecimiento
 Aminoácidos, nucleótidos, producto finales de
fermentación y enzimas.

. Metabolitos secundarios
 Acumulados tras el crecimiento activo.
 No relacionados directamente con la síntesis de
material celular.
 Antibióticos y micotoxinas.
 PRODUCTOS DE INTERES INDUSTRIAL

Alcoholes: etanol

a.a: acido Glutamico, lisina, ornitida

Acidos organicos: acético, cítrico. Glutamico

Vitaminas: cianocobalamina (B12), riboflavina (B2)

Polioles: glicerol

Nucleotidos: 5 guanilico, 5 inosinico

 METABOLITOS PRIMARIOS
• VITAMINAS, AMINOACIDOS Y OTROS PRODUCTOS ORGÁNICOS

Uso de las vitaminas

• Suplemento alimentario para personas y animales
• La mayoría se producen por síntesis química
• La cobalamina y la riboflavina por fermentación
 PRODUCCION DE ETANOL

Fermentación
Química etileno

Incremento del precio del petróleo

Agotamiento de las reservas

Fermentación
 DESARROLLO DE LA PRODUCCION DE ALCOHOL

Saccharomyces pp
Nuevas cepas tolerar etanol
fermentar azucares rápidamente
capaces de flocular

Estrategias
Fermentaciones continuas con reciclado de
levadura
Ídem con vacío para evaporar etanol
Levaduras inmovilizadas
 METABOLITOS SECUNDARIOS

Compuesto microbianos de uso medicinal

En 1928 Alexander Fleming descubrió el primer antibiótico.

Observo que el hongo Penicillium producia un antibiótico que
mataba a S. aureus.

Condiciones para la
producción de
metabolitos, deben ser
controladas.
• PRINCIPALES TÉCNICAS DESARROLLADAS:

• TÉCNICAS DE BÚSQUEDA, MUESTREO O “SCREENING”.

• CONSERVACIÓN DE CEPAS.

• FERMENTACIÓN

• INMOVILIZACIÓN DE CÉLULAS
FUENTES DE OBTENCION
DE MICROORGANISMOS

FERMENTACIONES NATURALES

SUELO

COLECCIONES INTERNACIONALES DE CULTIVOS TIPO

 SELECCION DE MICROORGANISMOS
• Screening (Búsqueda): Detección y aislamiento de
microorganismos de interés industrial de entre una población
compleja de organismos utilizando procedimientos selectivos.
• Screening Primario: Detección y aislamiento de
microorganismos potencialmente útiles.
• Screening Secundario: Estudio de los microorganismos
aislados en el screening primario para separar los que tienen
interés potencial de los que tienen interés real y mejorar estas
cepas seleccionadas.
 A partir de una muestra de suelo:
• 1.- La muestra de suelo se resuspende en agua estéril.
• 2.- La suspensión se diluye 10-1 a 10-10 veces.
• 3.- Muestras de estas series de diluciones (c.a. 100 µL) se siembran sobre
varios medios de cultivo (dependiendo del tipo de microorganismos que
queramos aislar) y luego se incuban.
• 4.- Se aislan colonias separadas de distinta morfología y se purifican por
resiembra.
• 5.- Los cultivos puros se mantienen en tubos de ensayo como cultivos en
medio sólido listos para realizar las pruebas de selección.
• El procedimiento de selección puede ser acelerado frecuentemente
probando la actividad biológica
Selección de microorganismos productores de antibióticos y
otros agentes inhibidores del crecimiento
• Los microorganismos pH ácido; Bacterias pH neutro
productores de antibióticos: Oxígeno: Todos los productores
bacterias (Bacillus, son aerobios Carbono:
Pseudomonas y Actinomicetos glicerol, quitina,
fundamentalmente almidón Nitrógeno:
actinomicetos) y hongos Actinomicetos caseina, arginina,
(Penicillium) asparragina; En general amonio
o nitrato.
• PARAMETROS
• Temperatura: Hongos 20-22˚C;
Actinomicetos 28˚C pH: Hongos
• Una vez crecidas las colonias que
nos interesan
• se utiliza un medio que contenga
el microorganismo que sea
susceptible de inhibirse su
crecimiento por los antibióticos
que queramos seleccionar: Gram
+, Gram -, amplio espectro, etc.
• Se aislan, para ensayos
posteriores, aquellas colonias que
produzcan halos de inhibición.
 Selección de microorganismos productores de vitaminas
• Necesitamos, un microorganismo
que posea un requerimiento para el
factor Bacillus subtilis. Aspergillus
niger. Candida utilis.
• El screening se realiza de forma
similar al de la producción de
antibióticos, aunque en este caso al
medio de cultivo le falta el factor de
crecimiento buscado, de tal manera
que el microorganismo sólo crecerá
alrededor de las colonias que
produzcan este factor de
crecimiento (halo de crecimiento).
• Screening: Diseño Experimental

i) Selección de sustratos y condiciones de reacción

ii) Criterios de selección de positivos

iii) Métodos de screening

a) Screenings consecutivos (modo jerárquico)

b) Screening automatizado a gran escala

 SCREENING - MICROORGANISMOS

a) Screening ecológico
b) Screening taxonómico
c) Screening por selección
d) Screening por detección
Procariotas : bacterias Gram (+)y Gram (-)
actinomicetos (bacteria Gram (+)con crecimiento micelial durante parte de su ciclo biológico)
pro-actinomicetos (bacteria Gram (+)con crecimiento micelial bajo determinadas condiciones)
Eucariotas : levaduras: organismos unicelulares

