ANÁLISIS INSTRUMENTAL

TEMA 3
SEPARACIONES
CROMATOGRÁFICAS
Cromatografía de Gases-
Clase 2
Prof. Luis Peña
 Contenido
 Parámetros descriptivos de la cromatografía en columna
 Constante de distribución, Kc
 Factor de retención, k
 Factor de selectividad,  ij
 Resolución, Rs ij
 Eficacia de la columna
 Variables cinéticas que influyen en el ensanchamiento de
banda
 Ejercicios
Parámetros descriptivos de la cromatografía
en columna

Tiempo de Retención (tR): tiempo que tarda un soluto en desplazarse desde el

inyector hasta el detector
Tiempo de Muerto (tM): tiempo necesario para que los solutos no retenidos se
desplacen desde el inyector al detector
Tiempo de Retención Ajustado (tR´): tiempo medio que las moléculas de un
analito se mantienen retenidas por la FE
Anchura de Base (W): anchura de la banda cromatografica de un soluto medida
sobre la línea base
Parámetros descriptivos de la cromatografía
en columna
Para los varios componentes de la mezcla
Componente
No Retenido X Y
Señal
Z

tM tR X tR Y tR Z Tiempo

tR´ X

Para el componente i sería tR´i = tRi - tM

Parámetros descriptivos de la cromatografía
en columna

Un Componente No Retenido es una

sustancia totalmente afín a la FM, es decir
no tiene nada de afinidad a la FE

La velocidad de migración de la especie no

retenida coincide con la velocidad promedio
del movimiento de las moléculas de la FM

Tiempo
Muerto
Parámetros descriptivos de la cromatografía
en columna
Se sabe que el Tiempo de Retención depende de:

Afinidad con la Caudal de

Fase Estacionaria Alimentación del
Gas de Arrastre
A mayor afinidad con A mayor caudal
la FE mayor será el tR menor será el tR

Baja
resolución Picos suaves

Alto caudal tR bajos Bajo caudal tR altos

 Constante de distribución, Kc
La columna cromatográfica: serie de etapas independientes donde ocurre el
equilibrio entre el analito disuelto por la fase estacionaria y en el gas de
arrastre:

Ocurre un “cuasi-equilibrio” entre el analito adsorbido en

la FE y disuelto en el gas de arrastre.

AM AE

 AE 
Ki = Constante de Distribución del componente i

Ki  [AE] = concentración del analito en la FE

AM  [AM] = concentración del analito en la FM
 Constante de distribución, Kc
La constante de distribución Ki actúa como una constante de equilibrio y por lo
tanto depende de la temperatura, la cual a su vez tiene influencia sobre el
cromatograma:

Se desea una temperatura

que ofrezca picos agudos y
T1
con buena resolución

T2 >>T1 Bajan los tR y la resolución

de los picos

T3 <<T1 Aumentan los tR y se

obtienen picos suaves
 Factor de retención, k
El Factor de Retención o Factor de Capacidad es un parámetro importante
que con frecuencia se utiliza para describir las velocidades de migración de
los solutos en las columnas.

Para una especie i, el factor de retención k´i se define como:

Ki = Constante de Distribución del componente i

K i  VE
ki  VE = volumen de la FE
VM VM = volumen de la FM

El Factor de Retención o Factor de Capacidad es una medida de la

fortaleza con que la fase estacionaria retiene un soluto dado
 Factor de retención, k
También, el Factor de Retención o Factor de Capacidad de un soluto
puede determinarse en el cromatograma midiendo el tiempo muerto de
la columna y el tiempo de retención del soluto, así:
tR i  tM t R i
ki  
tM tM
Se sabe que:

Cuando k´i <<1, entonces la elución tiene lugar tan rápidamente que
es difícil determinar con exactitud los tR.

Cuando k´i ≈ 20 o 30, entonces los tiempos de elución son

excesivamente largos.

