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CRIOPRESERVACIÓN DE

SEMEN DOSIS Y
ALMACENAMIENTO
Criopreservación
La criopreservación de
semen y la utilización del
Es el proceso en el cual las semen congelado mediante
células o tejidos son inseminación artificial ha
congelados a muy bajas causado un gran impacto Sin embargo,
temperaturas, sobre la reproducción constantemente se
generalmente entre -80 °C animal. modifican los protocolos
y -196 °C de congelación a fin de
obtener mejores
resultados en relación a la
supervivencia espermática
para disminuir las y fertilidad del semen al
Innumerables crías de
funciones vitales de una descongelado.
diferentes especies han
célula o un organismo y nacido a partir del uso de
poderlo mantener en semen congelado.
condiciones de vida
suspendida por mucho
tiempo.
El éxito de la criopreservación
del semen depende de varios
factores que interactúan entre
sí como:

La tasa de enfriamiento, la
El crioprotector, El tipo de tasa de descongelación y el
diluyente. empaque.
El semen después de refrigerado a
En la actualidad la técnica congelación 5-8°C sobrevive por 24-48 horas y aún
se ha estandarizado y el semen se 96 horas sin que haya disminución del
almacena indefinidamente en nitrógeno porcentaje de fertilidad.
líquido a -198°C.

También puede ser congelado


con éxito en pajuelas.
MANEJO DEL SEMEN LUEGO DE LA OBTENCIÓN

• Se debe evitar el shock térmico por frío o Si el semen no se va a diluir dentro de las 2 horas
sobrecalentamiento, la contaminación por agua, siguientes, se lo puede dejar en un recipiente
orina o agentes químicos, la excesiva agitación y pequeño cerrado, en un lugar oscuro a temperatura
la exposición al aire o la luz solar directa. ambiente.

Luego de obtenido; el semen se enfría gradualmente


colocando el frasco o tubo en un recipiente con agua
a una temperatura cercana a la corporal 26 - 33 º C y
poniendo luego ese recipiente en la heladera a
temperaturas entre 3 - 8 ºC.
Para la inseminación
artificial se usa
Semen diluido, refrigerado o congelado, antes que semen
fresco y no diluido, por las siguientes razones:

1. EL semen diluido se 2. Se puede fecundar más vacas


almacena mejor y mantiene con solo 1 eyaculado y más aún si
por más tiempo su fertilidad se diluye.

4. Las soluciones buffer


3. Los espermatozoides están protegidos de mantienen un adecuado
cambios bruscos de temperaturas pH del semen

5. Les es proporcionado nutrientes y los antibióticos


alargan la viabilidad espermática, mejoran la
fertilidad y controlan el desarrollo de algunas
bacterias.
DILUYENTES O EXTENSORES
Compuestos químicos o conjunto de sustancias que tienen
como objetivo preservar la viabilidad y fertilidad del semen.

FUNCIONES
- Aumenta el volumen del eyaculado
- Aporta sustratos como fuente de energía para el metabolismo
espermático.
- Protege contra los efectos nocivos de un enfriado rápido.
.

CARACTERÍSTICAS
- Isotonicidad con el eyaculado
- Capacidad buffer para pH 6,5-7,5
- Capacidad para prevenir shock térmico
- Bajo costo
- Fácil preparación
Componentes básicos de un
diluyente:

AGUA DESTILADA: Actúa como solvente para los SUSTANCIAS BUFFER Y NO IÓNICAS: (Disueltas
componentes semanales y del diluyente. para mantener la osmolaridad y el PH del medio).

AGUA BIDESTILADA: para eliminar la presencia de


Ejemplo de sustancias buffer: citrato de sodio
metales pesados en solución, que son dañinos
dihidratado, glutamato monosódico, etc.
para el espermatozoo.
REQUISITOS DE UN DILUYENTE
Evitar el
desperdicio de
espermatozoides

Estar libres de Poseer presión


productos o osmótica isotónica com
sustancias o la de la sangre y ser
bacterianas o capaz de conservarla
gérmenes que sean durante el
nocivos para los almacenamiento a un
nivel aproximado
zoospermios

Proporcionar un
Aumente el equilibrio adecuado
de elementos
número de dosis esenciales para la
por inseminación vida de las células
espermáticas.
AGREGADO DE ANTIBIÓTICOS
Esta ampliamente demostrado que el
agregado de antibióticos a los diluyentes de
semen aumenta la viabilidad de los
espermatozoides y elimina microorganismos
del tipo del Campylobacter (vibro fetus).
El agregado de 1000 UI de penicilina y 1000
mg de Estreptomicina/ ml de diluyente
controlan con efectividad el desarrollo
bacteriano en semen, mejoran la tasa de
concepción en semen de baja calidad en un 10
-15 %.

El agregado de 300 mg de sulfanilamidas por


cada 100ml de diluyente Citrato produce un
significativo aumento en la viabilidad del
semen y no perjudicaba la tasa de concepción.
AGENTES CRIOPROTECTORES
Sustancia de bajo punto de congelación y
diferente composición que cubre el material a
conservar, protegiéndolo.

Reducir el efecto solución diluyente. Limita la formación de hielo

Deben ser efectivos en curvas de


No es tóxico
enfriamiento lento.