Hongos filamentosos: Hifas, puntas (crecimiento apical), crecimiento micelial Células en

trofofase alimentación y crecimiento
Células en idiofase : fase de diferenciación pared: quitina

Hifas no tabicadas: Ficomicetos

Hifas tabicadas: Ascomicetos : esporas en interior de las ascas

Basidiomicetos: esporas en el exterior de los basidios
Deuteromicetos
Criterios de selección de microorganismos
No ser patógenos

No producir substancias tóxicas

No tener actividad antibiótica

Condiciones de cultivo: sencillas, reproducible y escalables

Productividad enzimática
Fácil caracterización enzimática
Gran rendimiento
Ausencia de actividades colaterales
Fácil purificación de la enzima

Escalado facil de nivel de fermentación

 Screening
• Screening jerárquico

Screening específico

Ensayos - Sustratos

Screening secundario

Ensayos - Sustratos

Screening primario

Colección de potenciales biocatalizadores

II COLECCIÓN DE
MICROORGANISM0S
1. Selección de los Microorganismos

1. Asentamiento de la Colección

2. Protocolo de eliminación de residuos

2. Selección de los medios y condiciones de cultivo

para cada grupo taxonómico
• Selection de los microorganismos
416 microorganismos tipo I en la escala de bioseguridad
seleccionados buscando la máxima biodiversidad.
(Actinomicetos, bacterias, basidiomicetos, hongos
filamentosos, hongos marinos y levaduras)

Los microorganismos fueron seleccionados de parte pública de la

biblioteca microbiana de SmithKline-Beecham.

i) ATCC: American Type Culture Collection.

ii) CECT: Colección Española de Cultivos Tipo.

iii) DSMZ: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und

Zellkulturen.

iv) IMI: International Mycological Institute.

v) CBS: Centraalbureau voor Schimmelcultures. Holanda.

vi) NCYC: National Collection of Yeast Cultures. Reino Unido.

 Plan de Trabajo
Microorganismos y Cultivos Selección de la Colección
Medio Sólido

Asentamiento de la
Colección Almacenamiento
Medios de
cultivo
Cultivo en medio líquido Criogenización
Condiciones
Eliminación de residuos
Protocolo de biológicos
reasentamiento

Screening: Primera Fase

Duración de la biotransformación
Selección Sustratos
Diseño de
Protocolo experimentos
Concentración
Extracción

Condiciones de Identificación
Cromatografí compuestos y
a de gases Análisis
criterios de cálculo

Reasentamiento de Eliminación de
los Criterios de selección de los residuos
microorganismos microorganismos positivos que pasan a la orgánicos y
positivos siguiente fase biológicos
Screening: Segunda Fase

Selección Tiempo de
Sustratos contacto
Diseño de
Protocolo experimentos Concentración
Extracción
Identificación
Cromatografía Condiciones de compuestos.
de gases Análisis Criterios de
cálculo

Criterios de Selección de los

microorganismos positivos que pasan a
Inmovilización y al screening final

Reasentamiento de Eliminación de
positivos residuos
orgánicos y
biológicos

Optimización de los Biocatalizadores

 Inmovilización

Optimización del Biocatalizador

Liofilización Diseño de Técnicas de

directa experimentos Inmovilización

Elección del
soporte

Selección de los
mejores soportes de Diseño de
inmovilización para ensayos
cada microorganismo estadísticos

Screening Final
 Screening Final

Selección Sustratos Tiempo de

Diseño de contacto
experimentos Concentración
Protocolo Extracción

Cromatografía Condiciones de HPLC

de gases Análisis

Quiral
Quiral Aquiral Resultados Finales

Identificación NUEVOS BIOCATALIZADORES DE

compuestos CÉLULAS ENTERAS
y criterios de cálculo

QSAR-3D /CoMFA
Modelización molecular

CONCLUSIONES
 Colección de Microorganismos

Ascomicetos
36%

Actinomicetos
11%

Levaduras
Basidiomicetos 14% 71 Bacterias
14% 148 Ascomicetos
60 Basidiomicetos
Hongos Marinos 59 Levaduras
Bacterias 8% 45 Actinomicetos
17% 33 Hongos Marinos
Total 416
• Protocolo de eliminación de residuos
Residuos

Sólidos Líquidos

Urbanos o No
Biológicos Contaminantes
No Biológicos Contaminantes

Punzantes Punzantes Biológicos

Disolventes
No Punzantes No punzantes
Orgánicos

Halogenados

No
Halogenados