EXTRACCIÓN DE ADN POR

MÉTODOS SENCILLOS Y MAS

USADOS.

LIC. TM. LUIS AUGUSTO SÁNCHEZ CHÁVEZ

 INTRODUCCION
• LA EXTRACCIÓN DEL ADN ES EL PRIMER PASO EN TODA TÉCNICA DE
BIOLOGÍA MOLECULAR. EXISTEN DIFERENTES TÉCNICAS PARA ELLO,
DESDE LAS MAS ECONÓMICAS CASERAS PERO DE BAJA PUREZA, ASÍ
COMO LOS COMERCIALES QUE PERMITEN UNA ALTA
CONCENTRACIÓN DE ADN EN LA EXTRACCIÓN Y UNA ALTA PUREZA.
TANTO EL ADN GENÓMICO Y ADN PLASMÍDICO USAN PRINCIPIOS
PARECIDOS PARA QUE SEAN EXTRAÍDOS.
 MUESTRAS EXTRACCION DEL ADN

• SANGRE
• SEMEN
• SALIVA
• CABELLO
• HUESO
• DIENTE
• TEJIDO
CONDICIONES DE COLECTA DE MUESTRA DE SANGRE
• UTILIZAR AGUJAS DE CALIBRE APROPIADO, RESPETAR LA RELACIÓN
MUESTRA/ANTICOAGULANTE Y HOMOGENEIZAR CORRECTAMENTE LA
MUESTRA PARA EVITAR LA HEMOLISIS Y/O COAGULACIÓN,Y LA
CONTAMINACIÓN BACTERIANA. UNA VEZ OBTENIDA LA MUESTRA ES
IMPORTANTE EVITAR MOVIMIENTOS BRUSCOS DURANTE EL TRANSPORTE.
• LAS MUESTRAS PUEDEN MANTENERSE POR UNOS DIAS A 4 OC DESPUÉS DE SU
COLECTA. SI SE CONGELA LA MUESTRA A -20 °C, DEBE DESCONGELARSE A
TEMPERATURA AMBIENTE Y PROCESARSE EN SU TOTALIDAD PUES UNA VEZ
DESCONGELADA, INICIA LA HEMOLISIS, POR ELLO ES ACONSEJABLE HACER
ALICUOTAS.
 HOMOGENIZACION DE LA MUESTRA

• LA HOMOGENIZACIÓN, MECÁNICA O QUÍMICA, CONSISTE

EN ROMPER LAS UNIONES ENTRE LAS CÉLULAS PARA
FACILITAR LA INTERACCIÓN CON LAS SOLUCIONES DE LISIS
QUE AYUDAN A LIBERAR EL MATERIAL GENÉTICO.
 EXTRACCION DE ADN POR METODO FENOL
CLOROFORMO

• TÉCNICA ORGÁNICA (SOLVENTES)

• ADN DE MUY BUENA CALIDAD Y CANTIDAD.
• PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS SON EXTRAÍDAS EN LA FASE ORGÁNICA
(FENOL), DESPUÉS SE REALIZA DIGESTIÓN CON PROTEINASA K
• EL CLOROFORMO PERMITE QUE TODO EL FENOL PUEDA SER
LAVADO.
 DESVENTAJAS

• REACTIVOS ALTAMENTE TÓXICOS

• PERDIDAS SIGNIFICATIVAS DE ADN Y MUCHO MAS SI

ESTA DEGRADADO.
 EXTRACCION ORGANICA DE ADN

• COLOCAR MUESTRA EN EL TUBO – HOMOGENIZADO.

• AÑADIR SDS (DETERGENTE) Y PROTEINASA K.
• AÑADIR EL FENOL CLOROFORMO.
• RECUPERACIÓN DEL ADN.
 EXTRACCION INORGÁNICA DE ADN - CHELEX

• PREVIENE LA EXTRACCIÓN DE ADN POR QUELACION DE LOS IONES

METÁLICOS DURANTE DE EBULLICIÓN AL 5 %.
• TIENE COPOLIMEROS DE ESTIRENO DIBENCENO –IONES
IMINODIACETATO.
• LOS REACTIVOS NO SON TOXICOS Y NO SE PIERDE ADN.
EXTRACCIÓN DE ADN POR MÉTODOS COMERCIALES
• LOS MÉTODOS COMERCIALES SON
MAS RAPIDOS DE REALIZAR Y USAN
EN COMUN UNAS COLUMNAS DE
SILICA QUE CON AYUDA DE
GUANIDINA “ATRAPA” AL ADN Y
POR UNA SERIE DE LAVADOS SE
PURIFICA EL ADN Y LUEGO ES
ELUÍDO A UN RECIPIENTE NUEVO.
• PROCEDIMIENTO DE
EXTRACCIÓN DE ADN
POR MÉTODO
COMERCIAL MARCA
QIAGEN.