Minimiza daños mientras durante la Penetran fácilmente en la membrana


congelación celular.
AGENTES
CRIOPROTECTORES
Ejemplo:
• Glicerol
• Acido glutámico

Glucosa, sacarosa
• Lactosa
• Meso inositol
ACCIÓN DE LOS AGENTES CRIOPROTECTORES

Los agentes crioprotectores penetran la célula (glicerol)

EL GLICEROL
penetra rápidamente la célula como un no- electrolito reduce la
concentración intracelular de solutos.

El semen diluido es enfriado a 5 grados, se le agrega glicerol y luego se


deja un intervalo de 1 a l0 horas para "equilibración”

Esta etapa permite la entrada de glicerol a la célula y completar así su acción


protectora.
En función de las características de
las células espermáticas, como son
los coeficientes de permeabilidad
celular, temperatura y relación
superficie- volumen célula
espermática, se comportan de
manera muy similar a los
linfocitos.
En función de determinadas Por lo tanto, ya estamos
características de las células incorporando una velocidad
que vamos a procesar, de enfriamiento de
obtenemos una aproximadamente 15 a 25 o
determinada curva de 30ºC de descenso/minuto
enfriamiento. en la temperatura.

CURVA DE
ENFRIAMIENTO Al manejar velocidades de enfriamiento
de estas características, no necesitamos
usar congeladoras automáticas, y
podemos colocar la muestra en vapores
de nitrógeno líquido.
CURVA DE ENFRIAMIENTO

Para evitarla
debemos
Las células tienen deshidratar a las
alto contenido células
fíbrico, por lo tanto aprovechando la
debemos evitar la propiedad que
cristalización tienen de
intracelular comportarse como
membranas
semipermeables
TIPOS DE EVASES

PAJUELAS
• Consiste en ampollas de
vidrio, de 1 cm de
(PAILLETTES) • Es la forma más económica
de procesamiento de
capacidad. Fue el primer • Existen básicamente tres semen, así como la de
método de envasado de tipos de pajuelas: La conservación, ya que ocupa
semen para congelar; pajuela francesa o mucho menos espacio que
actualmente no se las pajuelas o ampollas
convencional de 113 mm de
utiliza debido a su mayor
costo.
largo y un volumen de 0.5
cc. (Es la más común)
PELLETS O
AMPOLLAS PASTILLAS
TÉCNICA DE CONGELACIÓN EN PAJUELAS

Diluyentes comerciales: Triladyl y Biociphos son los


más usados.

El diluyente que utilizan lo colocan en un baño María a


30ºC. Luego colocan el eyaculado en el baño junto con el
diluyente durante 5 o 6 minutos para que se equilibre la
temperatura.

homogeneiza un poco y muy lentamente, y mientras se


realiza el conteo de células espermáticas (en cámara de
Neubauer), para determinar que volumen o grado de
dilución final del eyaculado vamos a incorporar.

Normalmente se manejan diluciones de 1 en 14 a 18.


Entonces, un eyaculado de 10ml, lo podemos llevar con una
dilución de 1 en 15 a un volumen total de 160 ml, lo que nos
va a estar dando más o menos entre 300 y 320 pajuelas o
dosis.
• Debemos asegurar que • Para lograr esto, • Luego podemos
a la descongelación debemos incorporar envasar las pajuelas.
existan 10 millones de en la pajuela entre 30 • Las pajuelas deben ser
células espermáticas y 40 millones de selladas y deben llevar
vivas con motilidad células totales. impreso el nombre del
normal. reproductor, un código
y la fecha de la colecta.
Las pajuelas se colocan en se llevan directamente a
se dejan 3 horas como
unos rackets, en un número temperatura de 5ºC
mínimo y un máximo de 18.
de 100 poniéndolas en la heladera

estas pajuelas en los rackets


Luego, las pajuelas se sacan, Esto sirve para permitir la
queden sumergidos en los
y se llevan a realizar la curva equilibración de las células
vapores de nitrógeno que
de enfriamiento espermáticas.
están a 120ºC bajo cero.

Dejamos la pajuela unos 10


o 15 minutos, y nos
aseguramos que desde +5ºC
a –120ºC la velocidad de
PROCESO DE ENFRIADO
enfriamiento oscile entre 15
y 30ºC/minuto. Luego se
almacena en los tanques.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA CRIOPRESERVACIÓN DE ESPERMA

1. Posibilita inseminaciones selectivas, 1. El proceso de congelado y


dado que el semen congelado puede descongelado mata por lo menos un
ser almacenado por largos períodos de 10% (20 a 50%) de los espermatozoos,
tiempo o puede ser enviado a grandes aun empleando las mejores técnicas.
distancias. 2. El equipo necesario y el nitrógeno
2. Permite la creación de bancos de líquido son costosos. El costo del
semen como reserva para demandas mantenimiento de temperatura
futuras, aunque estas sean usualmente aumenta al aumentar el tiempo en el
más imaginarias que reales. El macho cual el semen puede ser utilizado.
puede ser eliminado luego de que "n" 3. Se necesita una mayor habilidad
cantidad de dosis son procesadas y técnica para organizar y realizar un
almacenadas adecuado programa de semen
congelado.

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