Ensayo ORAC

• Se preparan 3 ml de la siguiente solución:

1. 21uL solución de fluoresceína

2. 2899 uL buffer fosfato 75mM
3. 50 uL AAPH
4. 30 uL muestra o Trolox 500 mM

La fluorescencia se registro cada 60 segundos a 37ºC con el espectrofluorimetro Perkin

Elmer LSS5
Las lecturas se dan a una onda de excitación de 493nm y una longitud de onda de emisión
de 515nm.

𝐴𝑈𝐶𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 − 𝐴𝑈𝐶𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑂𝑅𝐴𝐶 = 𝑓 𝑇𝑟𝑜𝑙𝑜𝑥
𝐴𝑈𝐶𝑡𝑟𝑜𝑙𝑜𝑥 − 𝐴𝑈𝐶𝑐𝑜𝑛𝑡𝑟𝑜𝑙
Donde:
• AUC = área bajo la curva
• F = factor de dilución de extractos
• TROLOX= acido 6-hidroxi 2,5,8-tetrametil cromano3-carboxílico
• AAPH = (2,20-azo-bis 12-amidinopropano)dihidroclorico(fuente de radicales hidroxilos)
• BMCD = p-metilciclodextrina

ORAC hidrofílico:
La dilución de extractos hidrofílicos son preparados en agua ultra pura

ORAC lipofílico:
Los extractos lipofílicos se Re suspenden en 250 uL de acetona y se diluye en 750 uL de una
solución de BMCD al 7%

Nota: EL BMCD al 7% es utilizado como blanco y para preparar el trolox y las diferentes
diluciones de muestra.
Análisis Estadístico:

Todas las determinaciones se realizaron por triplicado y se expresaron en

valores como los promedios +- la desviación estándar.

Las diferencias estadísticas se determinaron mediante un análisis de

varianza (ANOVA) y test de mínima diferencia significativa (LSD) con un
nivel de significancia de 0.05 para comparar las medias en cada una de
las variables analizadas ( fenoles totales y ORAC)

Para todo ello se utilizo el paquete estadístico Statgraphics Centurion XV.