Idealmente, las separaciones se realizan en unas condiciones en

las que los k´i oscilan entre 2 y 10.
 Factor de selectividad,  ij
El Factor de Selectividad de una columna para dos especies i y j con
picos adyacentes en el cromatograma se define como:
k j t R j t R j  t M tR j  tRi
 ij   
ki t R i tR i  tM
Donde:
k´j = factor de retención para la especie más fuertemente retenida, la
especie j
k´i = factor de retención para la especie menos retenida o que eluye
con más rapidez, la especie i

Según esta definición  ij  1 , así que si se presenta que:

tRi  tR j  ij  1
No hay separación, la FE selecciona
igualmente a los dos componentes
 Resolución, Rs ij
La resolución del cromatograma es una medida cuantitativa del grado de
separación entre dos picos cromatográficos, es decir, una medida de la
“HABILIDAD” del método elegido para separar dos componentes

 
completamente
tR j  tRi 2 tR j  tRi
Rs ij  
0,5W j  Wi  W j  Wi
Rs = 0,75 Rs = 1,25 Rs = 1,50
Rs = 1,50
MÍNIMO
ACEPTABLE
Superposición de
las áreas de los
picos es menor a
0,13 %
 Eficacia de la columna

Al comenzar una
separación, el soluto
ocupa una estrecha
banda de anchura A medida que el soluto
finita. atraviesa la columna
se produce el
ENSANCHAMIENTO
DE BANDA

Figura 1. (a) Diagrama que muestra la separación de una mezcla de A y B por

cromatografía de elución en columna. (b) Señal de salida del detector en las distintas
fases de la elución mostradas en (a).
 Eficacia de la columna
La eficacia de la columna
proporciona una medida Se observa un ensanchamiento
cuantitativa de la magnitud del de ambas zonas, lo que
ensanchamiento de banda disminuye la eficacia de la
columna como sistema de
separación

Figura 2. Perfiles de concentración de las bandas de los analitos A y B a dos

tiempos distintos en su migración a lo largo de la columna de la figura 1. Los
tiempos t1 y t2 se indican en la figura 1.
 Eficacia de la columna
Martin y Synge propusieron la “Teoría de los Platos de Separación” aplicando
una analogía con las “Torres de Destilación”:
 Eficacia de la columna
Se supone que la columna cromatográfica está formada por una serie de
etapas separadas donde ocurre el equilibrio del analito entre la FE y la FM:

Cada “etapa” de equilibrio es llamada de

PLATO TEÓRICO

En la columna se delimita una ALTURA DE LA ETAPA (H) y se denomina

“PLATO TEÓRICO”
L
L  H  N  platos
L
H 
H
N platos
 Eficacia de la columna
Ellos llamaron a cada sección “Plato Teórico” y definieron la eficacia de la
columna en función del número de platos teóricos (N) o de la altura de un
plato teórico (H), así:
L L
L  H N H  N 
N H
Donde:
L: longitud de la columna
H: Altura Equivalente de Plato Teórico (AEPT) o (EHTP), por sus siglas
en inglés
N: número de platos teóricos

La eficacia de la columna mejora con el aumento del número de platos

teóricos (N) o con la disminución de la altura del plato teórico (H)
 Eficacia de la columna
Admitiendo un perfil gaussiano, el
número de platos teóricos de una
columna (N) puede ser calculado
por:
2
 tRi 
N i  16   

 Wi 

tRi
N Columna más
wi eficiente
 Eficacia de la columna

ATENCIÓN:

Es importante recordar que un plato teórico es una construcción

artificial y que en una columna cromatográfica no existen realmente
tales platos.

