Prueba ELISA

César S. Díaz Suarez -1745027-3647

Laura Valentina Gil Burbano -1742445-3647

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Prueba ELISA - Escuela de Bacteriologia y Lab. Clinico.
Contenido
• Introducción.
• Historia.
• Generaciones de ELISA.
• Tipos de ELISA.
• Etapas de la prueba
• Prueba.
• Kit

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Prueba ELISA - Escuela de Bacteriologia y Lab. Clinico.
Introducción
• ELISA (Enzyme-Linked InmunoSorbent Assay).
• Complejo anticuerpo-antigeno marcado con una
enzima.
• Sustrato cromógeno – enzima.
• .Fosfatasa alcalina, peroxidasa de rábano picante y b-
galactosidasa.

Fab
Cadenas
ligeras

Papaína
Cadenas
pesadas Fc
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Cromógenos utilizados
Fosfatasa alcalina
• Cromógeno o sustrato: p-nitrofenil fosfato
• Viraje: amarillo
• Longitud de honda: se mide a 460 nm.

Peroxidasa
• Cromógeno o sustrato : peroxido de hidrogeno-0-fenilendiamina
• Viraje: amarillo o naranja
• Longitud de honda: se mide a 490 nm.

𝜷-Galactosidasa
• Cromógeno o sustrato: ONPG (0-nitrofenil-𝛽-0-galactopironósido)
• Viraje: amarillo
• Longitud de honda: se mide a 420 nm.

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 Historia
• Técnica radioinmunoensayo (1959)
Sussman yalow y Solomon Berson.

• Ensayos inmunoenzimaticos
(1970) Perlan y Wemen.

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Tipos de ELISA
DAS

Competitivo

Sándwich
Tipos de
HADAS
ELISA

No No
competitivo directo

Directo
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ELISA competitivo
• También conocido como ELISA de inhibición o inmunoensayo
competitivo, mide la concentración de un antígeno mediante la
detección de interferencia señal.

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Tipos de ELISA
• Directo

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Tipos de ELISA
• Indirecto

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Tipos de ELISA
• Emparedado
“Sandwich”

“HADAS”

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Prueba ELISA - Escuela de Bacteriologia y Lab. Clinico.
Tipos de ELISA
• Emparedado
“Sandwich”

“HADAS” “DAS”

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Generaciones de ELISA
• Primera generación:

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Generaciones
• Segunda generación:
de ELISA

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Generaciones
• Tercera generación:
de ELISA

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Generaciones
• Cuarta generación:
de ELISA

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 VIH
• El VIH o virus de la inmunodeficiencia humana, es un retrovirus que ataca el
sistema inmunitario de la persona infectada siendo el causante de la enfermedad
inmunitaria SIDA (Síndrome de inmunodeficiencia adquirida).
• El VIH actúa atacando y destruyendo a los linfocitos CD4, encargados de la
fabricación de anticuerpos para combatir infecciones causadas por estos agentes
externos.

• Más virulento y
VIH 1 agresivo.
• Más común.

• Se encuentra en África
occidental y en países con
VIH 2 vinculo epidemiológico.
• Menos contagioso y agresivo.
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 Ventana Inmunológica del
HIV 12-12 días
ARN-VIH,
ADN proviral

Ventana inmunológica

Anti-HIV 1 (𝟏𝒂 𝐆eneración)

11-13 días
Anti-HIV 1+2 (𝟐𝒂 Generación) Ag P24
Anti-HIV 1+2 mejorados (𝟑𝒂 Generación)
Agpb 24 HIV/DNA
HIV/RNA
3-4 semanas
(22días)
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
Anticuerpos
Días
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Generaciones de ELISA en
VIH
Primera Segunda Tercera Cuarta
generación generación generación generación
Antígeno Lisado viral Lisada y Recombinan. Recombinan.
usado recombinante Peptidos sin. Peptidos sin.
Tipo ELISA Indirecto Indirecto Emparedado Indi y Dire
Anti-VIH / Ig Ig G Ig G Ig G – Ig M Ac – Ag –P24
Sensibilidad + ++ +++ ++++
Especificidad + +++ +++ +++
Año origen 1985 1987 1989 1997

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ETAPAS DE LA PRUEBA.
• Pre-analítica:

• Temperatura ambiente
• Agua destilada o desionizada (no lo trae el kit).
• No combinar reactivos de distintos lotes.
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ETAPAS DE LA PRUEBA.
• Analitica:
Eliminación
Identificación
exceso

Tapizar (PBS, Muestra

C.P
pH) problema

Incubación Incubación
(Temperatura) /Lavado

Eliminación Sustrato
excesos cromógeno
(PBS,Det) (Luz)
Solución
Bloqueo (SBF)

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ETAPAS DE LA PRUEBA.
• Post-analítica:

INTERPRETACION DE RESULTADOS
REACTIVO Se detecta la presencia de SIDA.
antígeno y/o anticuerpo del
agente etiológico T CD4 = o
correspondiente. <200
células/μL
NO REACTIVO No se detecta la presencia de
antígenos y/o anticuerpos
del agente etiológico
correspondiente.

-Zona gris: VALORES DE REFERENCIA

Reactivo >1.00
Zona gris 0.90 0.99
Negativo 0.00 0.89 21
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Bibliografía
• https://www.infosida.es/que-es-el-vih.
• http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-
ELISA-protocolos.pdf
• https://docplayer.es/10673792-Nuevo-algoritmo-
diagnostico-de-la-infeccion-por-vih.html
• https://www.equiposylaboratorio.com/sitio/contenidos_m
o.php?it=10049

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