De hecho, el número de platos teóricos depende tanto de las

propiedades de la columna como de las del soluto. Por tanto, el
número de platos teóricos de una columna no es fijo y puede variar
de unos solutos a otros.
 Variables cinéticas que influyen en el
ensanchamiento de banda
Tabla 1.Variables que influyen en la eficacia de la columna

Variable Símbolo Unidades

habituales

Velocidad lineal de la fase móvil u cm*s-1

Coeficiente de difusión en la fase móvil* DM cm2*s-1
Coeficiente de difusión en la fase DS cm2*s-1
estacionaria*

Factor de retención k´ sin unidades

Diámetro de la partícula del relleno dp cm
Espesor del recubrimiento líquido en la df cm
fase estacionaria
 Variables cinéticas que influyen en el
ensanchamiento de banda

INFLUENCIA DEL CAUDAL DE LA FASE MÓVIL

La magnitud de los efectos cinéticos sobre la eficacia de la columna

depende claramente del tiempo de contacto entre la fase móvil y la fase
estacionaria, el cual a su vez depende del caudal de la fase móvil.

Por esta razón, los estudios de eficacia generalmente se han realizado

determinando la altura del plato teórico (H) en función de la velocidad de
la fase móvil. (µ)
 Variables cinéticas que influyen en el
ensanchamiento de banda
INFLUENCIA DEL CAUDAL DE LA FASE MÓVIL

Una de las más utilizadas es la Ecuación de Van Deemter:

B
H  A C

Donde:

H: altura de plato, cm

μ: velocidad lineal de la fase móvil, cm/s

A, B, C: coeficientes que se relacionan respectivamente con los

fenómenos de los caminos múltiples de flujo, la difusión longitudinal
y la transferencia de masa entre las fases
 Variables cinéticas que influyen en el
ensanchamiento de banda
INFLUENCIA DEL CAUDAL DE LA FASE MÓVIL
Una de las más utilizadas es la Ecuación de Van Deemter:

B
H  A C

Se debe buscar
μóptimo que ofrezca

Hmínima y Nmáxima

Figura 3. Gráfica de Van Deemter para una columna cromatográfica

rellena cuya FE es líquida
 Ejercicios
Ejercicio 1:
Con un cromatógrafo GL y con una columna de relleno de 40 cm se
obtuvieron los datos siguientes:
Compuesto tr (min.) w (min.)
Aire 1,9 --------
Metilciclohexano 10,0 0,76
Metilciclohexeno 10,9 0,82
Tolueno 13,4 1,02
Calcular:
(a) Los tiempos de retención ajustados y los factores de retención para
cada componente
(b) El número de platos teóricos promedio y su desviación estándar
(c) La altura promedio para los platos de la columna
(d) Coeficiente de selectividad y la resolución entre cada par de picos
adyacentes
 Ejercicios
Ejercicio 1:
Solución:
Compuesto tr (min.) w
(min.)
t´R
(min)
k´ N°
platos
 ij Rs ij
Aire 1,9 --------
Metilciclohexano 10,0 0,76 8,1 4,26 2770
1,11 1,14
Metilciclohexeno 10,9 0,82 9,0 4,74 2827
1,29 2,72
Tolueno 13,4 1,02 11,5 6,05 2761

b) Número de platos teóricos promedio = 2786 y desviación estándar =

36
c) Hpromedio = 0,14 mm
 Ejercicios
Ejercicio 2:
Durante la realización del método para la determinación de trihalometanos
en el agua potable se utilizo un patrón único proporcionando los resultados
siguientes:
Trihalometano Concentración Área del pico
(ppb)
CHCl3 1,30 1,35*104
CHCl2Br 0,90 6,12*104
CHClBr2 4,00 1,71*104
CHBr3 1,20 1,52*104
El análisis del agua potable de un manantial proporcionó áreas de
1,56*104, 5,13*104, 1,49*104 y 1,76*104 para CHCl3, CHCl2Br, CHClBr2 y
CHBr3, respectivamente. Indique la concentración de cada uno de los
trihalometanos en la muestra de agua.
 Ejercicios
Ejercicio 2:

Solución:

Trihalometano Concentración en la
muestra (ppb)
CHCl3 1,50
CHCl2Br 0,75
CHClBr2 3,49
CHBr3 1,39